李海軍

廣元市中心醫(yī)院 檢驗(yàn)科（廣元 628000）

輸血是臨床搶救患者生命時(shí)一種不可替代的治療手段，在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中占據(jù)重要地位。目前，成分輸血已成常態(tài)，主要有懸浮紅細(xì)胞、血漿和血小板三大血液制品。其中，懸浮紅細(xì)胞的應(yīng)用非常廣泛，其用量居首位［1］。眾所周知，紅細(xì)胞輸注的主要作用是改善患者因貧血導(dǎo)致的氧供不足。雖然懸浮紅細(xì)胞在保存過(guò)程中，其攜氧量沒(méi)有發(fā)生改變，但在紅細(xì)胞輸入人體后，能否順利隨著血液循環(huán)流動(dòng)到目標(biāo)組織或器官，取決于紅細(xì)胞的變形性。若紅細(xì)胞變形能力差，無(wú)法通過(guò)微小血管，不能順利攜帶氧氣到達(dá)目標(biāo)器官或組織，反而可能引起栓塞，造成不良影響。已有較多研究［2－4］發(fā)現(xiàn)，紅細(xì)胞在保存期間變形能力逐漸下降，其原因在于紅細(xì)胞的一氧化氮（NO）丟失。硝普鈉是一種常見(jiàn)的NO供體，能夠釋放NO分子［5］。因此，本研究探討補(bǔ)充硝普鈉對(duì)懸浮紅細(xì)胞在保存期間紅細(xì)胞變形性的影響。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)分組

來(lái)源于中心血站的50袋懸浮紅細(xì)胞，200mL/袋，于保存期的第1、3、5、7、14、21、28、35天各取20mL，分裝成4管，5mL/管。根據(jù)數(shù)字隨機(jī)表法，按照編號(hào)將標(biāo)本隨機(jī)分為4組，A組作為對(duì)照組，不做任何處理，另外3管分別與硝普鈉混合培養(yǎng)成濃度為1μmol/L（B組）、5μmol/L（C組）和10μmol/L（D組）。

1.2 試劑與儀器

SNP試劑（碧云天生物技術(shù)研究所，海門）、PBS溶液（0.072 5M，pH 7.4，國(guó)產(chǎn)分析純）、SA6000自動(dòng)血液流變測(cè)試儀（賽科希德科技發(fā)展有限公司，北京）。

1.3 紅細(xì)胞變形性的檢測(cè)

紅細(xì)胞變形性的檢測(cè)采用賽科希德SA6000自動(dòng)血液流變測(cè)試儀，該儀器采用錐－板式旋轉(zhuǎn)結(jié)構(gòu)原理，利用黏度測(cè)量法計(jì)算血液流變學(xué)相關(guān)指標(biāo)，其測(cè)定的紅細(xì)胞變形指數(shù)越大，表示紅細(xì)胞變形性越差。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行處理，定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）描述。同一時(shí)間點(diǎn)的不同組間比較采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)的方差分析，并進(jìn)一步采用SNK法進(jìn)行兩兩比較；同一組不同時(shí)間點(diǎn)的比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α設(shè)定為0.05。

2 結(jié)果

2.1 不同組別的相關(guān)指標(biāo)隨時(shí)間延長(zhǎng)而變化的趨勢(shì)圖

每組標(biāo)本的紅細(xì)胞變形指數(shù)、聚集指數(shù)和剛性指數(shù)均有隨著時(shí)間延長(zhǎng)而緩慢增高的趨勢(shì)（圖1～4）。

2.2 同一時(shí)間點(diǎn)不同組間的比較

各時(shí)間點(diǎn)，與A組的紅細(xì)胞變形指數(shù)相比，B組和D組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而C組有明顯變化（P＜0.05）；與A組的聚集指數(shù)和剛性指數(shù)比較，B、C、D 3組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（表1～3）。

2.3 同一組不同時(shí)間點(diǎn)的比較

隨著時(shí)間延長(zhǎng)，4組標(biāo)本的紅細(xì)胞變形指數(shù)、聚集指數(shù)和剛性指數(shù)均發(fā)生改變。其中，A、B、C、D 4組紅細(xì)胞變形指數(shù)分別在D14、D21、D28、D21發(fā)生明顯變化，其后保持明顯增高趨勢(shì)（P＜0.05）。A、B、C、D 4組紅細(xì)胞的聚集指數(shù)均在D21后保持明顯增高趨勢(shì)（P＜0.05），4組變化趨勢(shì)一致。A、B、C、D 4組紅細(xì)胞的剛性指數(shù)均在D28后保持明顯增高趨勢(shì)（P＜0.05），4組變化趨勢(shì)一致（表1～3）。

圖1 A組相關(guān)指標(biāo)的變化趨勢(shì)

圖2 B組相關(guān)指標(biāo)的變化趨勢(shì)

圖3 C組相關(guān)指標(biāo)的變化趨勢(shì)

圖4 D組相關(guān)指標(biāo)的變化趨勢(shì)

表1 不同保存時(shí)間點(diǎn)的懸浮紅細(xì)胞的變形指數(shù)（±s，n＝50）

表1 不同保存時(shí)間點(diǎn)的懸浮紅細(xì)胞的變形指數(shù)（±s，n＝50）

注：與A組比較，＃P＜0.05；同一組不同時(shí)間點(diǎn)比較，＊P＜0.05

D1 D3 D5 D7 D14 D21 D28 D35 A組 0.61±0.02 0.62±0.02 0.62±0.03 0.63±0.02 0.68±0.08＊ 0.71±0.07＊ 0.72±0.06＊ 0.75±0.05組別＊B組 0.61±0.03 0.61±0.05 0.62±0.03 0.64±0.02 0.65±0.05 0.70±0.04＊ 0.71±0.05＊ 0.76±0.05＊C組 0.55±0.06＃ 0.56±0.04＃ 0.57±0.05＃ 0.59±0.03＃ 0.61±0.04＃ 0.63±0.07＃ 0.66±0.06＃＊ 0.68±0.08＃＊D組 0.61±0.06 0.62±0.05 0.63±0.04 0.65±0.04 0.66±0.05 0.70±0.04＊ 0.71±0.06＊ 0.76±0.05＊

表2 不同保存時(shí)間點(diǎn)的懸浮紅細(xì)胞的聚集指數(shù)（±s，n＝50）

表2 不同保存時(shí)間點(diǎn)的懸浮紅細(xì)胞的聚集指數(shù)（±s，n＝50）

注：同一組不同時(shí)間點(diǎn)比較，＊P＜0.05

D1 D3 D5 D7 D14 D21 D28 D35 A組 5.21±0.15 5.22±0.15 5.21±0.14 5.22±0.15 5.39±0.35 6.43±0.48＊ 6.89±0.38＊ 7.75±0.37組別＊B組 5.23±0.14 5.22±0.28 5.23±0.36 5.25±0.14 5.37±0.23 6.44±0.57＊ 6.95±0.43＊ 7.85±0.34＊C組 5.18±0.18 5.16±0.18 5.17±0.28 5.21±0.21 5.26±0.27 6.39±0.47＊ 6.97±0.63＊ 7.94±0.48＊D組 5.23±0.17 5.19±0.24 5.19±0.29 5.24±0.31 5.35±0.42 6.46±0.45＊ 6.98±0.49＊ 7.84±0.36＊

表3 不同保存時(shí)間點(diǎn)的懸浮紅細(xì)胞的剛性指數(shù)（±s，n＝50）

表3 不同保存時(shí)間點(diǎn)的懸浮紅細(xì)胞的剛性指數(shù)（±s，n＝50）

注：同一組不同時(shí)間點(diǎn)比較，＊P＜0.05

D1 D3 D5 D7 D14 D21 D28 D35 A組 4.08±0.14 4.09±0.25 4.22±0.23 4.38±0.35 4.55±0.71 4.97±0.31 5.41±0.45＊ 6.34±0.27組別＊B組 4.10±0.25 4.14±0.29 4.19±0.23 4.42±0.36 4.59±0.23 4.92±0.45 5.43±0.32＊ 6.27±0.55＊C組 4.14±0.41 4.18±0.50 4.20±0.31 4.43±0.26 4.66±0.43 4.89±0.42 5.49±0.41＊ 6.26±0.43＊D組 4.13±0.29 4.17±0.44 4.24±0.31 4.47±0.33 4.65±0.28 4.98±0.54 5.46±0.42＊ 6.16±0.38＊

3 討論

NO在心血管活動(dòng)中起重要作用，主要?dú)w因于它對(duì)血管平滑肌的作用。人類紅細(xì)胞能夠表達(dá)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（NOS2或iNOS）和內(nèi)皮型一氧化氮合酶（NOS3或eNOS），因此有能力合成 NO［6］。不管是細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外的NO，均能調(diào)節(jié)紅細(xì)胞的生理功能［7－8］。紅細(xì)胞變形性是紅細(xì)胞的重要生理功能之一，研究［9－10］發(fā)現(xiàn)，NO 能夠調(diào)節(jié)紅 細(xì)胞的 變形能力。Mesquita等［11］的研究證實(shí)，乙酰膽堿和NO供體spermine－NONOate都能改善紅細(xì)胞變形性，而且他們認(rèn)為乙酰膽堿的作用可能是歸因于其能誘導(dǎo)紅細(xì)胞膜上乙酰膽堿M1型受體介導(dǎo)的NO合成，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)NO供體對(duì)紅細(xì)胞變形性的調(diào)節(jié)作用存在濃度依賴性。硝普鈉是一種無(wú)機(jī)亞硝酸鹽，臨床常用作降壓藥，其作用機(jī)制是通過(guò)釋放NO，增加血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)的cGMP水平，從而達(dá)到擴(kuò)張血管，降低血壓的作用［5］。本研究通過(guò)補(bǔ)充硝普鈉發(fā)現(xiàn)，當(dāng)其濃度為5μmol/L時(shí)，能夠明顯降低懸浮紅細(xì)胞的變形指數(shù)，說(shuō)明其能夠改善懸浮紅細(xì)胞的變形能力（P＜0.05），但對(duì)紅細(xì)胞的聚集指數(shù)和剛性指數(shù)無(wú)明顯影響（P＞0.05）。當(dāng)硝普鈉濃度為1μmol/L或10μmol/L時(shí)，其對(duì)紅細(xì)胞變形性無(wú)影響，說(shuō)明硝普鈉對(duì)紅細(xì)胞變形性的作用存在濃度依賴性，只有在合適的濃度才能發(fā)揮作用。

紅細(xì)胞的變形能力對(duì)于維護(hù)血液循環(huán)有著重要意義，它能使紅細(xì)胞通過(guò)微循環(huán)的小血管，降低大血管的高切應(yīng)力血液黏滯。Grau等［12］通過(guò)小鼠實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，紅細(xì)胞變形性的降低對(duì)微循環(huán)灌注造成了損傷。因此，重視懸浮紅細(xì)胞在保存期間變形性的改變，對(duì)于紅細(xì)胞的輸血療效具有重要意義。影響紅細(xì)胞變形性的因素主要為細(xì)胞比容、細(xì)胞形狀、細(xì)胞質(zhì)的黏滯性和細(xì)胞膜的機(jī)械特性。其中，細(xì)胞膜的機(jī)械特性才是細(xì)胞膜黏彈性的主要決定因素。正常紅細(xì)胞的變形性依賴細(xì)胞代謝：1）離子泵的轉(zhuǎn)運(yùn)，例如 Na＋－K＋－ATP 和 Ca2＋－ATP；2）Na＋－K＋－ATP是紅細(xì)胞比容的調(diào)節(jié)器，細(xì)胞質(zhì)的黏滯性維持細(xì)胞內(nèi)外滲透壓的平衡；3）Ca2＋－ATP可以使細(xì)胞內(nèi)Ca2＋維持低濃度水平，其本質(zhì)是保護(hù)正常的紅細(xì)胞變形性［13－14］。盡管本研究和其他文獻(xiàn)［9－11］都 證 明，NO具有調(diào)節(jié)紅細(xì)胞力學(xué)性狀的作用，但NO對(duì)紅細(xì)胞變形性的影響機(jī)制還未完全清楚。

綜上所述，本研究結(jié)果表明，NO能夠顯著影響紅細(xì)胞變形性，且NO對(duì)紅細(xì)胞變形性的維持具有調(diào)控作用。在體內(nèi)，紅細(xì)胞具有兩種來(lái)源的NO：一種是上皮細(xì)胞合成并彌散到血流的；一種是紅細(xì)胞本身合成的。因此，除了NO的血流阻抗作用之外，NO對(duì)紅細(xì)胞變形性的影響也對(duì)血流量的控制有直接作用。但是，NO影響紅細(xì)胞變形性的目標(biāo)結(jié)構(gòu)或功能尚未明確，有待進(jìn)一步研究。

［1］胡麗華.臨床輸血學(xué)檢驗(yàn)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2012：158－159.

［2］張洪為，李代渝，趙華，等.一氧化氮對(duì)庫(kù)血紅細(xì)胞變形性的影響特征之探討［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2009，38（21）：2695－2697.

［3］Yang XM，Liu J，Ji J，et al.Effects of dexmedetomidine on the defoemability of erythrocytes in vitro and in anesthesia［J］.Exp Ther Med，2014，7（6）：1631－1634.

［4］Carvalho FA，Maria AV，Braz N，et al.The relation between the erythrocyte nitric oxide and hemorheological parameters［J］.Clin Hemorheol Microcirc，2006，35（1）：341－347.

［5］李松，陳暢，史艷秋，等.一氧化氮供體最新研究進(jìn)展及應(yīng)用前景［J］.中國(guó)生化藥物雜志，2007，27（6）：374－378.

［6］張洪為，李代渝，古天明.一氧化氮的生理學(xué)及對(duì)輸血的影響［J］.中國(guó)輸血雜志，2008，21（5）：384－386.

［7］Kleinbongard P，Keymel S，Kelm M.New functional aspects of the L－arginine－nitric oxide metabolism within the circulating blood［J］.Thrombosis and Haemostasis，2007，98（5）：970－974.

［8］Simmonds MJ，Detterich JA，Connes P.Nitric oxide，vasodilation and the red blood cell［J］.Biorheology，2013，51（2－3）：121－134.

［9］Silva－Herdade AS，F(xiàn)reitas T，Almeida JP，et al.Erythrocyte deformability and nitric oxide mobilization under pannexin－1 and PKC dependence［J］.Clin Hemorheol Microcirc，2015，59（2）：155－162.

［10］Canino B，Hopps E，Calandrino V，et al.Nitric oxide metabolites and erythrocyte Deformability in a group of subjects with obstructive sleep apnea syndrome［J］.Clin Hemorheol Microcirc，2015，59（1）：45－52.

［11］Mesquita R，Pires I，Saldanha C，et al.Effects of acetylcholine and spermineNONOate on erythrocyte hemorheologic and oxygen carrying properties［J］.Clinical Hemorheology，2001，25（3－4）：153－163.

［12］Grau M，Pauly S，Ali J，et al.RBC－NOS－dependent S－nitrosylation of cytoskeletal proteins improves RBC deformability［J］.PLoS One，2013，8（2）：56759.

［13］Suhr F，Brenig J，Muller R，et al.Moderate exercise promotes human RBC－NOS activity，NO production and deformability through Akt kinase pathway ［J］.Plos One，2012，7（9）：45982.

［14］Adderley SP，Thuet KM，Sridharan M，et al.Identification of cytosolic phosphodiesterases in the erythrocyte：A possible role for PDE5［J］.Med Sci Monit，2011，17（5）：241－247.