張協(xié)光，劉文麗，曾泳艇，鄭彥婕

(深圳市計量質(zhì)量檢測研究院，廣東深圳 518000)

葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯是一種多功能食品添加劑，在人體內(nèi)，它能與含有醇、醛、酚和巰基等基團的有毒物質(zhì)結(jié)合，形成無毒或低毒的配合物并由腎臟排出。在食品工業(yè)中將葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯作為凝固劑、膠凝劑、改良劑、防腐劑、酸化劑［1］等，廣泛用于肉類、糕點、飲料等食品中。葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯在水溶液中不穩(wěn)定，易開環(huán)轉(zhuǎn)變成葡萄糖醛酸［2］。

目前葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯的檢測分析方法主要有比色法［3-8］、氣相色譜法［9］和高效液相色譜法［10-13］。比色法操作復(fù)雜且靈敏度低，氣相色譜法與高效液相色譜法則容易產(chǎn)生干擾物。鑒于上述幾種檢測方法在實際檢測中的缺陷與不足，開發(fā)一種方便、靈敏、無干擾的分析方法具有重要的意義。乙酰法是常用的衍生法，可以改變目標(biāo)物極性或降低其沸點，采用氣相色譜分析可減少樣品干擾，降低檢出限，該方法測定葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯尚未見報道。筆者采用乙酰衍生，三氯甲烷提取，氣相質(zhì)譜聯(lián)用儀測定，建立了一種準確方便的檢測食品中葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯含量的方法，該法檢出限低，干擾少，應(yīng)用范圍廣。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀：7890A-5975C型，配有EI源，美國Agilent公司；

葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯標(biāo)準品：純度100%，美國Sigma公司；

超純水器：Milli-Q型，美國Millipore公司；

實驗所用其它試劑為分析純；

實驗用水為超純水。

1.2 樣品制備

1.2.1 樣品提取

稱取5.0 g樣品，置于100 mL 燒杯中，加50 mL去離子水，煮沸，冷卻，轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中，用乙腈定容。振蕩搖勻，轉(zhuǎn)移部分溶液到50 mL離心管中，以4 000 r／min轉(zhuǎn)速離心5 min，取上清液20 mL至蒸餾瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，于105℃烘干。

1.2.2 樣品衍生

加2 mL吡啶到蒸餾瓶中，再加2 mL乙酸酐，于135℃下反應(yīng)1.5 h。取出蒸餾瓶，放至室溫，加5 mL水，10 mL三氯甲烷，渦漩混合30 s，使兩相分離。取下層有機相，加少量無水硫酸鈉振搖，放置15 min以上，將有機相過濾后上機測定。若樣品含量超過標(biāo)準曲線范圍，可稀釋后再上機測定。

1.2.3 空白樣制備

將樣品用去離子水代替，其它操作同1.2.2。

1.2.4 標(biāo)準溶液配制

(1)葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯標(biāo)準儲備液配制。稱取葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯標(biāo)準品0.100 g(精確到0.000 1 g)，用純水溶解，加熱煮沸，冷卻后定容至100 mL，此標(biāo)準儲備液中葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯含量為1 000 mg／L。

(2)葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯標(biāo)準工作溶液配制。分別吸取葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯標(biāo)準儲備液0.10，0.20，0.50，1.00，5.00，10.0 mL，用乙腈-水(50∶50)定容至100 mL，此系列標(biāo)準工作溶液葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯的質(zhì)量濃度為1.0，2.0，5.0，10，50，100 mg／L。

1.3 儀器工作條件

1.3.1 色譜條件

色譜柱：J&W DB-35MS型石英毛細管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm，美國Agilent公司)；進樣口溫度：250℃；傳輸線溫度：240℃；程序溫度：70℃保持1 min，以20℃／min升至190℃，然后以10℃／min升至250℃，保持5 min；載氣：氦氣，恒流，流量為1.0 mL／min；不分流進樣；進樣體積：1 μL。

1.3.2 質(zhì)譜條件

電離模式：電子轟擊源(EI)，能量為70 eV；離子源溫度：250℃；溶劑延遲時間：6 min；掃描方式：選擇離子掃描方式，選擇特征離子為m／z 142，184，226。

1.4 樣品測定

以m／z 142為定量離子，m／z 184，226離子輔助定性，外標(biāo)法定量。以標(biāo)準溶液的色譜峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準曲線并計算回歸方程。依據(jù)測定的待測樣品的色譜峰面積，在標(biāo)準曲線上查出(或通過回歸方程計算)樣品中葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯的含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品處理條件的選擇及優(yōu)化

樣品煮沸后，葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯轉(zhuǎn)化成葡萄糖酸，在水溶液中達到平衡。添加乙腈沉淀蛋白，除掉大部分干擾物，衍生完畢后用去離子水除掉多余的乙酸酐。

衍生時間分別采用0.5，1.0，1.5，2.0 h進行試驗，發(fā)現(xiàn)1.5 h后衍生達到平衡，色譜峰面積穩(wěn)定。

圖1 葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯標(biāo)準物質(zhì)(10 mg／L)峰面積變化趨勢圖

采用肌醇作為內(nèi)標(biāo)，部分樣品出現(xiàn)肌醇或糖類干擾峰，因此采用外標(biāo)法，可以達到滿意效果。

2.2 色譜條件的優(yōu)化

葡萄糖酸乙酰化后產(chǎn)物呈中等極性，采用DB-35MS柱比較合適，采用15 m色譜柱可能出現(xiàn)糖醇干擾峰，因此采用30 m色譜柱，雖然測試時間增加，但是干擾峰明顯減少。葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯標(biāo)準物質(zhì)分子特征提取色譜圖見圖2，樣品色譜圖見圖3。

圖2 葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯標(biāo)準物質(zhì)分子特征提取色譜圖

2.3 質(zhì)譜定性

葡萄糖酸乙?；a(chǎn)物質(zhì)譜圖見圖4。樣品的保留時間與標(biāo)準品保持一致，定性離子的相對豐度與標(biāo)準品的相對豐度一致，m／z 142為最高峰，m／z 184相對豐度允許偏差為20%，m／z 226相對豐度允許偏差為50%，則可說明該樣品含有葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯。

2.4 線性方程、線性范圍與檢出限

按實驗方法測定1.2.4系列標(biāo)準工作溶液色譜峰面積(Y)，以峰面積對葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯的質(zhì)量濃度(X)進行線性回歸，得線性方程、線性相關(guān)系數(shù)見表1。在優(yōu)化的實驗條件下，對不同濃度的標(biāo)準樣品進行分析，當(dāng)信噪比S／N=3時對應(yīng)的目標(biāo)化合物含量為方法的檢出限，結(jié)果見表1。

2.5 精密度試驗

對9份不同的樣品重復(fù)測定6次，進行精密度試驗，結(jié)果見表2。

表2 方法的精密度試驗結(jié)果(n=6) %

由表2可見，方法相對標(biāo)準偏差在2.0%以下，精密度滿足分析方法要求。

2.6 回收試驗

對3份不同的樣品進行測定后，向樣品中加入不同含量的葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯進行回收試驗，回收試驗結(jié)果見表3。

表3 精密度試驗結(jié)果 %

由表3可見，回收率在80%～107%之間，說明方法具有較高的準確度，滿足分析方法的要求。

3 結(jié)語

采用氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)法實現(xiàn)食品中葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯的測定。樣品經(jīng)衍生后，利用質(zhì)譜定性，減少干擾物質(zhì)，保證結(jié)果的準確性。本方法簡便快速、準確高效、靈敏度高，為食品添加劑葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯的含量監(jiān)測提供了有效的技術(shù)手段，可滿足國內(nèi)外法規(guī)的限量要求。

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