汪宏才+羅青平+溫國(guó)元+張騰飛+楊峻+艾地云

摘要：通過對(duì)ALV-J病毒gp85基因進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)6個(gè)湖北分離株與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的肉雞分離毒株HPRS103株核苷酸序列相似性為93.9%～98.2%，氨基酸序列相似性為88.8%～97.8%。其中HuB09XZ01株、HuB09JY03株、HuB09JY04株與HPRS103株核苷酸序列相似性達(dá)到98.1%～98.2%，氨基酸序列相似性達(dá)到97.4%～97.8%。系統(tǒng)遺傳進(jìn)化表明，湖北分離株HuB09XZ01株、HuB09JY03株、HuB09JY04株與ALV-J國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)毒株HPRS103遺傳距離最近。通過分析表明，湖北省ALV-J主要來源于肉雞，大都通過引種感染，這對(duì)于湖北省禽白血病的凈化以及家禽品種的選育具有重要參考意義。

關(guān)鍵詞：禽白血病;J亞群;相似性;進(jìn)化樹

中圖分類號(hào)：S858.31 ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ? ? ? ?文章編號(hào)：0439-8114（2015）23-5956-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.23.041

Analysis of gp85 Gene Sequences of 6 ALV-J isolates in Hubei Province

WANG Hong-cai， LUO Qing-ping， WEN Guo-yuan， ZHANG Teng-fei， YANG Jun， AI Di-yun

（Institute of Animal Husbandry and Veterinary Sciences/Hubei Key Laboratory ?of Animal Embryo Engineering and Molecular Breeding，Hubei Academy of Agricultural Sciences，Wuhan 430064，China）

Abstract： Through the analysis of gp85 gene of ALV-J virus，the nucleotide sequences of 6 strains isolated from Hubei show 93.9%～98.2% similarity to the international standard strainHPRS103 isolated from broiler，the similarity of amino acid sequences range between in 88.8%～97.8%. Hereinto，The similarity of nucleotide sequence and ?amino acid sequence between strains HuB09XZ01，HuB09JY03，HuB09JY04 and ?the international standard strain HPRS103 reached 98.1%～98.2% and97.4%～97.8% respectively.Phylogenetic tree showed that，Hubei isolates HuB09XZ01，HuB09JY03and HuB09JY04 were close to HPRS103.These results suggested that ALV-J in Hubei province mainly comes ?from broiler，and has the reference significance to poultry breeding ?in our province.

Key words：avian leukosis;subgroup J;sequence similarity;phylogenetic tree

禽白血病是由禽白血病病毒（Avian leukosis virus，ALV）引起的一種傳染性腫瘤病。1908年首次報(bào)道，至今該病已在許多國(guó)家發(fā)生和流行。中國(guó)最早是在肉雞群中發(fā)現(xiàn)此病例，近年來，蛋雞和地方雞的病例也時(shí)有報(bào)道，發(fā)病呈上升趨勢(shì)[1]。ALV可分為A～J共10個(gè)亞群，其中只有A、B、C、D、E和J亞群能感染雞。致病性ALV以A、B和J 這3 種亞群為主，也是目前中國(guó)雞群中流行最為廣泛的3個(gè)外源性病毒亞群[2]。自2008年以來，ALV-J誘發(fā)的腫瘤/血管瘤在蛋雞中形成了流行趨勢(shì)。隨后，地方雞群檢出率明顯增加，這對(duì)禽白血病的防控帶來嚴(yán)重的挑戰(zhàn)。ALV-J前病毒基因組具有典型的C型反轉(zhuǎn)錄病毒基因組結(jié)構(gòu)，即5LTR-5UTR-gag-pol- env-3UTR-3LTR。由于env基因變化大，與其他ALV env相似性低，且與致瘤性密切相關(guān)，并決定病毒感染的宿主范圍。env基因編碼2種病毒囊膜蛋白，即gp85蛋白和gp37蛋白。gp85蛋白含有病毒受體決定簇，決定亞群特異性和宿主范圍[3]。通過對(duì)已公開發(fā)表的6株ALV-J湖北地方分離株gp85基因進(jìn)行了分析，重點(diǎn)研究ALV-J病毒gp85基因的同源性，分析ALV-J流行株分子演化過程，為湖北省禽白血病的防治和凈化提供參考。

1 ?材料與方法

1.1 ?禽白血病參考株

選取湖北省ALV-J亞群6個(gè)地方分離株（HuB09-1株、HuB09XZ01株、HuB09WH02株、HuB09WH03株、HuB09JY03株、HuB09JY04株）[4， 5]、國(guó)內(nèi)其他地區(qū)ALV-J亞群參考株8株（JS09GY3株、WN100402株、HLJ13SH01株、JL093-1株、SD09DP03株、GD1109株、SX090915J株、HB09-1株），以及ALV-J國(guó)際原型毒株HPRS103株。登錄Genbank查詢各參考毒株的核苷酸和氨基酸序列。15株ALV-J病毒Genbank名稱、登錄號(hào)、分離時(shí)間以及分離地點(diǎn)見表1。endprint

1.2 ?對(duì)15株ALV-J gp85基因核苷酸及氨基酸序列進(jìn)行分析比較

應(yīng)用ClustalX、DNASTAR以及MEGA等軟件，對(duì)15株ALV-J參考株的gp85基因核苷酸序列和氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)，分析6個(gè)ALV-J湖北分離株與其它參考毒株間的相似性，并分別依據(jù)gp85基因的核苷酸序列和氨基酸序列建立系統(tǒng)進(jìn)化圖譜，進(jìn)一步分析其進(jìn)化親緣關(guān)系。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?15株ALV-J病毒gp85基因核苷酸序列和氨基酸序列分析結(jié)果

15株ALV-J病毒gp85基因核苷酸序列相似性比較見圖1，氨基酸序列相似性見圖2。通過對(duì)15株ALV-J gp85基因的核苷酸序列進(jìn)行比對(duì)分析，15株參考株的核苷酸序列相似性在93.0%～99.9%，氨基酸序列相似性在88.1%～99.6%。6個(gè)湖北分離株與國(guó)際原型毒株HPRS103株核苷酸序列相似性在93.9%～98.2%，氨基酸序列相似性在88.8%～97.8%。其中HuB09XZ01株、HuB09JY03株、HuB09JY04株與HPRS103株核苷酸相似性達(dá)到98.1%～98.2%，氨基酸序列相似性達(dá)到97.4%～97.8%。HuB09WH02株、HuB09WH03株與JS09GY3株核苷酸同源相似性在98.8%～99.2%，氨基酸相似性在97.3%～98.7%。HuB09-1株則與HLJ13SH01株、JL093-1株、SD09DP03株相似性較高。

2.2 ?15株ALV-J病毒系統(tǒng)發(fā)育樹

對(duì)15株ALV-J gp85基因的核苷酸序列和氨基酸序列分別制作系統(tǒng)發(fā)育圖譜，ALV-J病毒核苷酸序列系統(tǒng)發(fā)育樹見圖3，蛋白質(zhì)序列系統(tǒng)發(fā)育樹見圖4。

兩種方法制作的系統(tǒng)發(fā)育樹顯示，15株參考毒株分屬兩個(gè)大的分枝，湖北分離株HuB09XZ01株、HuB09JY03株、HuB09JY04株與國(guó)際ALV-J原型株HPRS103遺傳距離最近，這與潘偉等[6]對(duì)HuB09JY03株分析結(jié)果相似。而HuB09WH03株、HuB09WH02株與JS09GY3株遺傳距離最近，HuB09-1株和SX090915J株、HB09-1株同屬一組分枝。

3 ?討論

通過對(duì)ALV-J病毒gp85基因的核苷酸和氨基酸序列進(jìn)行對(duì)比分析，兩種分析方法所得結(jié)果基本一致。

ALV-J屬于種源性疾病，防治十分困難。2009年，J亞群白血病在華中局部地區(qū)蛋雞場(chǎng)大面積流行，發(fā)病率最高達(dá)到46%[7]。據(jù)彭伏虎等[8]的調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，由于湖北省缺乏相應(yīng)品種的祖代場(chǎng)，種蛋和雞苗主要從外地引進(jìn)，種源質(zhì)量難以控制。本地品種雞在選育過程中，為了提高生產(chǎn)性能，常引進(jìn)外來血液，也會(huì)造成ALV-J的傳播。因此，引種是造成ALV-J傳播的主要原因。

通過分析表明，湖北分離株主要位于進(jìn)化樹2個(gè)分支，說明在湖北地區(qū)ALV-J流行毒株存在多樣性。HuB09XZ01株、HuB09JY03株、HuB09JY04株與國(guó)際ALV-J原型株HPRS103同屬一個(gè)分支，遺傳距離近，說明湖北地區(qū)ALV-J病毒可能來源于肉雞。ALV-J最早由英國(guó)Payne于1988年從肉雞中分離得到，1999年國(guó)內(nèi)由杜巖等首次分離和鑒定到ALV-J。目前J亞群禽白血病在我國(guó)各地廣泛存在，而且該亞群病毒有很廣的宿主范圍，導(dǎo)致禽群死淘率明顯升高，生產(chǎn)性能降低等，已成為危害中國(guó)養(yǎng)禽業(yè)最嚴(yán)重的疾病之一[9]。

在中國(guó)，ALV-J不僅隨著引進(jìn)的白羽肉種雞帶進(jìn)了我國(guó)白羽肉雞群，還進(jìn)一步蔓延至我國(guó)的蛋雞和中國(guó)地方雞種。這不僅給中國(guó)規(guī)模養(yǎng)雞業(yè)帶來很大損失，也威脅到地方雞品種的種質(zhì)基因庫(kù)。隨著地方雞產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，人們正在對(duì)地方雞進(jìn)行品種改良。湖北地方雞品種較多，現(xiàn)已有不同程度的感染。因此，在引進(jìn)外來血液的過程中，需要嚴(yán)格對(duì)ALV進(jìn)行檢測(cè)，防止地方雞核心群受到ALV-J的感染。

禽白血病傳播的途徑主要有種蛋垂直傳播、疫苗污染等。因此對(duì)引進(jìn)的父母代以上的種蛋、雞苗，在引種前需對(duì)ALV-J進(jìn)行評(píng)估，以免造成重大經(jīng)濟(jì)損失。疫苗應(yīng)選擇正規(guī)廠家的產(chǎn)品，減少因接種而引起的病毒傳播。

由于禽白血病病毒容易產(chǎn)生變異，且目前尚無有效的藥物進(jìn)行控制，因此，減少禽白血病的發(fā)生主要通過凈化淘汰的方法。尤其是種雞場(chǎng)，根據(jù)ALV的增殖規(guī)律，需要進(jìn)行3～4個(gè)世代的凈化，降低ALV的陽性率。由于ALV易產(chǎn)生變異，構(gòu)筑生物安全措施勢(shì)在必行。

參考文獻(xiàn)：

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