畢研梅

原發(fā)性膽汁性肝硬化檢測(cè)自身免疫性肝病相關(guān)自身抗體譜的臨床意義

畢研梅①

目的：分析原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）患者中自身免疫性肝病相關(guān)自身抗體譜的情況及其相關(guān)的臨床價(jià)值。方法：選擇2009年1月-2013年12月收治的PBC患者61例（PBC組）、自身免疫性肝炎（AIH）50例患者（AIH組）和其他肝病52例患者（對(duì)照組），檢測(cè)各組的血清抗線粒體抗體（AMA）（采用間接免疫熒光法）、血清自身免疫性肝病相關(guān)自身抗體譜（采用ELISA法），包括AMA-M2、抗GP210抗體、抗SP100抗體、抗SLA抗體、抗LC1抗體、抗LKM-1抗體。結(jié)果：在PBC組中AMA、AMA-M2、抗GP210抗體、抗SP100抗體、抗LC1抗體、抗SLA抗體及抗LKM-1抗體陽(yáng)性率分別為91.8％（56/61）、86.9％（53/61）、36.1％（22/61）、24.6％（15/61）、1.6％（1/61）、0（0/61）、1.6％（1/61）；在AIH組中分別為18.0％（9/50）、6.0％（3/50）、8.0％（4/50）、14.0％（7/50）、0（0/50）、6.0％（3/50）、4.0％（2/50）；而在對(duì)照組中分別為5.8％（3/52）、1.9％（1/52）、5.8％（3/52）、11.5％（6/52）、0（0/52）、0（0/52）、0（0/52）。AMA、AMA-M2和抗GP210抗體在PBC組中陽(yáng)性率較AIH組明顯增高（P＜0.01）。而抗SLA抗體在AIH組陽(yáng)性率較PBC組明顯增高（P＜0.01）。結(jié)論：抗LC1抗體、抗SLA抗體和抗LKM-1抗體在PBC和AIH患者中的陽(yáng)性率低，檢測(cè)該3種抗體的意義不大；因此篩查抗GP210抗體和AMA對(duì)PBC的診斷具有重要的臨床意義。

原發(fā)性膽汁性肝硬化； 自身免疫性肝炎； 自身抗體

原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）的主要臨床特征以非化膿性肝內(nèi)小膽管的破壞，進(jìn)而發(fā)生膽汁進(jìn)展性淤積及血清呈現(xiàn)高滴度的AMA，屬于慢性的病因不明的特異性肝病且多見(jiàn)于女性患者；有相關(guān)研究證實(shí)了有著遺傳易感性的患者在環(huán)境因素的作用下易發(fā)生PBC[1]。由于檢測(cè)相關(guān)自身抗體技術(shù)的改進(jìn)及對(duì)PBC相關(guān)知識(shí)的不斷增長(zhǎng)，在世界范圍內(nèi)PBC的診斷率已明顯提高，但東方人群中沒(méi)有癥狀的PBC患者的數(shù)量遠(yuǎn)超現(xiàn)在的估計(jì)量，而PBC在國(guó)內(nèi)相關(guān)人群中的發(fā)病率及病死率則更多[2-3]。目前診斷自身免疫性肝?。ˋIH）主要依靠檢測(cè)患者血清AIH相關(guān)自身抗體譜，國(guó)際多中心的相關(guān)研究結(jié)果顯示，不同人種AIH患者人群中AIH相關(guān)自身抗體譜的陽(yáng)性率有著不同的較大的差別[4]。本研究通過(guò)全面系統(tǒng)檢測(cè)AIH相關(guān)自身抗體譜以探討在PBC患者及AIH患者中的陽(yáng)性分布情況及相關(guān)臨床意義，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2009年1月-2013年12月本院收治的PBC患者61例（PBC組），男6例，女55例，年齡23～76歲，平均（52.3±11.6）歲；AIH患者50例（AIH組），男12例，女38例，年齡21～74歲，平均（49.7±9.8）歲；其他肝病患者52例（對(duì)照組），男22例，女30例，年齡24～76歲，平均年齡（50.4±10.2）歲，其中25例病毒性肝炎患者、14例酒精性肝病患者、9例藥物性肝炎患者、4例脂肪肝患者。三組患者診斷標(biāo)準(zhǔn)均符合文獻(xiàn)[5]標(biāo)準(zhǔn)。各組患者收集完血清后進(jìn)行分裝，并于-80 ℃保存待用。

1.2 血清AMA檢測(cè) 患者血清AMA的檢測(cè)采用間接免疫熒光法，自身抗體檢測(cè)的抗原基質(zhì)片（肝臟馬賽克）由德國(guó)歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷公司提供。先設(shè)定陽(yáng)性及陰性對(duì)照，將血清1：100稀釋，之后與抗原基質(zhì)片進(jìn)行反應(yīng)，30 min后浸泡5 min，而后加入二抗（用熒光標(biāo)記）進(jìn)行避光孵育，30 min后再浸泡5 min，最后加甘油封片，于熒光顯微鏡下進(jìn)行判斷，抗體的滴度以≥1∶100為陽(yáng)性。

1.3 血清AMA-M2、抗GP210抗體、抗SP100抗體、抗LC1抗體、抗SLA抗體和抗LKM-1抗體的檢測(cè)

6種抗體均采用ELISA檢測(cè)（試劑由德國(guó)歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷公司提供）。將血清1∶100稀釋，加入標(biāo)準(zhǔn)品、陽(yáng)性和陰性對(duì)照，加入微孔與抗原進(jìn)行孵育反應(yīng)，30 min后洗板3次，而后加入二抗（酶標(biāo)記）進(jìn)行避光孵育，30 min后再洗板3次，加入底物使其反應(yīng)15 min后終止，最后在SUNRISE酶標(biāo)儀上讀取吸光度（A）值。以≥20 kRU/L為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以（±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以百分率表示，比較采用 χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AIH相關(guān)自身抗體譜的結(jié)果 PBC組患者AMA陽(yáng)性率為91.8％，AMA-M2陽(yáng)性率為86.9％，抗GP210抗體陽(yáng)性率為36.1％，抗SP100抗體的陽(yáng)性率為24.6％。其中PBC組患者AMA、AMA-M2及抗GP210抗體的陽(yáng)性率均較其他兩組明顯增高（P＜0.01），而在三組中抗SP100抗體的陽(yáng)性率差異不明顯（P＞0.05），而AIH組中抗SLA抗體的陽(yáng)性率較PBC組增高（P＜0.01）。見(jiàn)表1。

表1 AIH相關(guān)自身抗體譜在各組中的陽(yáng)性分布情況比較 例（％）

2.2 PBC陽(yáng)性與陰性AMA患者中的AIH相關(guān)自身抗體譜的檢測(cè)結(jié)果 PBC陽(yáng)性與陰性AMA患者中抗GP210抗體、抗SP100抗體、抗LC1抗體、抗SLA抗體和抗LKM-1抗體的陽(yáng)性率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 PBC陽(yáng)性及陰性AMA患者中AIH各相關(guān)自身抗體陽(yáng)性情況比較 例（％）

3 討論

PBC的主要臨床特征是肝內(nèi)的細(xì)小膽管發(fā)生進(jìn)行性非化膿性的破壞，同時(shí)伴有門靜脈的炎性病變，是一種慢性進(jìn)展性的自身免疫性疾患，持續(xù)性地長(zhǎng)期存在肝內(nèi)膽汁的淤積，最終演變?yōu)楦卫w維化及肝硬化。中老年女性PBC發(fā)病率居多，本組中女性患者約是男性的9倍，與文獻(xiàn)報(bào)道相符。各國(guó)學(xué)者歷經(jīng)二十多年的不斷探索，在PBC領(lǐng)域的相關(guān)研究已經(jīng)取得不錯(cuò)的成績(jī)，目前PBC可靠的動(dòng)物模型已經(jīng)可以建立，并且特征性的自身抗體——AMA在PBC患者中產(chǎn)生已經(jīng)明確，同時(shí)PBC患者T和B淋巴細(xì)胞對(duì)AMA抗原的識(shí)別位點(diǎn)也已確認(rèn)，且在PBC患者中特異性的膽管上皮細(xì)胞損傷相關(guān)機(jī)制已經(jīng)闡明[6-8]。隨著對(duì)PBC的自身抗體譜相關(guān)研究的不斷深入，多國(guó)多中心的研究顯示，在各國(guó)人群AIH患者中的AIH相關(guān)自身抗體譜的陽(yáng)性率差異很大；而國(guó)內(nèi)關(guān)于AIH相關(guān)自身抗體的系統(tǒng)臨床研究報(bào)道不多，因此，本研究選擇61例PBC患者、50例AIH患者檢測(cè)AIH相關(guān)自身抗體譜，旨在闡明其與PBC、AIH患者間的關(guān)系，探討在國(guó)人中該AIH相關(guān)自身抗體譜的臨床價(jià)值。

AMA特別是AMA-M2，在PBC患者中是一種特征性的自身抗體，有文獻(xiàn)報(bào)道該抗體在PBC患者中的陽(yáng)性率約為90％，本研究中AMA在PBC組的陽(yáng)性率約為91.8％，AMA-M2的陽(yáng)性率約為86.9％，與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致；抗GP210抗體、抗SP100抗體在PBC組中的陽(yáng)性率約為36.1％、24.6％，在PBC組中抗GP210抗體的陽(yáng)性率較AIH組、對(duì)照組明顯增高，也與外內(nèi)國(guó)相關(guān)報(bào)道結(jié)果一致[9-10]。另外本研究中在AIH組中抗SP100抗體的陽(yáng)性率高達(dá)14.0％，而PBC組約為24.6％，雖然PBC組陽(yáng)性率有增高趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。因此檢測(cè)抗SP100抗體以鑒別PBC、AIH在國(guó)人中的臨床意義不是很大。而抗SLA抗體、抗LKM-1抗體和抗LC1抗體為特征性的AIH自身抗體；有文獻(xiàn)報(bào)道抗SLA抗體在西方AIH患者中的陽(yáng)性率高約50％，抗LC1抗體的陽(yáng)性率高達(dá)71％。本研究結(jié)果顯示，在AIH患者中這3種AIH相關(guān)的自身抗體的陽(yáng)性率均相當(dāng)?shù)?，其中抗SLA抗體的陽(yáng)性率僅為6.0％，較西方AIH患者的陽(yáng)性率大大降低，與日本文獻(xiàn)[11]報(bào)道的6.7％的陽(yáng)性率相當(dāng)，說(shuō)明在東西方AIH患者中抗SLA抗體的陽(yáng)性率差異較大，本研究與日本文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)論相似可能與人種的相同相關(guān)。另外抗LKM-1抗體、抗LC1抗體在AIH組中的陽(yáng)性率分別為4.0％、0；可見(jiàn)在AIH患者中這3種AIH相關(guān)的自身抗體的陽(yáng)性率均很低，臨床上檢測(cè)該三種抗體尤其是抗LC1抗體相關(guān)的臨床意義不大[12-14]。抗GP210抗體、AMA在PBC組的陽(yáng)性率較AIH組及對(duì)照組均較高，與國(guó)外相關(guān)報(bào)道結(jié)論相同，因此抗GP210抗體、AMA的篩查對(duì)于PBC的診斷具有重要意義。

另外在PBC患者中探討AMA、抗GP210抗體和抗SP100抗體相互之間的關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)，抗GP210抗體和抗SP100抗體在AMA陽(yáng)性與AMA陰性PBC患者之間陽(yáng)性率的未見(jiàn)明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。國(guó)外有文獻(xiàn)報(bào)道在AMA陰性PBC患者中抗GP210抗體和抗SP100抗體的陽(yáng)性率較AMA陽(yáng)性PBC患者要增高，本研究結(jié)果與之不同；本研究在5例AMA陰性PBC患者中抗SP100抗體僅1例患者是陽(yáng)性的，抗GP210抗體也僅1例患者是陽(yáng)性的。由于患者的抗GP210抗體與肝功能的損傷有相關(guān)性[15-16]，因此檢測(cè)AMA及抗GP210抗體對(duì)于確診PBC患者及評(píng)估患者病情均有著重要意義，而檢測(cè)SP100抗體在國(guó)人中的臨床意義要相對(duì)小的多。

綜上所述，AIH患者的AIH相關(guān)的自身抗體譜有一定的人種差異，尤其是抗SLA抗體、抗LKM-1抗體和抗LC1抗體在國(guó)人AIH患者的陽(yáng)性率較西方人群大大降低，而AMA、AMA-M2、抗GP210抗體和抗SP100抗體在國(guó)人PBC患者的陽(yáng)性率與西方人群相似。檢測(cè)AMA、AMA-M2和抗GP210抗體在國(guó)人的AIH診斷中有很大的臨床意義，但抗SP100抗體、抗SLA抗體、抗LKM-1抗體和抗LC1抗體的篩查意義相對(duì)不大。

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Clinical Significance of Detection Autoimmune Liver Disease Related Autoantibody Profiles in Patients with Primary Biliary Cirrhoses

BI Yan-mei.//Medical Innovation of China，2015，12（09）：126-128

Objective：To explore the prevalence and study the clinic significance of autoimmune liver diseaserelated antibodies in patients with primary biliary cirrhoses（PBC）.Method：The anti-AMA in 61 PBC（PBC group），50 AIH（AIH group） and 52 other liver diseases（control group） were detected by IIF.Anti-AMA-M2，anti-GP210，anti-SP100，anti-SLA，anti-LC1 and anti-LKM-1 antibodies were measured by ELISA.Result：The positive rates of anti-AMA，anti-AMA-M2，anti-GP210，anti-SP100，anti-LC1，anti-SIA and anti-LKM-1 antibodies were 91.8％（56/61），86.9％（53/61），36.1％（22/61）， 24.6％（15/61），1.6％（1/61），0（0/61）and 1.6％（1/61）in PBC group；18.0％（9/50），6.0％（3/50），8.0％（4/50），14.0％（7/50），0（0/50），6.0％（3/50）and 4.0％（2/50）in AIH group；5.8％（3/52），1.9％（1/52），5.8％（3/52），11.5％（6/52），0（0/52），0（0/52）and 0（0/52）respectively in control group.Anti-AMA，anti-AMA M2 and anti-GP210 were detected more frequently in PBC group than AIH group（P＜0.01），while anti-SLA was detected more frequently in AIH group than PBC group（P＜0.01）. Conclusion：Anti-LC1， anti-SLA and anti-LKM-1 antibodies in PBC and AIH were detected at a very low frequency in the corhort.There was little significance for screening anti-LC1，anti-SLA，anti-LKM-1 antibodies in patients with autoimmune liver diseases.It is of importance to detect anti-AMA and anti-GP210 antibodies for diagnosis of PBC.

Biliary liver cirrhosis； Autoimmune hepatitis； Autoantibodies

10.3969/j.issn.1674-4985.2015.09.042

2014-08-14） （本文編輯：蔡元元）

①撫順礦務(wù)局總醫(yī)院 遼寧 撫順 113008

畢研梅

First-author’s address：General Hospital of Fushun Mining Bureau，F(xiàn)ushun 113008，China