柳婷婷

（山東省聊城市植保站，聊城 252053）

1 菌株研究概況及現(xiàn)狀

1.1 木霉T95和T88菌株

木霉 (Trichoderma)是一類重要的植物病害的生防真菌，隸屬于半知菌亞門、絲孢綱、絲孢目、絲孢科，常見于土壤中、植物殘?bào)w、植物的根圍、葉圍、種子、球莖表面及動(dòng)物糞便上，并對許多真菌有拮抗作用。常見的重要菌種有綠色木霉、哈茨木霉、康寧木霉等。

國內(nèi)研究已證明哈茨木霉 （TrichodermaharzianumRifai）T88菌株 （以下簡稱 T88）和綠色木霉 （TrichodermaatrovirideBissett）T95菌株 （以下簡稱T95）能對嚴(yán)重危害楊樹爛皮病菌和楊樹水泡潰瘍病菌有拮抗和重寄生現(xiàn)象[1]。

1.2 球毛殼ND35菌株

球毛殼 (C.globosum)ND35菌株是分離自毛白楊的內(nèi)生真菌優(yōu)勢菌株，并顯示對幾個(gè)普通果樹和森林病原真菌等多種病原菌的拮抗活性。另外，已經(jīng)證明了ND35菌株及其產(chǎn)生的次生代謝物質(zhì)的具有較強(qiáng)的生防活性[2]，能對多種植物的根部病害、葉部病害、枝干病害等多種病害的病原菌產(chǎn)生抑制作用，并能夠促進(jìn)寄主植物生長。

2 材料與方法

2.1 試驗(yàn)材料

2.1.1 供試植物材料

黃瓜：津研四號 （新泰市某種業(yè)有限公司）菜豆：良選一號地豆王 （天津市某種業(yè)）

2.1.2 菌種來源

生防菌種:球毛殼 （Chaetomium globosum）ND35菌種、哈茨木霉 （Trichoderma harzianum）T88和綠色木霉（Trichoderma viride）T95 菌株。

病原菌種：黃瓜猝倒病菌 （Pythium aphanidermatum）Pa菌株和 （Rhizoctonia solani）Rs-1菌株。

以上菌株均由山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理系資源微生物研究室提供。

2.2 室內(nèi)平皿對峙培養(yǎng)

在超凈工作臺(tái)內(nèi)用滅過菌的直徑6mm的打孔器分別取同質(zhì)同量的新鮮培養(yǎng)的T95、T88及ND35和Pa、Rs-1菌絲塊，分別移接到已制備好的直徑為90mm的PDA平板培養(yǎng)基上進(jìn)行對峙培養(yǎng)，距平皿中心15mm處接生防菌菌絲塊，以平皿中心為對稱點(diǎn)的另一側(cè)同時(shí)接病原菌菌絲塊，以病原菌單置平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)做對照，各3個(gè)重復(fù)，置于25°C下培養(yǎng)。3天后測量兩接種點(diǎn)連線上各菌落半徑，計(jì)算病原菌生長抑制率。同時(shí)做木霉菌和毛殼菌的對峙培養(yǎng)，方法相同。

當(dāng)兩菌落接觸相交后，觀察記載生防菌對病原菌的抑制、包圍、侵入并占領(lǐng)病原菌營養(yǎng)空間的過程。

2.3 溫室中的生防試驗(yàn)

2.3.1 對黃瓜猝倒病的防治試驗(yàn)

營養(yǎng)盆內(nèi)播種剛萌發(fā)的黃瓜種子，營養(yǎng)土中分別摻入生防菌的麥粒培養(yǎng)物，每盆3g。7天后接種含病原菌Pa的麥粒培養(yǎng)物，以只接種病原菌Pa培養(yǎng)物而不接生防菌的為對照。每處理4盆，每盆3株，接種4天后調(diào)查發(fā)病情況，計(jì)算防治效果。

防治效果%=（對照組發(fā)病率-防治組發(fā)病率）/對照組發(fā)病率×100%

2.3.2 對菜豆幼苗立枯病的防治試驗(yàn)

營養(yǎng)盆內(nèi)播種剛萌發(fā)的菜豆種子時(shí)，營養(yǎng)土中分別摻入生防菌的麥粒培養(yǎng)物，每盆3.5g。同時(shí)根部接種長滿生防菌的PDA菌絲塊，每株2塊，要注意長菌絲的一面靠在根上。接種生防菌7天后接種病原菌菌餅，并加摻病原菌的麥粒培養(yǎng)物每盆3.5g左右。同時(shí)以只用土壤培養(yǎng)的為空白對照。每處理6盆，每盆3株。7天后調(diào)查病情指數(shù)，計(jì)算防治效果。

防治效果=（對照組病情指數(shù)-處理組病情指數(shù)）/對照組病情指數(shù)×100%。

豆立枯病病害嚴(yán)重度分級標(biāo)準(zhǔn) （方中達(dá)，1998；田淑慧，2006）：

(y=根部病斑橫向直徑/根周長)

0級：根部無病斑；

Ⅰ級： 0＜y≤25%；

Ⅱ級：25%＜y≤50%；

Ⅲ級：50%＜y≤75%；

Ⅳ級： y＞75%。

3 結(jié)果與分析

3.1 平皿對峙培養(yǎng)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果表明，木霉T88和T95以及毛殼菌ND35對兩種病原菌腐霉Pa和立枯絲核Rs-1均有明顯的抑制作用，生長抑制率分別為74.4%、79.3%和47.0%，而綠色木霉T95的拮抗效果最好。在木霉菌與毛殼菌的對峙培養(yǎng)中，T95和T88對ND35的生長抑制率分別為29.1%和32.8%，這可能是由于木霉菌的生長速度較快，迅速占領(lǐng)并擴(kuò)大生存空間所致。

表1 ND35、T88和T95與Rs-1對峙培養(yǎng)結(jié)果

表2 3種生防菌與黃瓜猝倒病病菌Pa對峙培養(yǎng)結(jié)果

3.2 對黃瓜猝倒病的生防效果

因?yàn)辄S瓜苗很小，受腐霉侵染發(fā)病的苗均因根莖腐爛而迅速倒伏，所以無法分級記數(shù)。僅統(tǒng)計(jì)發(fā)病率，計(jì)算防治效果。試驗(yàn)結(jié)果見圖1，黃瓜幼苗只接種毛殼菌ND35的防治效果最好，達(dá)86.7%，而只接種木霉菌T88和T95及兩種生防菌組合防治的效果都不及前者，分別為46.7%，73.3%，55.3%，80%。可以看出，栽培條件下ND35對黃瓜猝倒病的防治作用十分明顯，這可能是ND35的幾種生防機(jī)制綜合作用的結(jié)果。分析其原因可能是提前3天向黃瓜苗接種的ND35能夠定殖于植物根部，激發(fā)了植物的抗病防御反應(yīng)，同時(shí)ND35又對病原菌Pa有很強(qiáng)的抑制作用如重寄生作用等。

3.3 對菜豆幼苗立枯病的生防效果

菜豆苗從感染R.solani到發(fā)病枯死，通常需要一個(gè)較長的時(shí)間。因此實(shí)驗(yàn)中選擇了接種病原菌后7天取樣調(diào)查病情指數(shù)。從試驗(yàn)結(jié)果 （圖2）可以看出，菜豆幼苗只接種木霉菌T88和T95的防治效果最好，達(dá)91.0%，而只接種毛殼菌ND35及兩種生防菌組合防治的效果都稍低，分別為77.4%，45.5%，27.3%?？梢钥闯觯耘鄺l件下木霉菌對菜豆立枯病的防治作用十分明顯，木霉菌與毛殼菌的組合防治效果則明顯低于其中一種菌的單獨(dú)防治效果。

圖1 木霉菌和毛殼菌對黃瓜猝倒病的生防效果

圖2 木霉菌和毛殼菌對菜豆幼苗立枯病的生防效果

4 討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，T88、T95和ND35對P.aphanidermatum和R.solani（即Pa和Rs-1）兩種病原真菌菌絲生長的抑制作用效果是不盡相同的。ND35與Rs-1對峙后，能形成明顯的抑菌帶，且對峙后期出現(xiàn)菌絲纏繞，平行生長等現(xiàn)象。由于木霉菌T95、T88生長速度較快，占領(lǐng)生存空間早，且能產(chǎn)孢較多，因此抑制效果要好于球毛殼菌ND35。

在栽培條件下球毛殼菌ND35對黃瓜猝倒病有較好的防治效果，木霉菌T88和T95則防治菜豆立枯病非常有效，而這兩種生防菌的組合防治對這兩種蔬菜病害的防治效果都比單獨(dú)一種生防菌的效果低得多。因此推薦使用毛殼菌ND35防治黃瓜猝倒病，木霉菌T88和T95防治菜豆立枯病，不建議使用組合防治，以免降低生防效果。

隨著人類環(huán)境保護(hù)意識(shí)的增強(qiáng)，尤其是殺菌劑的大量使用后的惡果，開發(fā)出具有生防潛力、活性的各種微生物來控制管理各類病害的發(fā)生是人類要迫切需要解決的問題。因此木霉菌和毛殼菌在農(nóng)業(yè)中的實(shí)際應(yīng)用，將能夠在園藝作物、農(nóng)作物以及森林枝干等病害管理的安全和環(huán)保方面，開拓一條有前途的新道路，具有廣闊的應(yīng)用前景。

[1]高克祥，劉曉光.木霉菌對楊樹樹皮潰瘍病菌拮抗作用的研究.林業(yè)科學(xué)，2001，37(5):82～88

[2]Gao Kexiang，Liu Xiaoguang,et al.Biocontrol potential of Chaetomium spirale ND35 against canker of apple tree(in English).In:Yang Q(ed).Biological Control and Bio-technology.Harbin:Heilongjiang Science and Technology Press，2003，132～140