徐士奎 羅艷秋 覃 安

1.云南省食品藥品檢驗所，云南 昆明 650011;2.云南中醫(yī)學院，云南 昆明 650500;3.云南財經大學，云南 昆明 650504

復方龍血竭膠囊是由冰片、龍血竭、三七加工制成的純中藥制劑，具有活血化瘀、定痛止血、斂瘡生肌等功效，主要用于跌打損傷、瘀血作痛、氣血凝滯、外傷出血、膿瘡久不收口及冠心病、心絞痛、心肌梗塞、血瘀證等心腦血管疾病?，F(xiàn)行質量標準用三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1等三種對照品對其進行含量測定，檢測成本較高且操作繁瑣，為節(jié)約檢測成本和有效控制藥品質量，本研究探索用三七總皂苷對照提取物作為對照物質建立高效液相色譜方法，為復方龍血竭質量控制提供依據。

1 儀器、試藥與樣品

1.1 儀器 島津LC-20A 高效液相色譜儀(日本島津公司)，檢測器:SPD-20A (D2+W));紫外分光光度計(島津UV-2550);分析天平(Denver TB-215D，十萬分之一);分析天平(SartorIUS BS224S，萬分之一)

1.2 試藥 對照品為三七總皂苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，10870-201002，以三七皂苷R16.9%、人參皂苷Rg128.0%、人參皂苷Re 3.8%、人參皂苷Rb129.7%、人參皂苷Rd 7.3%計);方法學研究用復方龍血竭膠囊樣品均由云南云河藥業(yè)有限公司提供;乙腈由Merck 公司生產，色譜純;水為超純水;磷酸為分析純。

2 方法

2.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈為流動相A，0.1%磷酸為流動相B，按下表進行梯度洗脫。檢測波長為203nm。

表1 梯度洗脫方法

2.2 對照品貯備溶液的制備 精密稱取三七總皂苷對照品99.87mg，置25ml 量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制成每1ml含三七皂苷R10.27564mg、人參皂苷Rg11.11854mg、人參皂苷 Re 0.15180mg、人參皂苷 Rb11.18646mg、人參皂苷Rd 0.29162mg 的對照品溶液，作為儲備液。對照品HPLC 圖譜見圖1。

2.3 供試品溶液制備 取本品裝量差異項下的內容物，研細，精密稱取約0.75g，置具塞錐形瓶中，精密加入水25ml，密塞，稱定重量，振搖30min，稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。樣品HPLC圖譜見圖2。

2.4 陰性供試品溶液制備 按處方量取缺三七的其余藥材模擬制劑工藝制備陰性樣品，由云南云河藥業(yè)有限公司制備。取陰性樣品0.75g 按2.3 項下供試品溶液制備方法制備陰性供試品溶液。陰性樣品HPLC 圖譜見圖3。

2.5 方法學考察［1］

2.5.1 線性關系考察 分別精密吸取儲備液加甲醇制成系列濃度的混合對照品溶液(見表2:標準品的配制濃度)，分別精密吸取10μl 注入液相色譜儀，測定峰面積。以對照品濃度X 為橫坐標，峰面積積分值Y 為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程如表3 所示。

表2 標準品的配制濃度 /mg/ml

表3 線性關系

研究結果表明5 種成分在各自線性范圍內，濃度與峰面積均呈現(xiàn)良好的線性關系。

2.5.2 儀器精密度實驗 取同一對照品溶液(三七皂苷R1濃度0.166mg/ml;人參皂苷Rg1濃度0.671mg/ml;人參皂苷Re 濃度0.0912mg/ml;人參皂苷Rb1濃度0.712mg/ml;人參皂苷Rd 濃度0.175mg/ml)，按照2.1 項下的液相色譜條件重復進樣6 次(n=6)，每次進樣10μl，三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd 峰面積的RSD 值分別為1.34%、1.43%、1.20%、1.39%、1.41%，均＜2%，表明儀器的精密度良好。

2.5.3 穩(wěn)定性實驗 精密稱取復方龍血竭膠囊樣品細粉0.75g，按2.3 項下供試品溶液制備方法制備供試品溶液，精密吸取10μl 分別在0、10、20、30、40、50h 后進樣，按照2.1 項下的色譜條件依法測定，三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd 的RSD 分別為1.27%、1.40%、1.19%、1.33%、1.39%，表明供試品溶液在50 小時內基本穩(wěn)定。

2.5.4 重復性實驗 精密稱取同一批次復方龍血竭膠囊樣品細粉6 份，按2.3 項下供試品溶液制備方法處理后進行含量測定，按照外標法計算各樣品中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd 的含量，RSD 值分別為0.34%、0.25%、0.80%、1.24%、0.79%，說明該方法重復性良好。

2.5.5 耐用性試驗 取樣品溶液，分別對不同品牌、不同規(guī)格的色譜柱及不同柱溫進行優(yōu)化測定，結果表明對被測成分色譜峰的分離度及測定結果無明顯影響。

2.5.6 回收率試驗 精密稱取含量已知的復方龍血竭膠囊細粉6 份，每份約0.375g，精密稱定，分別置于具塞錐形瓶中，分別精密加入三七總皂苷對照品適量，按2.3 項下供試品溶液制備方法及2.1 項下的色譜條件依法測定含量并計算回收率，三七皂苷R1平均回收率為101.042%，RSD=1.58%;人參皂苷Rg1平均回收率為100.39%，RSD=1.59%;人參皂苷Re 平均回收率為101.91%，RSD=1.02%;人參皂苷Rb1平均回收率為100.71%，RSD=1.58%;人參皂苷Rd 平均回收率為99.99%，RSD=1.29%，表明該方法的回收率良好，結果分別見表4、表5、表6、表7、表8。

表4 三七皂苷R1 回收率結果

表5 人參皂苷Rg1回收率結果

表6 人參皂苷Re 回收率結果

表7 人參皂苷Rb1回收率結果

表8 人參皂苷Rd 回收率結果

2.6 樣品測定 分別稱取三個不同批次復方龍血竭膠囊樣品照上述色譜條件測定，結果見表6:樣品測定結果。

表9 樣品測定結果 /mg/g

3 結果與討論

本實驗用三七總皂苷對照提取物作為對照組，采取HPLC 法同時測定復方龍血竭膠囊中三七皂苷R1、人生皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd 5個成分的含量，該方法分離度好、靈敏度高且穩(wěn)定性好，快速、簡便，同時可大大減少檢測成本，不失為藥品質量控制好的方法和思路。

藥物療效的發(fā)揮基于其化學物質基礎，化學成分如何表征是其質量評價的關鍵問題?；趩蝹€化學成分的表征逐漸被認識到違背中國傳統(tǒng)醫(yī)藥學整體理念和思維體系，無法揭示物質基礎-化學成分群的整體性和復雜性，而整體質量控制的思路越來越被廣泛接收［2］，如何開發(fā)廉價、快速的化學表征技術方法是藥品質量控制研究的重要內容。

［1］.國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄130-131.

［2］.賀福元，鄧凱文，石繼連，等.中藥有效成分群組方技術研究若干基礎瓶頸問題及數(shù)理特征化思路的提出［J］.中藥材，2009，32 (1):1-6.