新疆地區(qū)漢族、維吾爾族、哈薩克族丙肝患者基因型研究

陳兆云1， 劉繼文2， 孟存仁1， 張朝霞1， 張晨3

(新疆醫(yī)科大學(xué)1第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗中心， 烏魯木齊830054；2公共衛(wèi)生學(xué)院，3第五附屬醫(yī)院， 烏魯木齊830011)

摘要：目的了解新疆地區(qū)漢族、維吾爾族、哈薩克族感染丙型肝炎病毒(HCV)不同基因型的分布特點。方法應(yīng)用PCR-反向點雜交技術(shù)對669份HCV-RNA陽性的血清進行HCV基因分型，同時分析患者的民族、性別、肝臟疾病臨床類型與基因型的相關(guān)性。結(jié)果669份HCV感染血清樣本PCR-反向點雜交基因分型成功652例，17例不確定，檢出率為97.4%(652/669)，檢出7種基因型，分別為1b、2a、3a、3b、6a以及混合型1b/2a和1b/3a，其中1b型395例(60.58%)，2a型188例(28.83%)，3a型37例(5.67%)，3b型26例(3.99%)，6a型3例(0.46%)，1b/2a型2例(0.31%)，1b/3a型1例(0.15%)。不同臨床類型HCV基因型有差異，1b型患者中、重度肝炎患病率顯著高于2a型，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；漢、維吾爾、哈薩克族HCV基因型1b、2a型分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，各基因型男性與女性患者差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論新疆地區(qū)丙型肝炎病毒(HCV)患者基因型以1b型為主，其次是2a型，1b、2a型在漢、維吾爾、哈薩克族丙型肝炎患者中存在差異，1b型丙型肝炎患者較其他型丙型肝炎患者病情更嚴重。丙肝基因分型檢測對指導(dǎo)臨床用藥將具有重要的意義。

關(guān)鍵詞：新疆； 丙型肝炎病毒(HCV)； 基因型

中圖分類號：R34文獻標(biāo)識碼：A

doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2015.07.013

[收稿日期：2015-02-09]

基金項目：新疆維吾爾自治區(qū)高技術(shù)研究發(fā)展計劃資助項目(201110106)

作者簡介：馬桂芝(1973-)，女，博士，副教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：藥物分析。

基金項目：國家自然科學(xué)基金(81060365)； 新疆維吾自治區(qū)科技支撐計劃(201233134)

作者簡介：丁文歡(1986-)，女，碩士，研究實習(xí)員，研究方向：中藥化學(xué)。

Genotypinghepatitis C virus in Han Uyghur and Kazak patients in Xinjiang

CHEN Zhaoyun1, LIU Jiwen2, MENG Cunren1, ZHANG Zhaoxia1, ZHANG Chen3

(1DepartmentofLaboratory,TheFirstAffiliatedHospitalofXinjiangMedicalUniversity,

Urumqi830054,China;2CollegeofPublicHealth,XinjiangMedicalUniversity,Urumqi830054,China;

3FifthAffiliatedHospital,XinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the distribution of hepatitis C virus (HCV) genotype in Han, Uyghur and Kazak patients in Xinjiang area. Methods669 cases of HCV-RNA positive samples were typed by PCR-reverse dot blot (PCR-RDB); the correlation analysis was conducted between the genotypes and their race, sex and clinical types of liver illness. Results652 HCV cases were successfully detected in 669cases, with 17 uncertain cases. 7 genotypes were found out: 395 cases with 1b(60. 58%), 188 cases with 2a(28.83%), 37 cases with 3a(5.67%), 26 cases with 3b(3.99%), 3 cases with 6a(0.46%), 2 cases with 1b/2a(0.31%), 1 case with 1b/3a(0.15%). The prevalence of type 1b with severe HCV was significantly higher than those with 2a, and the difference was statistically significant (P<0.05). ConclusionIt′s found that HCV1b was the major genotype distributed in Xinjiang region, and 2a was the second genotype. The patients in 1b type were more serious than the patients in other type of hepatitis C. Genotyping detection had the vital significance to guide clinical treatment.

Key words: Xinjiang; hepatitis C virus; genotype

丙型病毒性肝炎是由丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCV)引起的一種傳染病，主要通過輸血、靜脈毒品注射、血液透析和器官移植等途徑傳播[1]。目前HCV有6種基因型(1～6)和11種基因亞型(1a～c、2a～c、3a～b、4a、5a、6a)，不同基因型或亞型感染的地理分布、抗病毒治療的效果及疾病嚴重程度等均存在差異。自1989年被美國發(fā)現(xiàn)以來，HCV感染逐漸成為一個世界性公共衛(wèi)生問題。目前全球丙肝患者約1.3億~1.7億人，每年因HCV感染而死亡者高達35萬人[2]，WHO報告每年全球至少322萬人感染HCV[3]。人群HCV感染率為3.0%(0.1%～10%)。在中國HCV的感染率為3.2%，約3 800萬。近年來，隨著中國丙型肝炎的診斷率不斷提高，丙型肝炎感染新報告病例也在不斷增加[4]。人群感染HCV各基因型在不同地區(qū)分布有一定差異。本研究采用PCR-反向點雜交方法對新疆地區(qū)主要民族的HCV感染患者進行基因分型，以了解本地區(qū)的HCV基因型分布特點。

1資料與方法

1.1一般資料選擇新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2014年1-12月門診和住院的HCV感染患者669例，且患者HCV病毒載量均大于1×103copies/mL，經(jīng)PCR-反向點雜交成功進行HCV基因型分型652例，平均年齡(40.06±1.03)歲，男性304例，女性348例。其中漢族475例，維吾爾族134例，哈薩克族43例。慢性丙肝患者398例，中重度肝炎168例，丙型肝炎肝硬化3例，肝癌6例，其他46例。臨床診斷均依照《中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》丙型病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)(WS213-2008)[5]。

1.2方法

1.2.1HCV-RNA定量檢測按照試劑盒使用說明書進行操作，主要包括以下過程：(1)提取血清RNA；(2)逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA；(3)PCR擴增及熒光檢測。

1.2.2HCV基因分型檢測丙型肝炎基因分型檢測嚴格按照基因分型檢測試劑盒說明書進行：(1)提取血清RNA；(2)RT-PCR擴增；(3)雜交與顯色；(4)判斷基因型。HCV 基因分型雜交膜條共12個位點，排列示意圖見圖1。

1.2.3質(zhì)量控制檢測HCV-RNA時，隨標(biāo)本加入1個陰性對照，1個臨界陽性對照，臨界陽性值為1.25×104copies/mL。基因分型檢測時，隨標(biāo)本同時加入1個陰性對照，1個陽性對照，陽性對照為1b型。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理所有數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件包進行分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗進行比較，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

圖1　排列示意圖

注：其中位點 G1～G10 為各型別檢測探針，PC為擴增控制點，CC 為顯色控制點。結(jié)果判定：CC 點、PC 點和各型別位點cutoff 值已預(yù)設(shè)在分析軟件中，分析結(jié)束后軟件自動生成各位點信號值、陰陽性和相應(yīng)的HCV型別。

2結(jié)果

2.1基因分型結(jié)果652例HCV-RNA陽性的丙型肝炎患者中，1b型395例(60.58%)，2a型188例(28.83)，3a型37例(5.67%)，3b型26例(3.99%)，6a型3例(0.46%)，1b/2a型2例(0.31%)，1b/3a型1例(0.15%)，各基因型結(jié)果見圖2。

圖2　HCV基因型實驗室結(jié)果

1:1b型；2:2a型；3:3a；4:3b型；5:6a型；6:混合型1b/2a

2.2不同性別基因型分布652例丙型肝炎患者中，男、女性患者各種基因型的構(gòu)成情況基本一致，均為1b型最多，其次為2a、3a、3b型。各基因型男性與女性患者差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表1 。

表1　不同性別HCV基因型分布/例(%)

2.3不同民族基因型差異從民族分布來看，漢、維吾爾、哈薩克族HCV基因型1b、2a型分布有差異(P<0.05)，而3a、3b型差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

2.4不同HCV-RNA載量水平基因型分布差異本組病例中，所占比例最高的2種HCV 基因型為1b型和2a型，其中1b型的平均RNA 載量為(1.41×106±1.43×105)copies/mL，2a型的平均RNA載量為(7.84×105±1.43.15×105)copies/mL，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。載量水平為(1.00×104～9.99×104)和(1.00×106～9.99×106)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表2　不同民族HCV基因型差異/例(%)

表3　不同HCV基因型病毒載量差異/例(%)

2.5HCV不同基因型在預(yù)后的差異和轉(zhuǎn)歸的差異不同臨床類型HCV基因型有差異，1b型患者中、重度肝炎患病率顯著高于2a型，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表4。

表4　不同臨床類型肝炎HCV基因型分布/例(%)

3討論

新疆HCV基因型分布比較復(fù)雜，本研究發(fā)現(xiàn)的有1b、2a、3a、3b、6a、1b/2a、1b/3a7種基因型，但主要基因型別和其他型別所占比例有較大差異，所占比例最高的仍然是1b型，其次是2a型。此結(jié)論與唐文志等[6]報道的目前我國1b 型仍為HCV 主要流行基因型的結(jié)論一致。

本研究發(fā)現(xiàn)新疆地區(qū)漢、維吾爾、哈薩克族不同性別HCV感染患者的基因型無差異。這一結(jié)論與黃前川等[7]的研究結(jié)果一致。少數(shù)民族聚居是新疆地區(qū)的特點，研究新疆主要民族的維、漢、哈族HCV基因型差異，發(fā)現(xiàn)不同民族HCV基因型分布有明顯差異，其中漢族所占比例最高，這可能與漢族人口眾多、人群流動性大、靜脈吸毒人員中HCV陽性率較高[8]、輸血及血液透析等治療措施的普及等因素有關(guān)。

感染HCV不同基因型的患者在預(yù)后的差異和轉(zhuǎn)歸的差異各有不同，本研究發(fā)現(xiàn)新疆地區(qū)HCV感染患者1b型患者中、重度肝炎患病率顯著高于2a型，該結(jié)論與嚴艷等[9]及何平等[10]研究結(jié)果相同。也說明1b型HCV對肝臟的損傷要比其他亞型嚴重的多，且臨床上其對干擾素的治療方案和周期以及治療效果也不盡相同。

此外，不同基因型的HCV-RNA 載量和丙肝的臨床類型也存在差異，本研究發(fā)現(xiàn)1b型HCV感染患者平均病毒載量高于2a型，不同載量區(qū)間也存在差異。1b型可能與病程長、年齡大、合并肝硬化或肝癌有關(guān)，而2a型則多見于慢性肝炎且不合并肝癌患者。1b型比其他型病毒在體內(nèi)存在時間更長，因長期感染而更易導(dǎo)致肝硬化或肝癌。有研究顯示，1b基因型感染與肝炎的慢性化進程和嚴重的肝臟疾病有關(guān)，推測可能與HCV型特異變異基因編碼的蛋白有較強的細胞毒作用有關(guān)[11]。Pozzato 等[12]研究發(fā)現(xiàn)不同HCV基因型與疾病嚴重程度存在相關(guān)性，Ⅱ/lb型患者谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平明顯升高(P<0.01)，Ⅱ/1b 基因型患者肝硬化的比率顯著增加(P<0.05)。但也有一些研究顯示HCV基因型與肝臟疾病嚴重程度無關(guān)[13]。劉志英等[14]對92例HCV慢性肝炎、肝硬化、肝癌中基因型的分布進行比較，尚未發(fā)現(xiàn)HCV基因型因肝病嚴重程度而有所不同，并認為疾病輕重與基因型有關(guān)的結(jié)論缺乏前瞻性研究，僅是根據(jù)不同類型病人中病毒基因型分布的不同得出的。因此，病毒基因型是否決定病程長短、病毒血癥的高低和某一基因型與肝硬化、肝癌患病率的關(guān)系方面仍有爭議。

鑒于新疆HCV基因型分布的多樣性和變化型，對該地區(qū)HCV患者的基因型進行常規(guī)檢測，可能具有重要的臨床和流行病學(xué)意義。

總之，不同基因型的HCV可能存在民族、臨床類型、病毒載量等方面的差異，因此HCV基因分型對臨床診斷與治療有重要意義。隨著HCV基因型研究的不斷深入，基因型在HCV患者的臨床類型、病程、轉(zhuǎn)歸及治療方案的選擇及預(yù)后等方面將發(fā)揮重要作用。

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(本文編輯張巧蓮)

通信作者：滕亮，男，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：藥物新劑型，E-mail: tl750212@126.com。

通信作者：周曉英，女，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：分析化學(xué)，E-mail：zhouxiaoyin4@163.com。