葉鼎承 林佳盛 甘乾福

（1.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所福州350013；2.福建農(nóng)林大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院福州350002）

槐豬與杜洛克豬不同部位脂肪組織形態(tài)學(xué)比較分析

葉鼎承1林佳盛2甘乾福2

（1.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所福州350013；2.福建農(nóng)林大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院福州350002）

為了尋找脂肪型豬和瘦肉型豬在組織形態(tài)學(xué)的上差異，分別以槐豬和杜洛克為研究對象，選定7月齡和12月齡的杜洛克和槐豬進(jìn)行屠宰，取背上、背下、腹下脂肪、板油和冠狀動脈脂肪等不同部位的脂肪組織。通過制作石蠟組織切片，分析測定脂肪泡長徑、短徑、平均直徑、密度、面積、泡長短徑比等形態(tài)學(xué)定量性指標(biāo)。分析結(jié)果表明：豬脂肪沉積具有品種間差異性，槐豬脂肪沉積能力要強(qiáng)于杜洛克，槐豬脂肪細(xì)胞的體積、長徑、平均直徑顯著大于杜洛克豬（P＜0.05）；在相同個體中，豬皮下脂肪細(xì)胞直徑、面積均顯著大于內(nèi)臟脂肪細(xì)胞。

槐豬杜洛克豬脂肪組織形態(tài)

1 材料與方法

1.1 試驗材料試驗豬：上杭槐豬、杜洛克豬，來自上杭槐豬保種場，均為母豬。試驗豬在相同的營養(yǎng)水平和管理條件下進(jìn)行肥育，當(dāng)飼養(yǎng)到相應(yīng)日齡時，各選取3頭豬，按國家《生豬屠宰操作規(guī)程》[5]標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行屠宰測定與取樣。宰后2 h內(nèi)，取左半胴體的背部皮下脂肪上、下層組織（背部的脂肪在真皮層和筋膜層之間，靠近筋膜層的為背部皮下脂肪下層）、腹部皮下脂肪、板油和冠狀動脈脂肪(100 g)為供試樣本，樣品放在液氮罐中冷凍保存，用于總RNA提??；再取一部分放在固定液中，用于組織切片。

1.2 主要儀器和試劑

1.2.1 主要儀器LEICA RM2235切片機(jī)；生物組織脫水機(jī)；生物組織染色機(jī)；恒溫培養(yǎng)箱；石蠟包埋機(jī)；Motic生物倒置顯微鏡；Motic攝像頭及圖像采集和處理軟件。

1.2.2 主要試劑10%福爾馬林；冰醋酸；重鉻酸鉀；濃硫酸；不同濃度的乙醇溶液；二甲苯；蘇木素溶液；蒸餾水；0.5%伊紅酒精溶液；1%鹽酸酒精溶液。

1.3 試驗方法與操作技術(shù)

1.3.1 屠宰指標(biāo)測定按照國家《生豬屠宰操作規(guī)程》標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行屠宰，參照農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 825-2004瘦肉型豬胴體性狀測定技術(shù)規(guī)范的度量統(tǒng)計方法[5]，分別測定胴體重、胴體長、平均背部皮下厚、屠宰率。相關(guān)指標(biāo)計算及公式：胴體重：豬在放血、褪毛后，去掉頭、蹄、尾和內(nèi)臟（保留板油、腎臟）的兩邊胴體重；胴體長：胴體恥骨聯(lián)合前沿至第一頸椎前沿的直線長度；平均背部皮下厚：肩部最厚處、最后肋、腰薦結(jié)合處三點的平均脂肪厚；屠宰率（%）＝胴體重／宰前活重×100%。

1.3.2 脂肪石蠟切片制作脫水：用不同濃度乙醇來逐漸置換樣品中游離的水，樣品浸泡順序從70%乙醇濃度逐漸升到100%，每種濃度乙醇中泡1～2 h，脫水的時間視組織大小而定。

媒浸（透明）：用二甲苯能溶解石蠟和乙醇的特點，來置換組織樣品中的酒精，從而為最終的石蠟包埋創(chuàng)造一個有利的條件。脂肪組織塊浸入到二甲苯與乙醇1∶1的混合液中，一般情況浸泡1～2 h，再提高至100%二甲苯，浸泡30 min。二甲苯有較強(qiáng)的透明能力，組織浸泡透明時間過長可使組織塊收縮、變脆，透明的時間視組織大小而定。

浸蠟：完成透明的脂肪組織塊進(jìn)行浸蠟步驟，將組織浸入到二甲苯與石蠟1∶1的混合液中，一般情況浸泡1～2 h，從而使樣品中的二甲苯被逐漸置換，以便于包理與切片。

透蠟：用100%石蠟熔液浸泡樣品2 h，從而完全置換組織塊中二甲苯，為最終的包埋和保存組織創(chuàng)造一個良好的條件。

包埋：利用石蠟熔點低、質(zhì)地軟的特點，便于切片。用鑷子將浸好蠟的脂肪組織塊夾入裝有液態(tài)石蠟的小紙盒中，展平于液態(tài)石蠟中，待石蠟冷卻成固態(tài)即包埋完畢。

切片：先進(jìn)行石蠟塊的修整，將完整的組織面完全暴露，再進(jìn)行切片。切片厚度為5 mm，薄片應(yīng)切成連續(xù)的蠟帶狀，組織面完整無破損。

粘片：切片后用毛筆將蠟帶放置于45℃水浴鍋中，待切片完全展平，挑選較完整且無雜質(zhì)的組織切片進(jìn)行貼片（載玻片要先用蛋白甘油均勻涂抹），最后放置于烘箱37℃烘24 h。

1.3.3 HE染色脫蠟水化：按順序把脂肪樣本分別放置于100%二甲苯Ⅰ5 min、100%二甲苯Ⅱ5 min、100%酒精Ⅰ5 min、100%酒精Ⅱ5 min、95%酒精5 min、85%酒精5 min、75%酒精5 min、65%酒精5 min、50%酒精5 min、蒸餾水5 min；進(jìn)行脫蠟有利于染色。

染色：蒸餾水浸洗10 min，蘇木精染色10 min，流水浸洗，1%鹽酸酒精分化3 s。

分色：蒸餾水浸洗，0.2%氨水促藍(lán)液藍(lán)化（返藍(lán)）。

清洗染色：流水沖洗浸泡30 min，再用蒸餾水浸洗，0.5%伊紅溶液染色1 min。

脫水除蠟：蒸餾水浸洗后再進(jìn)行脫水透明，按順序分別置于75%酒精、85%酒精、95%酒精、100%酒精Ⅰ、100%酒精Ⅱ、二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各浸泡5 min，最后用中性樹膠封片。

1.4 圖像采集與數(shù)據(jù)處理石蠟切片放置在Motic生物倒置顯微鏡下（10×40），利用Motic攝像頭采集圖像，每張切片隨機(jī)選取5個視野拍照（形態(tài)結(jié)構(gòu)完好、輪廓清晰，利于測定）。脂肪細(xì)胞在顯微鏡下呈不規(guī)則的圓形。用SPSS16.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 屠宰性能從表1可以看出，各項屠宰性能指標(biāo)正常，符合試驗豬的要求。

表1 試驗豬屠宰性能指標(biāo)

表2 脂肪泡長徑測定結(jié)果μm

2.2 脂肪泡長徑的測定結(jié)果從表2、圖1-圖2可以看出，不同組織間，7月齡槐豬背上、背下和腹下脂肪與板油和冠狀動脈脂肪的長徑差異顯著（P＜0.05）；12月齡槐豬腹下脂肪與冠狀動脈脂肪泡長徑差異顯著（P＜0.05）；7月齡杜洛克冠狀動脈脂肪與其它脂肪組織的脂肪泡長徑呈差異顯著（P＜0.05）。不同豬相同組織的比較，12月齡槐豬脂肪泡長徑與7月齡杜洛克豬差異極顯著（P＜0.05），且板油間的比較差異極顯著（P＜0.01）；12月齡槐豬脂肪泡長徑與7月齡槐豬比較，板油呈差異顯著，其它差異不顯著（P＞0.05）。

圖1 7月齡槐豬背部皮下脂肪上層

圖2 7月齡杜洛克背部皮下脂肪上層

2.3 脂肪泡短徑的測定結(jié)果槐豬脂肪泡形狀呈長橢圓形。不同組織間比較，7月齡槐豬的背上、背下與冠狀動脈脂肪的脂肪泡短徑差異顯著（P＜0.05），7月齡杜洛克的背下與冠狀動脈脂肪的脂肪泡短徑差異顯著（P＜0.05）。不同豬相同組織的比較，12月齡槐豬與7月齡杜洛克豬的的脂肪泡短徑差異顯著（P＜0.05）；而其它品種相同組織間的脂肪泡短徑差異不顯著（P＞0.05）。見表3、圖3-圖4。

2.4 脂肪泡平均直徑的測定結(jié)果從表4可以看出，不同組織的比較，7月齡、12月齡槐豬和7月齡杜洛克的背上、背下與冠狀動脈脂肪的脂肪泡平均直徑差異顯著（P＜0.05）。在不同豬相同組織的比較，7月齡槐豬、12月齡槐豬和7月齡杜洛克的板油的脂肪泡平均直徑差異顯著（P＜0.05）。12月齡槐豬與7月齡杜洛克豬的脂肪泡平均直徑差異顯著（P＜0.05），而其它品種相同組織間脂肪泡平均直徑差異不顯著（P＞0.05）。

圖3 12月齡槐豬背部皮下脂肪上層

圖4 12月齡槐豬背部皮下脂肪下層

表3 脂肪泡短徑測定結(jié)果μm

注：字母表示同豬種不同組織間對比，不同字母表示差異顯著；?表示不同豬種相同組織間對比，?P＜0.05，??P＜0.01。

2.5 脂肪泡密度的測定結(jié)果從表5可以看出，不同組織的比較，7月齡槐豬和7月齡杜洛克的背上、背下、腹下與板油、冠狀動脈脂肪的脂肪泡密度差異顯著（P＜0.05）。在不同豬相同組織的比較，不同品種相同組織間的脂肪泡密度差異均顯著的（P＜0.05）。

2.6 脂肪泡面積的測定結(jié)果從表6可以看出，不同組織的比較，7月齡槐豬和7月齡杜洛克的背上、背下、腹下與板油、冠狀動脈脂肪的脂肪泡面積差異顯著（P＜0.05）。在不同豬相同組織的比較，不同品種相同組織間脂肪泡面積差異均顯著（P＜0.05）。

表4 脂肪泡平均直徑測定結(jié)果μm

表5 脂肪泡密度的測定結(jié)果個/mm2

表6 脂肪泡面積測定結(jié)果μm2

表7 脂肪泡長短徑比

2.7 脂肪泡長短徑比值的測定結(jié)果從表7可以看出，不同組織的比較，7月齡槐豬和12月齡杜洛克的腹部皮下脂肪和冠狀動脈脂肪脂肪泡長短徑比值差異顯著（P＜0.05），12月齡槐豬和7月齡杜洛克的背部皮下脂肪下層脂肪泡長短徑比值差異顯著（P＜0.05）。其它組織間脂肪泡長短徑比值差異不顯著（P＞0.05）。

3 討論

1）上杭槐豬是我國36個地方優(yōu)良豬種之一，也是福建省優(yōu)良地方品種，以肉質(zhì)優(yōu)良而著稱。豬的脂肪沉積能力對肌內(nèi)脂肪含量有一定的影響，上杭槐豬脂肪含量高，是上杭槐豬肉質(zhì)鮮嫩香美的具體表現(xiàn)。Ledoux等[7]的研宄中也發(fā)現(xiàn)，在極度肥胖患者中皮下的脂肪細(xì)胞體積要極顯著大于內(nèi)臟脂肪。蔡兆偉[8]對閹割公豬脂肪沉積的影響研究中，發(fā)現(xiàn)閹割顯著增加公豬背部脂肪組織細(xì)胞大小，閹割公豬背部脂肪細(xì)胞直徑顯著大于非閹割公豬。Ray H等[6]、官久強(qiáng)[9]在豬脂肪細(xì)胞形態(tài)學(xué)上的研究結(jié)果表明，皮下脂肪細(xì)胞體積、直徑均顯著大于內(nèi)臟脂肪細(xì)胞。反映脂肪泡本身特征的指標(biāo)包括長徑、短徑、面積、密度及平均直徑等五個指標(biāo)，是形態(tài)學(xué)的定量性指標(biāo)，能通過科學(xué)的測量方法進(jìn)行定量。只有密度是負(fù)相關(guān)的因素，其它四個是正相關(guān)的因素。長短徑比值是反映脂肪泡形狀特征的定性指標(biāo)，比值越大脂肪泡呈橢圓狀，比值小脂肪泡越圓。

2）試驗表明，在相同個體中，豬皮下脂肪細(xì)胞直徑、面積均顯著大于內(nèi)臟脂肪細(xì)胞；密度則顯著小于，表明豬的脂肪細(xì)胞直徑、面積等形態(tài)學(xué)差異跟解剖學(xué)位置的關(guān)系密切，不同部位的脂肪細(xì)胞來源不同，因此呈現(xiàn)不同的前脂肪細(xì)胞特征。皮下脂肪含有更多的具有快速增值和分化能力的前脂肪細(xì)胞亞型。脂肪組織在機(jī)體中所處的微環(huán)境不同，皮下脂肪要為機(jī)體提高緩沖能力和調(diào)節(jié)溫度的功能；內(nèi)臟脂肪則圍繞在腸道等機(jī)體內(nèi)部的地方，周圍的器官、組織或者細(xì)胞能分泌一些因子或體液的pH值等影響其功能。本試驗發(fā)現(xiàn)，上杭槐豬脂肪細(xì)胞的體積、長徑、平均直徑顯著大于杜洛克豬；在品種間，脂肪沉積的性狀具有差異性，槐豬（脂肪型豬）脂肪沉積能力要強(qiáng)于杜洛克（瘦肉型豬）。同時，本研究表明，上杭槐豬脂肪的脂肪泡形態(tài)呈不規(guī)則的橢圓形，并且在豬體成熟后脂肪泡的生長呈現(xiàn)平衡狀態(tài)，各組織脂肪泡之間形態(tài)學(xué)差異變小。

[1]Hausman G J,Kauffman R G.The histology of developing porcine adipose tissue[J].Journal of Animal Science,1986,63 (2):642-658.

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[8]蔡兆偉.閹割影響豬脂肪沉積的分子機(jī)理研究[D].浙江大學(xué),2011:25-40.

[9]官久強(qiáng).豬皮下和內(nèi)臟脂肪組織microRNA轉(zhuǎn)錄組的鑒定與差異表達(dá)分析[D].四川農(nóng)業(yè)大學(xué),2012:37-44.

Histomorphology analysis of different fat from Huai pig and Duroc pig

Ye Dingcheng1Lin Jiasheng2Gan Qianfu2
(1.Institute of Husbandry and Veterinary Medicine,Fujian Academy of Agricultural Sciences,Fuzhou 350013; 2.College of Animal Science,Fujian Agriculture and Forestry University,Fuzhou 350002)

In order to find the differences of histomorphology between lean and fat pigs,12-month old Huai sows,7-month old Huai and Duroc sows were were selected.The leaf fat,adipo-vascular axis and the subcutaneous adipose tissue of back and abdomen were collected immediately after the slaughter.We made paraffine section in series to measure the major fat morphological quantitative indicators,such as the major axis,minor axis and area.The result showed that the fat deposition of pigs were different between different pig breeds,the fat deposition of Huai pigs were more than Duroc pigs.The volume,major axis and average diameter of adipocyte in Huai pigs were significantly larger than Duroc pigs(P＜0.05).The diameter and area of subcutaneous fat cells were significantly larger than visceral fat cells in the individual.

Huai pig Duroc pig Adipose tissue morphology脂肪沉積性狀是豬主主要的經(jīng)濟(jì)性狀之一，而且與經(jīng)濟(jì)價值緊密聯(lián)系，如脂肪沉積量直接影響肉質(zhì)。多年來，人們對各種動物組織形態(tài)、脂肪沉積及其調(diào)控機(jī)理做了很多研究[1-4]，希望能夠按照人們的要求調(diào)控豬體內(nèi)的脂肪代謝，從而提高豬肉質(zhì)量，滿足人們對豬肉產(chǎn)品既營養(yǎng)又健康的需要。槐豬（Huai pig）是福建省特色豬品種，早熟易肥、肉質(zhì)優(yōu)良、抗逆性強(qiáng)，但生長速度慢、瘦肉率低，是典型的脂肪型豬種，而西方現(xiàn)代豬種杜洛克豬（Duroc pig）則完全相反，生長速度快、瘦肉率高，但肉質(zhì)和抗逆性相對較差，是典型的瘦肉型豬種。兩豬種在生長性能和肉質(zhì)性狀的表型上分屬兩個極端，是研究脂肪沉積差異的理想動物模型。本文對兩豬種不同部位的脂肪形態(tài)進(jìn)行比較分析，希望從組織形態(tài)學(xué)上尋找差異，為槐豬的品種開發(fā)和脂肪沉積的調(diào)控研究提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

A

1003-4331（2015）06-0021-05

福建省自然科學(xué)基金（2012J01111）、福建省公益類科研院所專項（2014R1023-12）資助。

葉鼎承（1980-），男，助理研究員。主要從事畜禽養(yǎng)殖與動物營養(yǎng)，E-mail：ydcfafu@126.com。