徐湘婷　王鵬　羅紹忠　侯艷　邵宛芳　楊繼紅

【摘要】目的：探討普洱熟茶提取物茶褐素對2型糖尿病小鼠的降血糖作用及其機制。方法：高脂飲食加低劑量鏈脲菌素建立小鼠2型糖尿病模型，連續(xù)灌胃給予0.25、0.5、1.0g/kg/d茶褐素6周，實驗結(jié)束后檢測空腹血糖、胰島素、甘油三酯、總膽固醇，取肝臟測肝糖原含量。結(jié)果：普洱熟茶茶褐素與模型組比較：空腹血糖、胰島素、甘油三酯、總膽固醇顯著降低，肝糖原顯著升高。結(jié)論：普洱熟茶提取物茶褐素可有效降低2型糖尿病小鼠的血糖水平及改善其糖、脂代謝，作用機制可能與增加胰島素敏感性有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】茶褐素；糖尿病小鼠；血糖

【中圖分類號】R-332【文獻標(biāo)志碼】A【文章編號】1007-8517（2015）20-0009-02

HypoglycemicEffectsofFermentedPuerteaExtracts-TheabrowninsinMiceofType2Diabetes

XUXiangting1，WANGPeng1，LUOShaozhong1，HOUYan2，SHAOWanfang2，YANGJihong1**

（1.SchoolofPharmaceuticalScience&YunnanKeyLaboratoryofPharmacologyforNaturalProducts，KunmingMedicalUniversity，Kunming，650500，China2.CollegeofLongrunPu-erhTea，YunnanAgriculturalUniversity，Kunming，650201，China）Abstract：Objective：ToexplorethehypoglycemiceffectsandmechanismsoftheabrowninsfromfermentedPuerteainmiceofType2diabetes.Methods：Todevelopamicemodeloftype2diabetesmellitusbyhighfatdietwithlowdosestreptozotocin.Attheexperimentalendpoint，thefastingserumglucose，insulin，triglyceride，totalcholesterolandliverglycogenlevelsweremeasured.Results：ThecomparisonamongtheabrowninsoffermentedPuerteagroupsandmodelgrouprevealedthat：Levelsofthefastingserumglucose，insulin，triglycerideandtotalcholesterolweredecreasedandliverglycogenlevelsincreasedsignificantlyintheabrowninsgroups.Conclusion：fermentedPuerteaextracts-theabrowninscanbeusedastreatmentforthemicemodeloftype2diabetesmellitus.Theabrowninscanimprovedglucoseandlipidmetabolism，andthiseffectmaybeassociatedwithincreasinginsulinsensitivity.

Keywords：theabrownins；diabeteticmice；bloodglucose

2型糖尿?。═ype2diabetes，T2DM）的主要表現(xiàn)是出現(xiàn)胰島素抵抗（InsulinResistance，IR）和胰島β細(xì)胞功能失常引起的相對胰島素不足[`1-3]。雖然目前口服降糖西藥能有效的控制T2DM的高血糖，但對T2DM慢性并發(fā)癥的預(yù)防和治療仍缺乏有效措施，并且具有較大的毒副作用[`4-5]。普洱茶是以云南大葉種曬青茶為原料，按特定的加工工藝生產(chǎn)的具有獨特品質(zhì)特征的茶葉[`6-7]。目前，對綠茶、烏龍茶等各種茶類已有不少的研究報道，但對普洱茶的功效研究尚屬起步階段，普洱熟茶茶褐素（Theabrownins，TB）對T2DM作用的研究報道很少，故本實驗擬探討普洱熟茶TB對T2DM小鼠降糖作用及可能機制。為今后普洱茶功能食品的研發(fā)或其單體物質(zhì)開發(fā)抗糖尿病藥物提供科學(xué)依據(jù)及理論基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1實驗動物5～6周齡SPF級C57BL/6J小鼠60只，雄性，18±2g，北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司[`SCXK（京）2012-0001]。

1.2高脂飼料71.8%基礎(chǔ)飼料、2%膽固醇、8%蛋黃粉、18%豬油、0.2%膽酸鈉[`8]。

1.3受試物劑量設(shè)置及分組

1.3.1受試物普洱熟茶TB由云南農(nóng)業(yè)大學(xué)龍潤普洱茶學(xué)院制備提供，4℃低溫冷藏保存。所用茶葉樣品由三個機構(gòu)提供的不同來源的普洱茶熟餅1∶1∶1混合：①云南龍潤茶業(yè)集團云南農(nóng)大龍潤普洱茶學(xué)院監(jiān)制；（龍潤）；②中國普洱茶研究院研制，云南省思茅茶樹良種場生產(chǎn)；（帕卡）；③云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究院西雙版納普洱茶研究院，勐海縣云茶科技有限責(zé)任公司；（云茶）。

1.3.260只小鼠隨機分成2組陰性對照組（10只）及模型動物（50只），陰性對照組給予基礎(chǔ)飼料，模型組給予高脂飼料造模4周，腹腔注射鏈脲菌素（Streptozotocin，STZ）50mg/kg（臨用前溶解于0.1mol/L、pH4.2的檸檬酸一檸檬酸鈉緩沖溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用，置于冰上），連續(xù)3d[`9-11]。穩(wěn)定1周后空腹血糖（Fastingbloodglucose，F(xiàn)BG）高于11.1mmol/L為糖尿病模型建造成功[`12]。根據(jù)空腹血糖水平，把模型動物50只隨機分成5組，即模型組、二甲雙胍組（0.15g/kg·bw）、普洱熟茶TB低（0.25g/kg·bw）、中（0.50g/kg·bw）、高劑量組（1.0g/kg·bw），每組10只動物。陰性對照組及模型組灌胃給予0.9%的生理鹽水，其余4組不同組別動物每天給予相應(yīng)受試物或?qū)φ掌芬淮危B續(xù)給藥6周。

1.4試驗儀器TMS-1024全自動生化分析儀，日本京都；ADVIACentaurCP全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，德國；ACCU-CHEKActive血糖儀，美國羅氏公司；DiagnosticsIns.KDC-2046離心機，中國科技大學(xué)科技實業(yè)總公司中佳光電儀器分公司；BIO-RAD550酶標(biāo)儀，美國BIO-RAD公司。

1.5觀察指標(biāo)實驗結(jié)束后，所有動物禁食不禁水12h，摘眼球取血，4℃，3000r/min離心10min，取血清，放入-80℃冰箱冷凍待測。檢測空腹血糖（Fastingbloodglucose，F(xiàn)BG）、胰島素（Fastinginsulin，F(xiàn)INS）、甘油三酯（Triglyceride，TG）、總膽固醇（Totalcholesterol，TC），肝勻漿制備測定肝糖原含量。

1.6統(tǒng)計方法應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件包對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，各組間FBG、FINS、TG、TC和肝糖原的比較采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1普洱熟茶TB對小鼠空腹血糖的影響

2.1.1與陰性對照組比較模型組、二甲雙胍組、普洱熟茶TB低中高劑量組小鼠空腹血糖無論在給藥前，還是連續(xù)給藥6周后均顯著的高于陰性對照組（P<0.01），提示模型成功。

2.1.2灌胃6周后普洱熟茶TB的中、高劑量組及二甲雙胍組血清空腹血糖明顯低于模型組（P<0.01）及同組給藥前血糖水平（P<0.05或P<0.01），而且呈現(xiàn)劑量效應(yīng)關(guān)系，提示普洱熟茶TB有明顯降低糖尿病小鼠血糖水平的作用，見表1。

給藥劑量/g/kg給藥容量

陰性對照組/0.2ml/10g4.11±0.674.22±0.86模型組/0.2ml/10g14.52±2.1117.59±3.64二甲雙胍組0.150.2ml/10g14.44±1.939.43±3.29**##TB低劑量組0.250.2ml/10g14.68±2.1315.48±3.25TB中劑量組0.50.2ml/10g14.83±2.3212.34±2.44**#TB高劑量組1.00.2ml/10g15.12±2.2210.64±3.02**##[BG）F〗注：與模型組相比，**P<0.01；與給藥前比較，#P<0.05，##P<0.05。

2.2普洱熟茶TB對糖尿病小鼠胰島素、血脂及肝糖原的影響

2.2.16周實驗結(jié)束時，普洱熟茶TB中、高劑量組及二甲雙胍組較模型組血清胰島素水平有顯著的降低（P<0.01），而且呈現(xiàn)劑量效應(yīng)關(guān)系，低劑量組與模型組相比有降低趨勢，但差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（表2），提示TB降低了糖尿病小鼠胰島素分泌水平。

2.2.2普洱熟茶TB高劑量組二甲雙胍組血清TG、TC水平較模型組相比顯著降低，TB低、中劑量組與模型組相比有降低趨勢，但差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），提示TB有改善脂質(zhì)代謝的作用（表2）。

2.2.3普洱熟茶TB高劑量組二甲雙胍組肝糖原較模型組顯著升高（P<0.05或P<0.01），低、中劑量組與模型組相比有升高趨勢，但差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），有一定的劑量效應(yīng)關(guān)系，提示普洱熟茶TB有抑制肝糖原分解、促進其累積的作用（表2）。

表2普洱熟茶TB對糖尿病小鼠胰島素、血脂及肝糖原的影響

3討論

普洱茶茶色素，是指從普洱茶中提取的一類水溶性酚性色素，包括茶黃素（TF）、茶紅素（TR）、茶褐素（TB）。茶褐素13]系指一類能溶于水而不溶于乙酸乙酯和正丁醇的褐色色素，除含有多酚類的氧化聚合產(chǎn)物外，還含有氨基酸、含氮物質(zhì)、糖類、沒食子酸（GA）、咖啡因等結(jié)合物。據(jù)羅龍新等[`14]研究，在渥堆過程中，其總的趨勢是茶黃素和茶紅素顯著下降，茶褐素大量積累。紅碎茶中（TF+TR）/TB∶1.52，而普洱茶中（TF+TR）/TB=0.03，在普洱茶發(fā)酵過程中，TB的含量一直增加，TB是普洱茶中十分獨特的成分。并且對普洱茶的品質(zhì)形成有十分重要的作用，TB結(jié)構(gòu)復(fù)雜，分離純化的難度很大，其組成至今還不太明確。茶褐素的成分和作用及其變化規(guī)律需要進一步探討。本實驗結(jié)果表明，普洱熟茶TB有降低糖尿病小鼠空腹血糖作用及空腹胰島素水平的作用，有劑量效應(yīng)關(guān)系，促使血糖進入肝細(xì)胞，使葡萄糖合成肝糖原增加，肝糖輸出減少，葡萄糖氧化分解加快，從而達到調(diào)節(jié)糖代謝，降低空腹血糖。IR是2型糖尿病的發(fā)病基礎(chǔ)，血脂代謝異?？赏ㄟ^干擾胰島素的作用而導(dǎo)致IR，本研究提示普洱熟茶TB在降低血糖的同時，能夠降低血清TG及TC，改善脂質(zhì)代謝，有效緩解血脂代謝紊亂對胰腺造成的負(fù)擔(dān)。TB和模型組相比，胰島素分泌水平降低，血糖仍可保持較低水平，這可能與其改善了IR，增加了胰島素的敏感性相關(guān)。普洱熟茶TB降血糖的具體機制及結(jié)構(gòu)分析還有待進一步研究。參考文獻

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（收稿日期：2015.09.03）