勾曉丹 姜麗華 張瑩瑩 趙明杰

1.遼寧省朝陽市藥品檢驗檢測所，遼寧 朝陽 1220002.遼寧省朝陽市食品藥品監(jiān)督執(zhí)法支隊，遼寧 朝陽 122000

參芪健胃顆粒收載于衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第十冊，由黨參、當(dāng)歸、黃芪等十四味藥材加工制成。具有溫中健脾、理氣和胃之功效。主治脾胃虛寒型的慢性萎縮性胃炎、適用于胃脘脹痛、痞悶不適、喜氣喜按、噯氣呃逆等癥。原標準中只有性狀、鑒別和檢查項，無其他檢定方法。為控制參芪健胃顆粒的質(zhì)量，本文參考有關(guān)文獻，采用高效液相色譜(high performance liquid chromatography，HPLC)法對處方中當(dāng)歸的有效成分阿魏酸的含量進行了測定，經(jīng)方法學(xué)驗證，結(jié)果較為滿意，為參芪健胃顆粒定量指標提供了依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗儀器 島津LC-2010A 型高效液相色譜儀(包括LC-2010 型紫外檢測器;LC Solution 色譜工作站);CPA225D 型電子天平(十萬分之一);BSA224-CW 型電子天平(萬分之一)。

1.2 試劑與試藥 乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑為分析純，水為超純水;阿魏酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號:110773-201313);參芪健胃顆粒(河南輔仁堂制藥有限公司，批號:201311421、201403232、201411111)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱CAPCELL PAK C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流動相:乙腈-0.085%磷酸(17∶83);柱溫:35℃，體積流量:1.0 ml/min;檢測波長316 nm;對照液和供試品液進樣量均為10 μl。理論板數(shù):按阿魏酸計算理論板數(shù)不低于5000;分離度大于1.5，外標法計算含量。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取對照品12mg，置100ml 量瓶，加入70%甲醇適量使溶解，標定至刻度，搖勻。精取5ml 置50ml 量瓶，70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液 取裝量差異下供試品適量，研細，精密稱定1.8g，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇20ml，密塞，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液濾過，取續(xù)濾液經(jīng)0.45μm 濾膜濾過，即得。

2.2.3 陰性對照液 按照處方制法制備缺少當(dāng)歸的模擬樣品，同供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 陰性干擾實驗 取“2.2”項下3 種溶液各10 μl，分別注入高效液相色譜儀測定。結(jié)果陰性對照液色譜圖中在阿魏酸峰對應(yīng)的保留時間附近未檢出干擾峰(圖1)。

2.3.2 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對照品溶液1、5、10、15、20μl 注入液相色譜儀，測定，以濃度(X)為橫坐標，以峰面積(Y)為縱坐標，進行線性回歸，回歸方程為Y=62811255.05X-7641.88 (r=0.9999)。結(jié)果表明，阿魏酸在0.01354～0.2708μg 范圍內(nèi)濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.3 精密度試驗 精密吸取對照液10 μl，重復(fù)進樣6次，記錄色譜圖，按峰面積計算，結(jié)果RSD=0.2%，表明儀器精密度良好。

2.3.4 重復(fù)性試驗 取同一批號樣品6 份，分別依法處理，測定結(jié)果RSD=0.5%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，室溫放置，按上述色譜條件，分別于0、2、4、8、12、24 h 進樣，測得峰面積值RSD=0.8%。結(jié)果表明，供試品溶液在24 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.6 加樣回收率試驗 精密稱取己知含量的樣品(批號:201411111，阿魏酸含量為0.0079 mg/g)6 份，每份1.8g，精密加入阿魏酸對照品溶液(0.0120mg/ml)1ml，按供試品溶液方法制備，依法測定含量并計算回收率(表1)。

表1 回收率試驗測定結(jié)果

2.4 樣品含量的測定 取3 批樣品，按供試品溶液方法制備，分別進樣10μl，依法測定，采用外標法計算樣品中阿魏酸的含量(表2)。

表2 樣品中阿魏酸的測定結(jié)果(n=3)

3 討論

本實驗中，阿魏酸在316nm 處有最大吸收，因此選用316nm 作為檢測波長。

在實驗過程中，按照參考文獻，用乙腈-0.085%磷酸，阿魏酸色譜峰基本達到了基線分離，其他組分無干擾，且穩(wěn)定性良好。經(jīng)過反復(fù)實驗，最終建立了適合本品的流動相比例為乙腈-0.085%磷酸(17∶83)。

綜合考慮提取分離中藥有效成分常用方法的優(yōu)缺點，本方法以70%甲醇為溶劑，由于溶劑浸提法費時，效率一般，故采用加熱回流提取法作為參芪健胃顆粒中阿魏酸的提取方法。

參芪健胃顆粒具有溫中健脾、理氣和胃之功效，用途廣泛，但原有標準過于簡單。本文闡述的含量測定方法專屬性強、重現(xiàn)性好、陰性對照無干擾、方法可靠，使參芪健胃顆粒原有的質(zhì)量標準得到充實、完善，更能準確、有效控制參芪健胃顆粒的質(zhì)量。

［1］國家藥典委員會.中國藥典一部［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:124-125.

［2］中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準中藥方成制劑第十冊［S］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1995:103.

［3］邱穎.RP-HPLC 法測定丹燈通腦軟膠囊中葛根素和阿魏酸的含量［J］.安徽醫(yī)藥，2013，17 (2):212-213.

［4］黃羅，郭健新，劉詠梅，等.HPLC 測定阿魏酸的含量探討［J］.中成藥，2004，26 (2):134-136.

［5］夏明，董曉燁.當(dāng)歸養(yǎng)榮丸中阿魏酸的含量測定［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報，2010，29 (1):103-104.