■徐進(jìn)棟 李 玲 修 華 朱連勤 朱風(fēng)華

（1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)與信息科學(xué)學(xué)院，山東青島 266109；2.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科技學(xué)院，山東青島 266109；3.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)外國(guó)語(yǔ)學(xué)院，山東青島 266109；4.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東青島 266109）

近幾年來(lái)由于全球氣候變暖，糧食及飼料受霉菌毒素污染較為普遍，尤其由黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生的黃曲霉毒素具有較強(qiáng)的致癌、致畸和免疫毒性[1-2]，因其性質(zhì)較為穩(wěn)定，很難消除，動(dòng)物采食被污染的飼料會(huì)降低生產(chǎn)性能，使肝臟和腎臟機(jī)能受到損傷[3-4]，并且可以殘留于肉、蛋、奶等畜產(chǎn)品中，隨著食物鏈的傳遞和富集進(jìn)而威脅人類健康。據(jù)世界糧農(nóng)組織（FAO）統(tǒng)計(jì)，全世界25%以上的糧食作物受到霉菌毒素不同程度的污染，其中黃曲霉毒素的污染尤為嚴(yán)重[5-8]，據(jù)程傳民2013年調(diào)查全國(guó)飼料原料黃曲霉毒素的污染率為25.00%～80.80%[9]，2014年本實(shí)驗(yàn)室對(duì)山東省飼料原料黃霉菌毒素調(diào)查結(jié)果顯示，污染率為45.24%，含量為2.0～184.07μg/kg[10]。為了滿足畜牧業(yè)生產(chǎn)需要，將飼料中霉菌毒素的污染降低到最低限度，本文對(duì)2015年山東省飼料黃霉菌毒素的污染情況繼續(xù)跟蹤調(diào)查，以便對(duì)養(yǎng)殖業(yè)和飼料生產(chǎn)企業(yè)提供科學(xué)的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集與制備

本試驗(yàn)所用樣品，采集時(shí)間為2015年1～12月份，來(lái)源于山東省各地規(guī)?；瘎?dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)、飼料廠，樣本總數(shù)量1 556份，其中，玉米312份、DDGS187份、膨化玉米7份、玉米粉8份、玉米蛋白粉69份、玉米胚芽餅粕31份、玉米皮12份、檸檬酸渣13份、大麥22份、麩皮7份、小麥34份、高粱18份、菜籽餅粕15份、花生餅粕159份、豆粕12份、棉籽粕14份、椰子粕5份、大豆皮5份、醬油糟10份、米糠25份、牛配合飼料168份、禽配合飼料330份、豬配合飼料93份。樣品采集方法按GB/T14699.1—2005進(jìn)行。樣品采集后，用四分法縮減取樣約200 g，粉碎過(guò)20目篩后，裝入自封袋內(nèi)，貼好標(biāo)簽，標(biāo)明樣品名稱、采樣時(shí)間、采樣地點(diǎn)，置于-20℃冰箱保存，備用。

1.2 檢測(cè)項(xiàng)目與方法

利用直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定飼料中黃曲霉毒素 B1（AFB1）值，采用 AgraQuant?黃曲霉毒素 B1檢測(cè)試劑盒提供的方法檢測(cè)，其定量限和檢出限均為2.0μg/kg。按照試劑盒中固體樣品前處理方法進(jìn)行樣品的萃取，保證樣品萃取液的pH值在6～8之間，除了玉米蛋白粉和DDGS萃取液偏酸性，需用1摩爾的NaOH溶液調(diào)pH值至7外，其他樣品均在要求范圍之內(nèi)。本方法對(duì)不同原料的回收率分別是：玉米91%～102%；大豆87%～114%；小麥87%～103%。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)分析C.V≤10%（n=45）。MK3酶標(biāo)儀為美國(guó)Thermo公司生產(chǎn)。

1.3 限量值和參考標(biāo)準(zhǔn)

參考《GB 13078—2001》飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，AFB1在飼料原料中玉米、花生餅（粕）、棉籽餅（粕）、菜籽餅（粕）中的限量值為≤50 μg/kg，豆粕≤30 μg/kg，沒(méi)有AFB1限量標(biāo)準(zhǔn)的其它原料均參照玉米的標(biāo)準(zhǔn)。小雞、小鴨、小豬配合飼料及濃縮飼料、奶牛精料補(bǔ)充料≤10μg/kg，大雞、大豬配合飼料及濃縮飼料≤20μg/kg，大鴨配合飼料及濃縮飼料≤15μg/kg，肉牛精料補(bǔ)充料≤50μg/kg。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS9.3軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，描述性統(tǒng)計(jì)量采用means過(guò)程，頻數(shù)統(tǒng)計(jì)采用freq過(guò)程。

2 結(jié)果

2.1 玉米及副產(chǎn)品中AFB1的檢測(cè)結(jié)果（見(jiàn)表1）

表1 玉米及副產(chǎn)品中AFB1檢測(cè)結(jié)果

玉米中AFB1污染率較低，玉米副產(chǎn)品中AFB1污染率最高的為玉米胚芽餅粕，其次為玉米蛋白粉、玉米粉、DDGS和玉米檸檬酸渣，再其次為膨化玉米、玉米皮，所有的玉米副產(chǎn)品中AFB1含量均不超標(biāo)。

2.2 麥類及副產(chǎn)品中AFB1的檢測(cè)結(jié)果（見(jiàn)表2）

表2 麥類及副產(chǎn)品中AFB1的測(cè)定結(jié)果

麥類及副產(chǎn)品中AFB1檢出率最高的是大麥，其次是小麥，再次是麩皮，未檢出。大麥和小麥中AFB1分別檢出一份樣品，含量為3.90、5.30μg/kg，都不超標(biāo)。

2.3 高粱中AFB1的檢測(cè)結(jié)果

檢測(cè)18個(gè)高粱樣品，AFB1檢出率為零。

2.4 餅粕類飼料中AFB1的檢測(cè)結(jié)果（見(jiàn)表3）

椰子粕AFB1檢出率最高，為100.00%，超標(biāo)率為60.00%?；ㄉ炂葾FB1檢出率為87.42%，超標(biāo)率為33.09%。棉籽粕和菜籽餅粕AFB1檢出率分別為35.71%和20.00%，棉籽粕不超標(biāo)，菜籽餅粕超標(biāo)率為33.33%。豆粕和大豆皮均未檢出。

表3 餅粕類飼料中AFB1的測(cè)定結(jié)果

2.5 糟糠類飼料中AFB1的檢測(cè)結(jié)果（見(jiàn)表4）

表4 糟糠類飼料中AFB1的測(cè)定結(jié)果

醬油糟AFB1檢出率較高，為60.00%，不超標(biāo)。米糠AFB1檢出率為12.00%，也不超標(biāo)。

2.6 配合飼料中AFB1的檢測(cè)結(jié)果（見(jiàn)表5）

大豬配合飼料AFB1檢出率最高，為73.98%，超標(biāo)率為1.85%。肉牛配合飼料AFB1檢出率為51.05%，不超標(biāo)。小鴨和大雞配合飼料AFB1檢出率分別為33.33%、31.98%，小鴨配合飼料不超標(biāo)，大雞配合飼料超標(biāo)率為3.64%。小雞、小豬、大鴨配合飼料檢出率較低，分別為25.49%、20.00%、15.63%，超標(biāo)率分別為7.69%、50.00%、0.00%。奶牛配合飼料AFB1未檢出。

表5 配合飼料中AFB1的測(cè)定結(jié)果

3 討論

季海霞等[11]對(duì)2015年全國(guó)1～6月份飼料檢測(cè)結(jié)果表明，玉米AFB1污染率為76.19%，最高含量為10.27 μg/kg，玉米副產(chǎn)物污染率為100%，最高含量為14.42 μg/kg，玉米及副產(chǎn)物的超標(biāo)率均為0.00%。本次試驗(yàn)結(jié)果顯示，玉米AFB1污染率為6.73%，最高含量為98.60 μg/kg，超標(biāo)率為14.29%。玉米副產(chǎn)物中AFB1污染率為16.67%～51.61%，最高含量為47.31μg/kg，均在限量標(biāo)準(zhǔn)以下。表明山東省玉米及副產(chǎn)物中AFB1污染率低于全國(guó)水平，污染程度高于全國(guó)水平，且污染率和污染程度均低于2014年的調(diào)查結(jié)果[10]。麥類及副產(chǎn)品中AFB1最高污染率為4.55%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于全國(guó)79.17%的水平和2014年的污染水平。高粱AFB1檢出率為0.00%，同于2014年，表明是較為安全的飼料原料，可以放心使用。糟糠類飼料中醬油糟檢出率較高，為60.00%。但最高含量?jī)H為7.68μg/kg，也較為安全。餅粕類飼料中椰子粕AFB1污染率為100.00%，超標(biāo)率60.00%，較為嚴(yán)重；其次花生餅粕和菜籽餅粕污染率分別為87.42%、20.00%，超標(biāo)率為33.09%和33.33%。椰子粕的主要產(chǎn)地為印尼和菲律賓，是典型的熱帶雨林氣候，年平均溫度24～28℃，降水量豐富，很適合黃曲霉的生長(zhǎng)繁殖，導(dǎo)致椰子粕AFB1污染率及超標(biāo)率較高；花生是我國(guó)主要的油料作物和純出口優(yōu)勢(shì)農(nóng)產(chǎn)品，但花生極易受黃曲霉毒素污染[12-13]，黃曲霉毒素污染可發(fā)生在生產(chǎn)、儲(chǔ)藏、加工等環(huán)節(jié)，因此花生粕AFB1污染率較高在所難免。

配合飼料中AFB1污染應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注豬、雞配合飼料。污染較為嚴(yán)重的是大豬配合飼料，污染率為73.98%，超標(biāo)率為1.85%；小豬配合飼料雖然污染率僅為20.00%，最高含量為11.10μg/kg，但超標(biāo)率為50.00%，表明仔豬配合飼料污染程度較重；大雞、小雞配合飼料污染率為31.98%和25.49%，最高含量44.00、10.20 μg/kg，超標(biāo)率分別為3.64%、7.69%，值得關(guān)注。為防止配合飼料的AFB1污染，應(yīng)該加強(qiáng)飼料原料的監(jiān)管，嚴(yán)格控制AFB1含量。

4 結(jié)論

山東省飼料原料AFB1污染較輕，重點(diǎn)關(guān)注玉米和餅粕類飼料中的椰子、花生及菜籽餅粕；配合飼料應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注豬和雞配合飼料。