楊 華，趙丹陽，秦長生，徐金柱，揭育澤，廖仿炎

(廣東省林業(yè)科學(xué)研究院，廣州 510520)

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不同油茶種和品種對炭疽病的抗性觀察

楊 華，趙丹陽*，秦長生，徐金柱，揭育澤，廖仿炎

(廣東省林業(yè)科學(xué)研究院，廣州 510520)

在林間調(diào)查了廣東省內(nèi)栽培的高州油茶、廣寧紅花油茶和39個(gè)品種的普通油茶對油茶炭疽病的抗病性，并在室內(nèi)研究了高州油茶、廣寧紅花油茶和9個(gè)品種的普通油茶葉片對炭疽病的抗病性。林間自然狀態(tài)下調(diào)查結(jié)果表明，廣寧紅花油茶對炭疽病的抗病性最強(qiáng)，普通油茶‘粵韶77-1號’、‘鐵城1號’和‘湘林1號’抗性中等，其他品種均表現(xiàn)為感?。皇覂?nèi)測定結(jié)果表明，廣寧紅花油茶屬于抗病種類，‘鐵城1號’和‘粵韶77-1號’屬于中度抗病品種，其他為感病品種。

油茶； 炭疽?。?抗病性； 品種

油茶(oil-teaCamellia)是山茶科(Theaceae)山茶屬(Camellia)中具有生產(chǎn)價(jià)值的油用物種的總稱。油茶炭疽病一直是油茶林中最主要病害，在各油茶產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生，引起落果、落蕾、落葉、枝梢枯死、枝干潰瘍，甚至整株衰亡[1]。主要油茶產(chǎn)區(qū)常年因炭疽病減產(chǎn)10%～30%，重病區(qū)可減產(chǎn)50%以上，甚至100%。油茶炭疽病病原菌為膠孢炭疽菌[Colletotrichumgloeosporioides(Penz.)]，屬半知菌類真菌，是一種弱寄生菌，具有潛伏侵染特性，油茶從出苗到生長期均可受侵染，病菌分生孢子借風(fēng)、雨、昆蟲等媒介傳播，在自然狀態(tài)下，病菌可通過自然孔口侵入或表皮直接侵入；油茶各器官在一年中的被害順序是先嫩梢、嫩葉、果實(shí)，再花芽、葉芽直至初冬的花，由病蕾發(fā)育成的花、幼果和枝端上的病蕾痕會繼續(xù)發(fā)病，形成一個(gè)年周期的侵染鏈。油茶果實(shí)被炭疽病侵染后，種子的含油量降低50%左右，且病菌可穿透油茶果的外皮層侵染種子；病果的種子內(nèi)外均可帶菌，種子播種后出苗率顯著降低，而且實(shí)生苗有10%～58%的帶菌率，導(dǎo)致遠(yuǎn)距離傳播炭疽病[2]。

目前油茶炭疽病的防治主要是采取化學(xué)防治及無公害防治手段，其中無公害防治包括使用生物源農(nóng)藥及選育抗病品種。關(guān)于油茶炭疽病抗性品種選育方面的研究，吳光金等[3]從湖南普通油茶(C.oleifera)中選育出抗炭疽病優(yōu)株，其中高抗型優(yōu)株人工接種果感病率為零，抗病型優(yōu)株果病率為5%～10%，這兩種抗病類型果自然感病率為0.2%～2.5%；段琳[4]調(diào)查了7個(gè)油茶品種在安徽省林間自然發(fā)病率，結(jié)果表明，攸縣油茶(C.yuhsienensis)在林間為高抗品種，‘紅果油茶’炭疽病的發(fā)病率平均在1%以下，‘青果油茶’個(gè)別單株發(fā)病率高達(dá)100%，平均發(fā)病率在25%以上；楊光道[5]對17個(gè)油茶品種進(jìn)行了林間調(diào)查并在室內(nèi)對其中8個(gè)品種的油茶果實(shí)進(jìn)行了炭疽病抗性研究，結(jié)果表明，攸縣油茶、茶梨油茶(C.oetopetala)、‘徽州小紅’和‘徽州大紅’的抗性較強(qiáng)，‘舒城大紅’、‘浙江紅花’、‘羅漢果’和‘軟枝油茶’抗性中等；羅桂華[2]報(bào)道江西贛州地區(qū)的‘宜春中子’及黃花糙殼油茶，自然和人工接種發(fā)病率都很低，產(chǎn)量也很穩(wěn)定，湖南的‘橫山苦櫧子’和‘紫皮果’抗病性顯著高于一般的普通油茶；陳彧[6]從湖南常寧油茶基地篩選出抗病性優(yōu)良單株‘林大140’，其自然感病率為0，人工接種感病率為0，鮮出籽率53%，種仁含油率為54%。

作者在廣東省油茶病蟲害調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，炭疽病對油茶苗期的危害非常嚴(yán)重，尤其是高州油茶(C.gauchowensis)苗的發(fā)病率高達(dá)90%以上，在生產(chǎn)上造成了嚴(yán)重的危害。因此，本文通過林間調(diào)查和室內(nèi)測定，針對適宜于廣東省內(nèi)種植的油茶種和品種進(jìn)行了抗性觀察，以期能找出適宜于廣東省栽培的抗病品種。

1 材料與方法

1.1 林間自然抗病性調(diào)查

1.1.1 油茶種和品種

調(diào)查地點(diǎn)為廣東省內(nèi)油茶苗圃基地及生長期油茶林地，調(diào)查對象主要有高州油茶(C.gauchowensis)、廣寧紅花油茶(C.semiserrata)和普通油茶(C.oleifera)的39個(gè)品種。

1.1.2 病害調(diào)查

在廣東省的韶關(guān)(粵韶系列普通油茶)、清遠(yuǎn)(湘林系列、粵連系列、鐵城1號普通油茶)、河源(贛州油系列、長林系列、贛無系列、亞林系列普通油茶)、梅州(岑溪軟枝系列普通油茶)、肇慶(廣寧紅花油茶)、云浮(廣寧紅花油茶)和茂名(高州油茶)，于2010-2013年每年的4-5月，選擇未進(jìn)行過防治的油茶苗圃及純林，定期定點(diǎn)調(diào)查不同品種油茶葉片的感病情況。采用對角線法取樣，每品種取6個(gè)點(diǎn)，每點(diǎn)調(diào)查20株(苗)或10株(生長株)，統(tǒng)計(jì)每株的病葉數(shù)，然后計(jì)算其發(fā)病率。按表1所示指標(biāo)劃分抗病等級[7]。

發(fā)病率(%)=(調(diào)查病葉數(shù)/調(diào)查總?cè)~數(shù))×100。

表1 油茶葉片抗炭疽病等級劃分標(biāo)準(zhǔn)

1.2 室內(nèi)油茶葉片抗病性測定

1.2.1 供試油茶

供試材料為一年生油茶，分別為高州油茶、廣寧紅花油茶和普通油茶品種‘粵韶77-1號’、‘粵連74-2號’、‘鐵城1號’、‘岑溪軟枝2號’和‘岑溪軟枝3號’、‘湘林1號’、‘湘林XLC15’、‘長林23號’和‘贛撫20’。

1.2.2 油茶炭疽病菌菌種及病菌分生孢子懸浮液和菌絲塊制備

在發(fā)病盛期，采集發(fā)病的葉片帶回實(shí)驗(yàn)室備用。采用常規(guī)組織分離法[8]從油茶病葉上分離炭疽菌。在發(fā)病葉片病健交界處切取小塊病組織(3 mm×3 mm)，沖洗干凈，用70%乙醇消毒45 s，再用0.1%的升汞溶液消毒45 s，然后用無菌水漂洗3次，每次1 min。最后將葉片貼在PPDA平板上，置于25 ℃恒溫連續(xù)光照條件下培養(yǎng)，待長出菌落后，用點(diǎn)刺法在邊緣挑取菌絲尖端移至新鮮的PPDA平板上。

孢子懸浮液制備：相同條件下培養(yǎng)5 d后在無菌操作臺內(nèi)用滅菌的接種針劃傷菌落，刺激分生孢子團(tuán)的產(chǎn)生。10 d后用滅菌接種針挑取粉紅色的分生孢子團(tuán)，用無菌水稀釋分生孢子濃度為103個(gè)/mL。

菌絲塊制備：將稀釋好的分生孢子懸浮液涂布到PPDA平板上，25 ℃恒溫連續(xù)光照條件下培養(yǎng)，待長出菌落后挑取單個(gè)分生孢子進(jìn)行單孢純化，純化菌株保存于PPDA斜面上,置4 ℃冰箱中儲存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 病原菌的菌落形態(tài)、分生孢子鑒定

將供試菌株轉(zhuǎn)入新鮮的PPDA平板上，25 ℃條件下恒溫、連續(xù)光照培養(yǎng)，逐天記錄供試菌株在PPDA平板上的菌落形態(tài)特征。用同樣的劃傷法刺激分生孢子產(chǎn)生，配制成懸浮液，制作玻片在光學(xué)顯微鏡下觀察，測量分生孢子大小并記錄形態(tài)特征。

1.2.4 致病性測定

1.2.4.1 菌絲塊接種

收集11個(gè)品種葉齡一致的健康油茶葉片，用75%乙醇對葉片進(jìn)行表面消毒后用無菌水將乙醇沖洗干凈，置于鋪有滅菌吸水紙的搪瓷盤中，并用滅菌的接種針刺傷葉片表面但不刺穿，每片葉刺傷3處。將供試菌株轉(zhuǎn)入新鮮的PPDA平板上，25 ℃恒溫連續(xù)光照條件下培養(yǎng)5 d后，在菌落邊緣打取直徑6 mm菌絲塊。將供試菌株的菌絲塊分別接于葉片刺傷處，每個(gè)品種接種10片，以空白PPDA塊接種作對照，置于25 ℃恒溫連續(xù)光照培養(yǎng)箱內(nèi)保濕培養(yǎng)；接種5 d后逐天觀察并記錄葉片發(fā)病情況，統(tǒng)計(jì)侵染率。試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.4.2 分生孢子懸浮液接種

取11個(gè)品種的低齡幼苗各10株，每株選取10片健康葉片，用75%乙醇對葉片進(jìn)行表面消毒后用無菌水將乙醇洗干凈，并用滅菌的接種針刺傷葉片表面但不刺穿,每個(gè)葉片刺傷3處。配制濃度為1×106個(gè)/mL的分生孢子懸浮液用于接種。采用點(diǎn)接法，將配制好的分生孢子懸浮液用移液槍在每個(gè)刺傷處點(diǎn)接10 μL，每個(gè)品種接種10片，以無菌水接種作對照。用塑封袋套入接種后的葉片，并在塑封袋內(nèi)放入潤濕的脫脂棉保濕，5 d后將塑封袋取下，逐天記錄葉片發(fā)病情況。

統(tǒng)計(jì)發(fā)病的葉片數(shù)，發(fā)病率按有病斑的葉片數(shù)占接種總?cè)~片數(shù)的百分率計(jì)算。

1.3 分析方法

應(yīng)用DPS對結(jié)果進(jìn)行顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 林間不同種和品種油茶葉片對炭疽病的感病率

對林間不同油茶種和品種的發(fā)病率進(jìn)行調(diào)查，應(yīng)用Duncan新復(fù)極差法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果如表2所示，不同油茶種和品種間發(fā)病程度存在顯著差異。廣寧紅花油茶屬于抗病種類；普通油茶‘粵韶77-1號’、‘鐵城1號’和‘湘林1號’屬于中度抗病品種；其余品種均為感病品種。

表2 不同油茶種和品種葉片在林間的發(fā)病率1)

續(xù)表2 Table 2(Continued)

種或品種Speciesorcultivars原產(chǎn)地Native廣東省栽培區(qū)CultivationregioninGuangdongProvince發(fā)病率/%Diseaseincidence2010201120122013平均Mean表現(xiàn)型Phenotype長林55號江西西部、廣州、惠州、河源21．610．230．052．128．5efghijkCDEFGHIS長林3號江西西部、廣州、惠州、河源39．625．723．922．728．0efghijkCDEFGHIS贛州油1號江西清遠(yuǎn)、韶關(guān)、河源、梅州33．933．432．711．627．9efghijkCDEFGHIS岑溪軟枝2號廣西西部、梅州31．216．330．530．327．1efghijkCDEFGHIS粵連74?1廣東連州清遠(yuǎn)14．533．337．821．726．8efghijkCDEFGHIS粵韶74?4廣東韶關(guān)韶關(guān)14．330．033．627．826．4efghijkCDEFGHIS贛無11江西清遠(yuǎn)、河源、梅州30．048．014．010．225．6efghijkCDEFGHIS岑溪軟枝3號廣西西部、梅州26．823．716．929．824．3efghijklCDEFGHIS粵韶75?2廣東韶關(guān)韶關(guān)33．746．510．23．823．6efghijklCDEFGHIS長林53號江西西部、廣州、惠州、河源21．77．528．630．022．0fghijklDEFGHIS粵連73?11廣東連州清遠(yuǎn)21．628．612．715．419．6ghijklDEFGHIS粵韶76?1廣東韶關(guān)韶關(guān)9．817．915．233．019．0hijklDEFGHIS湘林XLC15湖南西部、韶關(guān)、清遠(yuǎn)、梅州26．712．518．413．917．9hijklDEFGHIS粵連74?5廣東連州清遠(yuǎn)8．622．913．726．117．8hijklDEFGHIS粵連74?2廣東連州清遠(yuǎn)4．87．114．238．516．2ijklEFGHIS湘林27號湖南西部、韶關(guān)、清遠(yuǎn)、梅州12．411．618．722．116．2ijklEFGHIS岑溪軟枝油茶廣西西部、梅州8．223．517．914．316．0ijklEFGHIS粵連74?3廣東連州清遠(yuǎn)26．33．811．721．515．8ijklEFGHIS粵連74?4廣東連州清遠(yuǎn)13．610．911．226．415．5ijklEFGHIS粵韶77?1廣東韶關(guān)韶關(guān)7．114．910．018．712．7jklFGHIMR鐵城1號廣東清遠(yuǎn)清遠(yuǎn)3．911．710．514．610．2jklGHIMR湘林1號湖南西部、韶關(guān)、清遠(yuǎn)、梅州5．413．911．53．78．6klHIMR廣寧紅花油茶廣東廣寧肇慶1．52．32．63．12．4lIR

1) 表中同列數(shù)據(jù)后不同的小寫和大寫字母分別表示在0.05和0.01水平上差異顯著。下同。

Data followed by different small and capital letters are significantly different at 0.05 and 0.01 levels.The same below.

2.2 病原菌的形態(tài)特征

在PPDA平板上病菌菌落最初為白色，菌絲稀疏至茂密，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長變?yōu)榛野咨?，菌落背面為褐色。培養(yǎng)5 d后，菌落正面呈圓形、淺黑色，絨毛狀，邊緣呈白色。菌株在PPDA平板上正常培養(yǎng)很少產(chǎn)孢，但是菌落受創(chuàng)傷后在創(chuàng)口周圍易形成散生的橘紅色分生孢子堆，分生孢子短桿狀、單胞、無色、大小為(13±2)μm×(3±0.5)μm。

2.3 不同種和品種油茶葉片接種后炭疽病的發(fā)生情況

致病性測定結(jié)果表明，接種5 d后葉片開始發(fā)病，病斑初始以刺傷點(diǎn)為中心向外圍擴(kuò)散蔓延，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，由小圓點(diǎn)逐漸擴(kuò)展為圓形或者橢圓形病斑，病斑顏色為褐色或黑褐色，12 d后病斑擴(kuò)展到0.2～0.8 cm左右。

無論是菌絲塊接種還是分生孢子懸浮液接種，健康油茶葉片均有發(fā)病，但不同接種方式其發(fā)病率不同。菌絲塊接種后，廣寧紅花油茶、高州油茶和普通油茶9個(gè)品種的葉片發(fā)病率均為100%；分生孢子懸浮液接種后，不同品種發(fā)病率略有不同，如表3所示，廣寧紅花油茶的發(fā)病率最低，普通油茶‘鐵城1號’、‘湘林1號’和‘粵韶77-1號’為中度抗病品種，普通油茶‘粵連74-2號’、‘長林23號’、‘湘林XLC15’、‘岑溪軟枝2號’、‘岑溪軟枝3號’、‘贛撫20’發(fā)病率較高，高州油茶發(fā)病率最高。

試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，無論是用菌絲塊還是分生孢子懸浮液接種，高州油茶新葉的發(fā)病率均為100%，而老葉幾乎未有發(fā)??；其他品種油茶的新葉和老葉均有發(fā)病。

表3 分生孢子懸浮液接種后不同油茶種和品種葉片的抗病性

3 小結(jié)與討論

林間自然狀態(tài)下，廣寧紅花油茶、高州油茶和39個(gè)普通油茶品種對炭疽病抗性存在顯著差異，廣寧紅花油茶屬于抗病種類；普通油茶‘粵韶77-1號’、‘鐵城1號’和‘湘林1號’屬于中度抗病品種；其余均為感病品種。林間調(diào)查發(fā)現(xiàn)，廣寧紅花油茶葉片在春季感染炭疽病后至秋季表現(xiàn)為健康葉片，其葉片中是否存在自動治愈炭疽病因子還有待于進(jìn)一步研究。

室內(nèi)對廣寧紅花油茶、高州油茶和9個(gè)普通油茶品種接種炭疽菌后發(fā)病率測定結(jié)果表明，廣寧紅花油茶的發(fā)病率最低，普通油茶‘鐵城1號’、‘湘林1號’和‘粵韶77-1號’為中度抗病品種，‘粵連74-2號’、‘長林23號’、‘湘林HLC15’、‘岑溪軟枝2’、‘岑溪軟枝3號’、‘贛撫20號’發(fā)病率較高，高州油茶發(fā)病率最高。

林間調(diào)查和室內(nèi)測定均表明，廣寧紅花油茶屬于抗病種類；普通油茶‘鐵城1號’和‘粵韶77-1號’屬于中度抗病品種。

油茶炭疽菌的分生孢子是病害初侵染和再侵染的主要來源, 因此, 林間菌源的數(shù)量直接影響到病害的嚴(yán)重程度，此外，油茶生長環(huán)境對于病害的發(fā)生也有一定影響?？共⌒粤挤N苗木造林成活率較高，而且可以降低農(nóng)藥的使用，節(jié)約成本、保護(hù)環(huán)境，具有其他良種不可替代的優(yōu)越性，因此，油茶抗炭疽病良種的選育將推進(jìn)油茶產(chǎn)業(yè)的健康、快速發(fā)展。

[1] 袁嗣令，張能唐，翁月霞，等.油茶炭疽病的研究[J].植物保護(hù)學(xué)報(bào)，1963，2(3)：253-261.

[2] 羅桂華.油茶炭疽病的發(fā)生及防治技術(shù)[J].安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，2009，15(16)：202-203，208.

[3] 吳光金，林雪堅(jiān)，劉志宏，等.普通油茶抗炭疽優(yōu)株選育[J].林業(yè)科技開發(fā)，1997(4)：22-23.

[4] 段琳.紅果油茶抗炭疽病機(jī)理研究[D].合肥：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)，2003.

[5] 楊光道,束慶龍,段琳，等.主要油茶品種對炭疽病的抗性研究[J].安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，31(4):480-483.

[6] 陳彧，周國英，宋光桃，等.油茶抗炭疽病優(yōu)良單株篩選及抗病機(jī)理研究[J].湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2010，36(4)：426-429.

[7] 吳澤民，李宏開，束慶龍.現(xiàn)代林業(yè)研究方法[M].北京：中國林業(yè)出版社，1999:168-208.

[8] 方中達(dá).植病研究方法[M].第3版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1998.

Resistance of different species and cultivars of oil-tea Camellia toColletotrichumgloeosporioides

Yang Hua, Zhao Danyang, Qin Changsheng, Xu Jinzhu, Jie Yuze, Liao Fangyan

(Guangdong Academy of Forestry, Guangzhou 510520，China)

Resistance ofCamelliagauchowensis，C.semiserrataand 39 cultivars ofCamelliaoleiferaplanted in Guangdong Province toColletotrichumgloeosporioideswere investigated in natural forests, and disease resistance ofC.gauchowensis，C.semiserrataand 9 cultivars ofC.oleiferawere also studied in laboratory. The results showed that:In natural forests,C.semiserratahad higher resistance to the disease,C.oleifera‘YueShao 77-1’, ‘Tiecheng 1’ and ‘Xianglin 1 ’had moderate resistance, and the remainders were susceptible. In laboratory,C.semiserratahad higher resistance, ‘Tiecheng 1’and ‘Yueshao 77-1’ had moderate resistance, and the remainders were susceptible.

oil-teaCamellia；Colletotrichumgloeosporioides； resistance； cultivars

2014-02-20

2014-05-28

廣東省林業(yè)科技創(chuàng)新專項(xiàng)資金(2012KJCX011-01，2013KJCX009-01，2011KJCX014-04)

S 435.65

A

10.3969/j.issn.0529-1542.2015.02.038

* 通信作者 E-mail: zhaody@sinogaf.cn