俞坤強(qiáng)　李曉潔　彭洪衛(wèi)　卓沛元　張穎錚

林曉敏1　林如輝1　陶靜1　陳立典1，2，3△

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建福州350122；2.福建康復(fù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建福州350122；3.國家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)康復(fù)研究中心，福建福州350122）

·研究報(bào)告·

電針百會(huì)、神庭穴對MCAO大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及IL-1β、TNF-α表達(dá)的影響*

俞坤強(qiáng)1李曉潔1彭洪衛(wèi)1卓沛元1張穎錚1

林曉敏1林如輝1陶靜1陳立典1，2，3△

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建福州350122；2.福建康復(fù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建福州350122；3.國家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)康復(fù)研究中心，福建福州350122）

目的觀察電針神庭、百會(huì)穴對局灶性腦缺血再灌注大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響，并探討其可能的機(jī)制。方法雄性Sprague-Dawley大鼠45只，采用線栓法制備局灶性腦缺血再灌注大鼠模型，造模成功后隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組和電針組，各15只。電針組大鼠取神庭、百會(huì)穴，電針治療7 d。各組大鼠在造模后第3天開始采用定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)檢測學(xué)習(xí)記憶能力；觀察各組大鼠神經(jīng)行為學(xué)的表現(xiàn)；2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）檢測腦梗死體積；蘇木素-伊紅（HE）染色觀察海馬區(qū)神經(jīng)元破壞和水腫情況；蛋白免疫印跡（Western blotting）法檢測大鼠左側(cè)海馬白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）炎癥因子的表達(dá)。結(jié)果同模型組相比，電針組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力改善（P＜0.05），神經(jīng)行為學(xué)評分降低（P＜0.05），腦梗死體積減小（P＜0.001），海馬CA1區(qū)神經(jīng)元破壞情況減輕，IL-1β、TNF-α炎癥因子表達(dá)降低（P＜0.05）。結(jié)論電針能改善局灶性腦缺血再灌注大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，其機(jī)制可能與減輕腦內(nèi)神經(jīng)元的破壞和水腫、抑制IL-1β、TNF-α炎癥因子表達(dá)相關(guān)。

腦缺血電針學(xué)習(xí)記憶IL-1βTNF-α

認(rèn)知障礙作為腦卒中后常見的一種功能障礙，其發(fā)病率高達(dá)64%［1］，嚴(yán)重影響腦卒中患者的功能恢復(fù)，并給患者家庭帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)［2-3］。針刺治療用于腦部的疾病，已具有悠久的歷史［4］。課題組的前期臨床研究也證實(shí)，針刺百會(huì)、神庭穴，可以有效地改善腦卒中患者的認(rèn)知功能［5］。認(rèn)知障礙是一個(gè)復(fù)雜的病理過程，與海馬區(qū)神經(jīng)元的損傷和凋亡密切相關(guān)［6］，研究認(rèn)為炎癥反應(yīng)在腦缺血再灌注后，海馬區(qū)神經(jīng)元損傷的病理過程中有重要作用［7］。課題組前期的基礎(chǔ)研究證實(shí)，針刺可以通過抑制炎癥反應(yīng)從而減輕腦缺血所帶來的大腦損傷［8］。故本研究選用百會(huì)、神庭穴，觀察電針對局灶性大腦中動(dòng)脈栓塞模型（MCAO）大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力以及與炎癥因子白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）的影響。

1　材料與方法

1.1動(dòng)物Sprague-Dawley大鼠45只，均由福建中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號：SYXK2012-003，體質(zhì)量（260±20）g，每籠5只大鼠，均自由進(jìn)食及飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。實(shí)驗(yàn)過程中均嚴(yán)格按照國際動(dòng)物保護(hù)及使用指南的規(guī)定進(jìn)行。

1.2試劑與儀器水合氯醛（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；蘇木精、伊紅（福建中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心）；Il-1β、TNF-α抗體（Cell Signaling Technology）；β-actin抗體及相應(yīng)的二抗（北京全式金生物技術(shù)有限公司）。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)裝置及動(dòng)態(tài)圖像采集分析系統(tǒng)（中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所）；電針儀（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司）；Bio-Image分析系統(tǒng)（BioRad）；YF-7FB型攤片烤片機(jī)（湖北省孝感市亞光醫(yī)用電子技術(shù)有限公司）。

1.3分組和造模將SD大鼠隨機(jī)分成假手術(shù)組15只、手術(shù)組30只，術(shù)前所有大鼠均禁食12 h，經(jīng)10%的水合氯醛3 mL/kg腹腔注射麻醉后，參造Longa法［9］建立局灶性大腦中動(dòng)脈栓塞模型。大鼠頸部消毒、備皮后，沿著正中線剪開頸部的皮膚，而后鈍性分離組織，并將頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈充分暴露，并于近心端結(jié)扎頸總動(dòng)脈，頸內(nèi)、外動(dòng)脈分叉處結(jié)扎頸外動(dòng)脈，并用動(dòng)脈夾夾閉頸內(nèi)動(dòng)脈遠(yuǎn)心端，而后在離頸總動(dòng)脈結(jié)扎處遠(yuǎn)心端約2～3 mm處剪一小口，將備好的栓線經(jīng)切口插入，至有少許阻力為止，其插入長度為離頸內(nèi)、外動(dòng)脈分叉處約18～22 mm，結(jié)扎頸內(nèi)動(dòng)脈，常規(guī)傷口縫合。待缺血2 h后，退出栓線，造成缺血再灌注模型。實(shí)驗(yàn)過程中，密切觀察大鼠的變化，注意動(dòng)物保溫。假手術(shù)組大鼠只給予分離血管，不結(jié)扎和插入栓線。待動(dòng)物完全蘇醒后，參照Zea-Longa法［10］，進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評分。0分，無神經(jīng)缺失的癥狀；1分，不能完全伸展對側(cè)前爪；2分，向右側(cè)轉(zhuǎn)圈；3分，向?qū)?cè)傾倒；4分，神經(jīng)缺失嚴(yán)重，不能自發(fā)行走。其中，0分、4分的大鼠予以排除。將合格的大鼠隨機(jī)分成模型組15只，電針組15只，并分別放回籠中正常飼養(yǎng)。電針組在造模后第2天予電針刺激。取穴百會(huì)和神庭，參考《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》，采用疏密波，頻率為1/20 Hz，電壓3～5 V，以大鼠安靜耐受、穴位周邊組織輕輕抖動(dòng)為度，每天同一時(shí)間開始治療，每次30 min，每天1次，持續(xù)7 d。假手術(shù)組和模型組大鼠，不予任何治療，只給予同等條件的抓取。

1.4標(biāo)本采集與檢測

1.4.1神經(jīng)行為學(xué)評分模型組和電針組大鼠在電針治療的第1、3、5、7天，參照Zea-Longa法，進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評分。

1.4.2水迷宮實(shí)驗(yàn)水迷宮實(shí)驗(yàn)于干預(yù)的第3天開始，總共歷時(shí)5 d。采用直徑、高度分別為120 cm和50 cm，水深為30 cm的圓形水池，水溫保持在（22±2）℃。水池劃分為4個(gè)均等象限，圓形逃逸平臺(tái)隱匿于任意象限中心位置，直徑、高度為6 cm和28 cm，低于水面2 cm，照明設(shè)備四周對稱。1）定位航行實(shí)驗(yàn)：鼠放入水中自由游泳2 min以熟悉周圍的環(huán)境，而后分別從4個(gè)象限順時(shí)針面向池壁放入水中，測定大鼠在90 s的時(shí)間內(nèi)找到平臺(tái)所需時(shí)間，記為逃避潛伏期，由計(jì)算機(jī)記錄各項(xiàng)參數(shù)，若大鼠在90 s內(nèi)未尋找到平臺(tái)，則牽引大鼠至平臺(tái)，停留10 s，記錄逃避潛伏期為90 s，實(shí)驗(yàn)總共歷時(shí)4 d。2）空間探索實(shí)驗(yàn)：電針干預(yù)的第7天，撤去平臺(tái)，經(jīng)任何一個(gè)象限將大鼠面向池壁放入水中，觀察在90 s的時(shí)間內(nèi)大鼠穿越原平臺(tái)所在位置的次數(shù)。

1.4.3腦梗死體積檢測采用2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法。將快速取得的腦組織置于-20℃冰箱冷凍15～20 min，待腦組織變硬后，從大腦半球額極到枕極，做連續(xù)的冠狀位切片，切成6片，每片厚約為2 mm。而后將腦片置于1%TTC磷酸緩沖液（pH= 7.4），并放置37℃恒溫箱30 min，過程中用毛筆不時(shí)翻動(dòng)腦片，使腦片均勻染色。TTC可與脫氫酶反應(yīng)而呈現(xiàn)紅色，而由于缺血組織內(nèi)脫氫酶活性下降，故不與TTC反應(yīng)，從而呈現(xiàn)蒼白色。利用Image-Pro Plus 6.0分析軟件，計(jì)算梗死面積以及整個(gè)大腦面積，然后得出腦梗死體積百分比=（梗死面積和×2 mm）/（全腦面積和× 2 mm）［11］。

1.4.4海馬CA1區(qū)細(xì)胞形態(tài)觀察麻醉大鼠后，迅速開胸暴露心臟，在心尖剪一小口，灌胃針從開口刺入心臟，調(diào)整方向后插入主動(dòng)脈出口，用止血鉗固定灌胃針，而后在右心耳剪一小口，經(jīng)灌胃針快速注入0.9%氯化鈉溶液300 mL，后灌入4%多聚甲醛400 mL固定?？焖偃∧X后，將大腦置于4%多聚甲醛4℃固定24～48 h，在進(jìn)行梯度脫水、石蠟包埋后，進(jìn)行冠狀切片，片厚約5 μm。腦片在二甲苯中脫蠟、梯度酒精脫水后，行蘇木素和伊紅（HE）染色，光鏡下觀察組織的病理變化。

1.4.5海馬組織炎癥因子表達(dá)的檢測采用蛋白免疫印跡法。取左側(cè)的海馬組織，每100 mg腦組織中加入1 mL的裂解緩沖液和10 μL苯甲基磺酰氟儲(chǔ)存液，機(jī)械研磨后，13000 r/min離心15 min，取上清液，BCA法測定蛋白濃度。待樣品蛋白充分變性后，取樣品蛋白50 μg，10%SDS-PAGE電泳，將蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF膜，封閉液室溫封閉2 h，分別用Il-1β、TNF-α（1∶1000）、β-actin一抗（1∶5000）孵育，4℃搖床過夜，而后辣根過氧化物標(biāo)記的二抗（1∶5000）室溫孵育1 h。將PVDF膜放圖像掃描儀上，使顯色液覆蓋PVDF膜，利用Im age-lab圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行成像和分析。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。兩組計(jì)量資料符合正態(tài)分布，則進(jìn)行兩獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)；不符合正態(tài)分布，則進(jìn)行秩和檢驗(yàn)；多組計(jì)量資料符合正態(tài)分布，則進(jìn)行單因素方差分析，方差齊者用LSD法，方差不齊則用Games-Howell法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1各組神經(jīng)行為學(xué)評分比較見表1。模型組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分在各個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)明顯高于假手術(shù)組。MCAO大鼠在經(jīng)過電針治療后，神經(jīng)功能缺損癥狀得以減輕，評分下降（P＜0.05），說明電針百會(huì)、神庭穴，具有治療作用。

表1　各組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分比較（分，±s）

表1　各組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分比較（分，±s）

與模型組比較，△P＜0.05。

組別n電針組8假手術(shù)組8模型組8第1天第3天第5天第7天2.25±0.71 1.87±0.35 1.37±0.52 1.13±0.35△0000 2.37±0.74 2.00±0.53 1.75±0.46 1.63±0.52

2.2各組水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較見表2、表3。定向航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著時(shí)間推移，各組大鼠平均潛伏期逐漸縮短，而電針組大鼠的行為學(xué)表現(xiàn)明顯好于模型組（P＜0.01）；空間探索實(shí)驗(yàn)顯示，電針組大鼠穿越原平臺(tái)次數(shù)明顯多于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明電針百會(huì)、神庭穴可以改善大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。

表2　各組大鼠逃避潛伏期比較（s，±s）

表2　各組大鼠逃避潛伏期比較（s，±s）

與假手術(shù)組比較，*P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.001。

組別n電針組8假手術(shù)組8模型組8第3天第4天第5天第6天69.84±6.97△52.24±3.72△41.97±9.00△27.28±6.02△32.55±5.1625.47±4.2718.62±4.5714.00±3.93 86.16±3.42*76.69±5.52*68.38±3.20*58.32±7.80*

表3　各組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)比較（次/90 s，±s）

表3　各組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)比較（次/90 s，±s）

與假手術(shù)組比較，*P＜0.001；與模型組比較，△P＜0.05。

組別n電針組8假手術(shù)組8模型組8次數(shù)2.88±0.75△4.38±1.06 1.75±1.04*

2.3各組腦梗死體積比較見表4。與模型組相比較，電針組大鼠腦梗死體積占全腦體積的百分比小于模型組，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。

表4　各組大鼠腦梗死體積百分比比較（%，±s）

表4　各組大鼠腦梗死體積百分比比較（%，±s）

與模型組比較，△P＜0.001。

組別n電針組8模型組5腦梗死體積百分比16.38±2.64△34.88±1.98

2.4各組海馬CA1區(qū)細(xì)胞染色結(jié)果見圖1。結(jié)果顯示，假手術(shù)組大鼠的神經(jīng)元排列整齊，細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，而模型組大鼠神經(jīng)元溶解，細(xì)胞核固縮，少數(shù)神經(jīng)細(xì)胞染色加深，損傷和水腫嚴(yán)重，而電針組大鼠神經(jīng)元損傷較輕，結(jié)構(gòu)較完整。

圖1　各組大鼠海馬CA1區(qū)細(xì)胞形態(tài)（HE染色，400倍）

2.5各組海馬組織炎癥因子表達(dá)見圖2、表5。與假手術(shù)組相比，模型組大鼠IL-1β、TNF-α，表達(dá)增加，而電針組大鼠的IL-1β、TNF-α表達(dá)較模型組少，表明電針抑制了炎癥因子IL-1β、TNF-α的表達(dá)。

圖2　各組大鼠海馬IL-1β、TNF-α表達(dá)

表5　各組大鼠海馬IL-1β、TNF-α表達(dá)比較（%，±s）

表5　各組大鼠海馬IL-1β、TNF-α表達(dá)比較（%，±s）

與假手術(shù)組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05。

組別n電針組5假手術(shù)組5模型組5 IL-1β/β-ActinTNF-α/β-Actin 53.16±12.54△43.84±5.84△30.97±13.8528.63±4.40 71.98±12.59*70.93±7.67*

3　討論

認(rèn)知障礙在中醫(yī)學(xué)古代文獻(xiàn)中，多散見于“健忘”“善忘”“呆病”“遺忘”等證中［12］，其病機(jī)與神明失養(yǎng)、失用相關(guān)，而腦為神明之主，對神明有重要的調(diào)控作用。督脈為陽脈之海，其行入絡(luò)腦，而百會(huì)、神庭兩穴皆為督脈的要穴，且皆位于腦，具有開竅、醒神、定志之功，故可用于治療認(rèn)知障礙［13-14］。郭新榮等［15］在研究針灸治療顱腦疾病腧穴選取規(guī)律中發(fā)現(xiàn)，在涉及的經(jīng)脈中，使用頻率最高的為督脈；所涉及的腧穴中，使用頻率最高的為百會(huì)（68%）。故本研究選取百會(huì)、神庭為主穴觀察電針對MCAO大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能的影響，且取得較為理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

學(xué)習(xí)記憶是大腦認(rèn)知功能的一個(gè)重要組成部分，與海馬密切相關(guān)，有研究認(rèn)為在細(xì)胞水平上，海馬與其他區(qū)域的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)神經(jīng)元間的突觸強(qiáng)度變化是最可能的學(xué)習(xí)記憶機(jī)制［16］。海馬作為學(xué)習(xí)記憶的關(guān)鍵部位，也是腦缺血的敏感區(qū)域［17］，當(dāng)組織缺血時(shí)，則會(huì)引起海馬本身及其周圍神經(jīng)細(xì)胞的死亡或者凋亡，導(dǎo)致學(xué)習(xí)記憶障礙［18］。研究表明，IL-1β、TNF-α等炎癥因子的釋放，會(huì)引起炎癥反應(yīng)，最終導(dǎo)致海馬神經(jīng)元的損傷［19］。此外，IL-1β、TNF-α被認(rèn)為是一種“前炎性細(xì)胞因子”［7，20］，當(dāng)其濃度升高時(shí)，可以使p38MAPK信號活性增強(qiáng)，而p38MAPK對腦損傷后的神經(jīng)功能起負(fù)性調(diào)節(jié)作用［21］，最終導(dǎo)致海馬區(qū)神經(jīng)元的破壞［22］。另有研究表明，認(rèn)知功能障礙的發(fā)生還與海馬區(qū)神經(jīng)元與膠質(zhì)細(xì)胞之間的聯(lián)系發(fā)生障礙相關(guān)［23-24］，而由膠質(zhì)細(xì)胞所釋放的炎癥因子IL-1β、TNF-α在這其中也發(fā)揮著重要的作用［25-26］，故炎癥因子IL-1β、TNF-α在腦缺血導(dǎo)致的學(xué)習(xí)記憶障礙的過程中有重要的作用。

本實(shí)驗(yàn)中，電針百會(huì)、神庭穴可以改善了MCAO大鼠的神經(jīng)缺損癥狀和水迷宮實(shí)驗(yàn)的行為學(xué)表現(xiàn)，說明電針可以改善MCAO大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，電針組大鼠腦梗死體積小于模型組，神經(jīng)破壞和水腫情況好于模型組，且IL-1β、TNF-α等相關(guān)的炎癥因子的表達(dá)也低于模型組，說明電針改善了腦缺血再灌注后的病理損傷。綜上所述，電針神庭、百會(huì)穴可以治療MACO大鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙，且這種治療作用可能與下調(diào)IL-1β、TNF-α相關(guān)炎癥因子表達(dá)，減輕神經(jīng)元損傷相關(guān)。然而實(shí)驗(yàn)中只采用了水迷宮實(shí)驗(yàn)一種行為學(xué)評價(jià)的方法，存在一定的局限性，在今后的研究中應(yīng)予以改進(jìn)。

［1］Donovan NJ，Kendall DL，Heaton SC，et al.Conceptualizing functional cognition in stroke［J］.Neurorehabilitation and Neural Repair，2008，22（2）：122-135.

［2］Park JH，Kim BJ，Bae H，et al.Impact of post-stroke cognitive impairment with no dementia on health-related quality of life［J］.Journal of stroke，2013，15（1）：49-56.

［3］Pulman J，Buckley E.Assessing the Efficacy of different upper limb hemiparesis interventions on improving health-related quality of life in stroke patients：A systematic review［J］. Topics in Stroke Rehabilitation，2013，20（2）：171-188.

［4］Wang W，Xie C，Lu L，et al.A systematic review and metaanalysis of Baihui（GV20）-based scalp acupuncture in experimental ischemic stroke［J］.Scientific Reports，2014，4（3981）.

［5］Yang S，Ye H，Huang J，et al.The synergistic effect of acupuncture and computer-based cognitive training on poststroke cognitive dysfunction：a study protocol for a randomized controlled trial of 2×2 factorial design［J］.BMC Complementary and Alternative Medicine，2014，14（1）：290.

［6］Fan M，Song C，Wang T，et al.Protective effects of lithium chloride treatment on repeated cerebral ischemia-reperfusion injury in mice［J］.Neurological Sciences，2015，36（2）：315-321.

［7］He W，Chen W，Zhou Y，et al.Xanthotoxol exerts neuroprotective effects via suppression of the inflammatory response in a rat model of focal cerebral ischemia［J］.Cellular and Molecular Neurobiology，2013，33（5）：715-722.

［8］Lan L，Tao J，Chen A，et al.Electroacupuncture exerts antiinflammatory effects in cerebral ischemia-reperfusion injured rats via suppression of the TLR4/NF-kappa B pathway［J］. International Journal of Molecular Medicine，2013，31（1）：75-80.

［9］Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S，et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats［J］. Stroke a journal of cerebral circulation，1989，20（1）：84-91.

［10］Chen A，Lin Z，Lan L，et al.Electroacupuncture at the Quchi and Zusanli acupoints exerts neuroprotective role in cerebral ischemia-reperfusion injured rats via activation of the PI3K/ Akt pathway［J］.International Journal of Molecular Medicine，2012，30（4）：791-796.

［11］江一靜，楊珊莉，陶靜，等.巨刺法對大鼠腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制［J］.中國康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志，2014，29（7）：605-609.

［12］周翠俠，胡永善，崔曉，等.綜合干預(yù)對腦卒中后輕度認(rèn)知障礙及綜合功能的影響［J］.針灸臨床雜志，2012，29（8）：1-4.

［13］Chen L，Wang F，Zuo F，et al.Clinical research on comprehensive treatment of senile vascular dementia［J］.Journal of Traditional Chinese Medicine，2011，31（3）：178-181.

［14］Feng X，Yang S，Liu J，et al.Electroacupuncture ameliorates cognitive impairment through inhibition of NF-kappa B-mediated neuronal cell apoptosis in cerebral ischemia-reperfusion injured rats［J］.Molecular Medicine Reports，2013，7（5）：1516-1522.

［15］郭新榮，王瑞輝，李娜，等.針灸治療顱腦損傷用穴規(guī)律的現(xiàn)代文獻(xiàn)研究［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2013，24（6）：1433-1434.

［16］Gazzaniga.認(rèn)知神經(jīng)科學(xué)：關(guān)于心智的生物學(xué)［M］.北京：中國輕工業(yè)出版社，2011：310-312.［17］Dolek N，Saylisoy S，Ozbabalik D，et al.Comparison of hippocampal volume measured using magnetic resonance imaging in Alzheimer's disease，vascular dementia，mild cognitive impairment and pseudodementia［J］.Journal of International Medical Research，2012，40（2）：717-725.

［18］Cao X，Ma H，Wang J，et al.Postoperative cognitive deficits and neuroinflammation in the hippocampus triggered by surgical trauma are exacerbated in aged rats［J］.Progress in Neuro-psychopharmacology&BiologicalPsychiatry，2010，34（8）：1426-1432.

［19］Zhang ZY，Wu YQ，Zhang WG，et al.The expression of E-cadherin-catenin complex in adenoid cystic carcinoma of salivary glands［J］.The Chinese journal of dental research：the official journal of the Scientific Section of the Chinese Stomatological Association（CSA），2000，3（3）：36-39.

［20］Hazan RB，Phillips GR，Qiao RF，et al.Exogenous expression of N-cadherin in breast cancer cells induces cell migration，invasion，and metastasis［J］.The Journal of cell biology，2000，148（4）：779-790.

［21］Cui L，Zhang X，Yang R，et al.Neuroprotection of early and short-time applying atorvastatin in the acute phase of cerebral ischemia：Down-regulated 12/15-LOX，p38MAPK and cPLA2 expression，ameliorated BBB permeability［J］.Brain Research，2010，1325：164-173.

［22］Sang N，Zhang J，Marcheselli V，et al.Postsynaptically synthesized prostaglandin E2（PGE2）modulates hippocampal synaptic transmission via a presynaptic PGE2 EP2 receptor［J］.Journal of Neuroscience，2005，25（43）：9858-9870.

［23］Wan Y，Xu J，Ma D，et al.Postoperative impairment of cognitive function in rats-A possible role for cytokine-mediated inflammation in the hippocampus［J］.Anesthesiology，2007，106（3）：436-443.

［24］Kauppinen TM，Higashi Y，Suh SW，et al.Zinc triggers microglial activation［J］.Journal of Neuroscience，2008，28（22）：5827-5835.

［25］Kim JM，Kim S，Kim DH，et al.Neuroprotective effect of forsythiaside against transient cerebral global ischemia in gerbil［J］.European Journal of Pharmacology，2011，660（2-3）：326-333.

［26］Jin W，F(xiàn)eng S，F(xiàn)eng Z，et al.Minocycline improves postoperative cognitive impairment in aged mice by inhibiting astrocytic activation［J］.Neuroreport，2014，25（1）：1-6.

Effect of Electro-acupuncture on Learning and Memory Ability and IL-1β，TNF-α Expression in Rats with Cerebral Ischemic/Reperfusion

YU Kunqiang，LI Xiaojie，PENG Hongwei，et al.Kangfu Medicine School of Fujian University of Traditional Chinese Medicine，F(xiàn)ujian，F(xiàn)uzhou 350122，China

Objective：To observe the efficacy of treatment with electro-acupuncture at Baihui（DU20）and Shenting（DU24）on learning and memory ability in rats after cerebral ischemia/reperfusion（I/R）injury and explore its possible mechanism.Methods：45 male Sprague-Dawley rats were randomly divided into the sham group（n=15），the ischemia group（n=15）and the electro-acupuncture group（n=15）after surgery.The latter 2 groups were modeled as focal cerebral ischemia/reperfusion（I/R）injury，and the electro-acupuncture group received electro-acupuncture at Baihui（DU20）and Shenting（DU24）for 7 days.The learning and memory ability were tested by Morris water maze；the cerebral infarction volume was measured by TTC staining and image analysis；neurological deficit score was evaluated；the damage and edema of neuron were detected with hematoxylineosin staining，and the protein expression of IL-1β and TNF-α were detected by Western blotting.Results：Compared with the ischemia group，the learning and memory ability improved（P＜0.05）；the neurological deficit score decreased（P＜0.05）；the cerebral infarction volume reduced（P＜0.001）；the neuronal damage reduced，and the expression of IL-1β and TNF-α in hippocampus decreased（P＜0.05）in the electro-acupuncture group.Conclusion：Electro-acupuncture can improve learning and memory ability from cerebral ischemia/reperfusion（I/R）injury in rats，which may be related with reducing the damage and edema of neuron and inhibiting the expression of IL-1β and TNF-α in hippocampus.

Brain ischemia；Electro-acupuncture；Learning and memory；IL-1β；TNF-α

R285.5

A

1004-745X（2015）11-1891-05

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.11.004

2015-06-21）

·研究報(bào)告·

科技部國際科技合作項(xiàng)目（2011DFG33240）；福建省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2015J01335）；福建省康復(fù)技術(shù)協(xié)同創(chuàng)新中心資助項(xiàng)目（X2012004－協(xié)同）

（電子郵箱：cld@fjtcm.edu.cn）