王鑫（江蘇大學(xué)，江蘇鎮(zhèn)江 212013）

解析刺槐花中黃酮類成分的高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)

王鑫（江蘇大學(xué)，江蘇鎮(zhèn)江 212013）

本文主要分析刺槐花中黃酮類成分的高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，利用乙腈-水和安捷倫Zorbax SB柱作為基本流動(dòng)相，以此來(lái)合理分離刺槐花中存在成分。

刺槐花具有一定藥用價(jià)值和食用價(jià)值，經(jīng)過(guò)多年來(lái)的分析和研究，發(fā)現(xiàn)刺槐花的藥理和化學(xué)成分，其中存在一定量的黃酮類化合。在分析刺槐花中存在的實(shí)際黃酮類成分的時(shí)候合理利用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，分析和研究11中刺槐花黃酮類成分，這種方式可靠、方便、簡(jiǎn)單、具有一定應(yīng)用價(jià)值。

1 儀器和試藥

安捷倫1100型液相色譜儀，主要構(gòu)成就是高性能自動(dòng)進(jìn)樣器、二元泵、G1315B二極管檢測(cè)器、在線脫氣機(jī)，并且還需要配備一定的Qualitativenalysis質(zhì)譜分析軟件、MassHunter色譜工作站、電噴霧離子源等設(shè)備，采集某區(qū)域內(nèi)部的刺槐花，使用的試藥是通過(guò)某醫(yī)院提供的刺槐苷，水是純凈水、乙腈是色譜純，其他試劑都屬于分析純［1］。

2 方法

2.1 供試品溶液制備

精密稱定20g刺槐花鮮品，放置在帶塞子的錐形瓶中，精密加入250ml70%的乙醇，進(jìn)行一定密塞，并且三十分鐘超聲提取三次，過(guò)濾以后合理合并濾液，利用石油醚進(jìn)行脫脂，適量水熱容，提出正丁醇，回收提取液直到干，利用50mL甲醇來(lái)溶解提取物。

2.2 色譜及質(zhì)譜條件

2.2.1 液相色譜條件

流動(dòng)相是0.1%的醋酸和乙腈，（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱Agilent Zorbax SBAq C18，B相是0.1醋酸，A相是乙腈，通過(guò)梯度洗脫?；具^(guò)程是：5%-20%A、0-30min，20%-45%A、30-6min，45%-60%A、60-80min，10μL進(jìn)樣量。25℃柱溫、1.0 mL/min流速。

2.2.2 ESI質(zhì)譜條件

ESI質(zhì)譜條件是利用ESI離子源，在具備正離子的基礎(chǔ)上，3：1的柱后分流比，基本參數(shù)是：40psi霧化氣壓力、350℃干燥氣溫度、10mL/min干燥氣流速、4000V毛細(xì)管電壓，選擇200V和120V的碎片電壓，掃描質(zhì)量的范圍m/z是100-1000，參比離子m/z是922.0097和121.0508.

3 結(jié)果和討論

3.1 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化

刺槐花中最基本的成分是黃酮類，為確保具備比較良好的峰形，流動(dòng)相中適當(dāng)加入冰醋酸，為具有較好重現(xiàn)性的總離子流圖，在配置流動(dòng)相時(shí)，需控制冰醋酸質(zhì)量分為0.1%，同時(shí)，利用正離子來(lái)掃描質(zhì)譜檢測(cè)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

3.2 刺槐花中化學(xué)成分的鑒別

刺槐花中提取的黃酮類成分典型液相圖如圖所示：發(fā)現(xiàn)當(dāng)檢測(cè)具有多于23個(gè)峰的時(shí)候，合理鑒別11個(gè)峰，對(duì)比分析物質(zhì)的質(zhì)譜圖和保留時(shí)間，發(fā)現(xiàn)4峰是屬于刺槐苷，峰3-7、1出現(xiàn)類似的紫外光譜，有機(jī)結(jié)合相同的（m/z=287，［苷元+H］+）苷元離子峰和質(zhì)譜二級(jí)裂解，其中都具備山奈酚的糖苷。1峰適當(dāng)脫去相應(yīng)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為146的鼠李糖結(jié)構(gòu)碎片，經(jīng)鑒定，這種化合物中具備山奈酚-3-0-α-L-鼠李糖苷，經(jīng)分析峰4以及6的分子離子峰發(fā)現(xiàn)都屬于三糖苷，其中4峰是屬于刺槐苷，也就是說(shuō)刺槐花中具備黃酮苷含量最高，主要就是山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖基（1→6）-β-D-半乳糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷；峰5具有類似于峰4的解列碎片和相對(duì)分子質(zhì)量，反向可能存在不一樣的糖基，峰6包含的是山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖基（1→6）-β-D-葡萄糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷。在反相柱上，相比較于葡糖糖基糖苷，半乳糖基的糖苷會(huì)先出峰，通過(guò)分析，峰7、5、3，都屬于二糖苷，但是峰3和峰7具有不相同的裂解形式，峰3以及峰5會(huì)先脫掉質(zhì)量分?jǐn)?shù)為162的六碳糖結(jié)構(gòu)碎片。但是峰7會(huì)先脫掉146質(zhì)量分?jǐn)?shù)的鼠李糖結(jié)構(gòu)碎片。在山奈酚的3，7-二氧糖苷的前提下，峰5和峰3屬于奈酚-3-O-β-D-葡萄糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷以及山奈酚-3-O-β-D-半乳糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷，峰7就不相同，屬于山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖基（1→6）-β-D-葡萄糖。此外，峰8-峰11也會(huì)形成一定的紫外光譜，經(jīng)過(guò)質(zhì)譜二級(jí)解列，可以得到具備相同m/z=285的苷元離子峰，因此，都屬于刺槐素的糖苷，合理分析山奈酚糖苷，可以發(fā)現(xiàn)實(shí)際包括刺槐素-7-O-β-D-木糖基（1→2）-［α-L-鼠李糖基（1→6）］-β-D-葡萄糖苷和刺槐素-7-O-α-L-鼠李糖基（1→6）-β-D-葡萄糖苷、槐素-7-O-β-D-葡萄糖基（1→2）-［α-L-鼠李糖基（1→6）］-β-D-葡萄糖苷、槐素-7-O-α-L-鼠李糖基（1→6）-β-D-半乳糖苷；另外峰2具有m/z=303的苷元離子峰，有機(jī)結(jié)合質(zhì)譜數(shù)據(jù)以及紫外數(shù)據(jù)，經(jīng)鑒定，屬于槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖基（1→6）-β-D-葡萄糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷。

圖1 提取刺槐花液相圖

4 結(jié)語(yǔ)

綜上，依據(jù)HPLC-DAD-ESI-MS/MS技術(shù)，有機(jī)集合碎片離子技術(shù)和紫外線數(shù)據(jù)分析，鑒別和分析黃酮苷類化學(xué)成分，可確定出11種成分，此檢測(cè)方式，十分靈敏、快速、準(zhǔn)確、高精度，是一種有效控制刺槐花成分的方式。

［1］王嵐，王雪芹，仲浩等.刺槐花中黃酮類成分的高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析［J］.食品與藥品，2013（4）：240-241，242.