楊 穎 杜碧瑩

（廣州市藥品檢驗(yàn)所，廣東 廣州 510160）

HPLC法測(cè)定磺胺甲惡唑鈉有關(guān)物質(zhì)

楊 穎 杜碧瑩

（廣州市藥品檢驗(yàn)所，廣東 廣州 510160）

目的 建立高效液相色譜法，測(cè)定磺胺甲惡唑鈉有關(guān)物質(zhì)。方法 色譜柱為Zorbax C8（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-磷酸二氫鉀溶液（取磷酸二氫鉀13.6 g，加水至1000 mL，用2%氫氧化鉀溶液調(diào)pH值至5.3）（35∶65）；檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm。結(jié)果 磺胺甲惡唑鈉與各雜質(zhì)在該色譜條件下能有效分離，有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)限0.97 ng。其中雜質(zhì)F在0.4～5 μg/mL內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9999 （n =5），定量限2.0 ng。結(jié)論 本方法準(zhǔn)確，靈敏度高，可用于測(cè)定磺胺甲惡唑鈉有關(guān)物質(zhì)。

高效液相色譜法；磺胺甲惡唑鈉；有關(guān)物質(zhì)

磺胺甲惡唑鈉為廣譜抗菌藥，用于治療畜禽、水產(chǎn)類，尿路感染、呼吸道感染、皮膚化膿性感染。原企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中磺胺甲惡唑鈉的有關(guān)物質(zhì)檢查采用TLC法，但TLC法存在著諸如薄層板背景干擾大，靈明度不高等缺點(diǎn)，不能有效檢出全部有關(guān)物質(zhì)，不能真實(shí)反映該企業(yè)樣品的質(zhì)量狀況。曾有文獻(xiàn)［1］報(bào)道用HPLC法測(cè)定復(fù)方磺胺嘧啶中磺胺甲惡唑鈉的含量。但目前暫未報(bào)道磺胺甲惡唑鈉有關(guān)物質(zhì)控制方法。本文建立了

HPLC 法測(cè)定磺胺甲惡唑鈉的有關(guān)物質(zhì)，方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏度高。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：日本Shimadzu 高效液相色譜儀LC-10Atvp（二極管陣列檢測(cè)器）。

1.2 試藥。雜質(zhì)A：N-（5-甲基-3-異惡唑基）-4-乙酰氨基苯磺酰胺；雜質(zhì)F：N-（3-甲基-5-異惡唑基）-4-氨基苯磺酰胺。均為歐洲藥典委員會(huì)頒發(fā)的對(duì)照品。樣品為國(guó)外某進(jìn)口藥品生產(chǎn)廠產(chǎn)品，批號(hào)為3010、3009、3008。甲醇為色譜純。水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性：色譜柱為ZORBAX C8（250 mm×4.6 mm， 5 μm），流動(dòng)相為甲醇-磷酸二氫鉀溶液（取磷酸二氫鉀13.6 g，加水至1000 mL，用2%氫氧化鉀溶液調(diào)pH值至5.3）（35∶65）；流速0.7 mL/min，柱溫為30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm。取本品和雜質(zhì)A對(duì)照品各1 mg，置10 mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，量取20 μL，注入液相色譜儀，磺胺甲惡唑鈉峰的保留時(shí)間約10 min，磺胺甲惡唑鈉峰與雜質(zhì)A峰的分離度應(yīng)＞3.5。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2 測(cè)定方法：取本品，用流動(dòng)相溶解（45 ℃超聲振搖10 min）并稀釋制成每1 mL中含1 mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，用流動(dòng)相稀釋制成每1 mL中含1 μg的溶液，作為對(duì)照溶液（1）；另取雜質(zhì)F對(duì)照品適量，精密稱定，用流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1 mL中含1 μg的溶液，作為對(duì)照溶液（2）。取供試品溶液、對(duì)照溶液（1）、（2）各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。色譜圖見(jiàn)圖2。

圖1 系統(tǒng)適用性HPLC圖

圖2 供試液HPLC圖

2.3 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果，見(jiàn)表1。

表1 樣品有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果

3 方法學(xué)驗(yàn)證

3.1 線性試驗(yàn)：取本品（批號(hào)：3008）、雜質(zhì)F對(duì)照品適量，用流動(dòng)相分別制成每1 mL中含0.4～5 μg濃度的溶液，依法測(cè)定，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程如下：磺胺甲惡唑鈉：Y=86549.5X-1318.11 r=0.9999 （n=5）；雜質(zhì)F：Y=74068.7X+ 6396.62 r=0.9999 （n=5）。

3.2 方法的耐用性試驗(yàn)：取本品細(xì)粉適量，分別通過(guò)1 mol/L 鹽酸溶液、1 mol/L 氫氧化鈉溶液、30%過(guò)氧化氫溶液放置48 h、254 nm光照4 h和加熱的方式進(jìn)行破壞，試驗(yàn)表明，本品遇光易變質(zhì)，尤其氧化易分解產(chǎn)生降解產(chǎn)物，而設(shè)定的色譜條件對(duì)雜質(zhì)有良好的分離。

3.3 進(jìn)樣的精密度試驗(yàn)：取對(duì)照溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，雜質(zhì)F峰面積變化的RSD（%）為1.4，表明精密度良好。

3.4 檢測(cè)限：按信噪比（S/N）為3?1計(jì)算，有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)限0.97 ng，雜質(zhì)F定量限為2.0 ng。

3.5 供試品溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn)：在供試品溶液（批號(hào)：3008）制備后第0、1、2、4、20、66 h分別測(cè)定，供試品溶液在4 h內(nèi)穩(wěn)定，隨著放置時(shí)間延長(zhǎng)至66 h，雜質(zhì)D（對(duì)氨基苯磺酸）與雜質(zhì)F量略有增加。

4 討 論

4.1 原注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)方法為薄層色譜法，影響雜質(zhì)斑點(diǎn)判定的主要原因是展開(kāi)劑中的硝基甲烷，硝基甲烷在展開(kāi)過(guò)程中漸變黃色，展開(kāi)后，黃色附著于薄層板上，直接影響雜質(zhì)斑點(diǎn)的判定。

從分離效果、靈敏度、專屬性比較，本文所建立的方法靈敏，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確且重復(fù)性好，綜合破壞性試驗(yàn)結(jié)果，本法能可更好地分離和檢測(cè)磺胺甲惡唑鈉的有關(guān)物質(zhì)及貯藏過(guò)程的降解產(chǎn)物，故可作為檢查有關(guān)物質(zhì)的色譜條件。

4.2 隨著供試液放置時(shí)間延長(zhǎng)，雜質(zhì)D與雜質(zhì)F量略有增加，因此本品的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)應(yīng)在24 h內(nèi)進(jìn)行。

4.3 限度的確定：參照英國(guó)藥典［2］“磺胺甲惡唑”有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)下的檢測(cè)方法及限度要求，結(jié)合“磺胺甲惡唑鈉”生產(chǎn)工藝及企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)綜合評(píng)估，我們確定磺胺甲惡唑鈉的雜質(zhì)包括已知雜質(zhì)（雜質(zhì)A、B、C、D、E、F）和未知雜質(zhì)，雜質(zhì)F用對(duì)照品比較法計(jì)算，不得過(guò)0.1%；其他雜質(zhì)用主成分自身對(duì)照法計(jì)算，不得過(guò)0.1%；雜質(zhì)總量不得過(guò)0.3%。結(jié)果表明，本方法更準(zhǔn)確的反映產(chǎn)品的雜質(zhì)實(shí)際情況，能更好的控制產(chǎn)品的質(zhì)量。

［1］ 武晉孝， 李淑琴， 柴桂珍，等.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方磺胺嘧啶各組分含量［J］.中國(guó)獸藥雜志，2002，4（4）:30-31.

［2］ British Pharmacopoeia Commission.British Pharmacopoeia［S］. The Stationery Office，2013:2127-2129.

Determination of Related Substances of Sodium Sulfamethoxazole by HPLC

YANG Ying， DU Bi-ying
（Guangzhou Institute for Drug Control， Guangzhou 510160， China）

［Abstrat］Objective To establish a method of HPLC to determinate related substances of Sodium Sulfamethoxazole. Methods The analytical column was Zorbax C8（250 mm×4.6 mm，5 μm）； The mobile phase was methanol-potassium dihydrogen phosphate solution（consisting 1.36% potassium dihydrogen phosphate， adjust the pH value to 5.3 by 2% potassium hydroxide）； the detective wavelength was 210 nm. Results Good resolution of Sodium Sulfamethoxazole and releated substances was obtained， and the detection limit was 0.97 ng. There was a good linear relationship for impurity F in the concentration range of 0.4～5 μg/mL ， r=0.9999 （n=5）and the limit of quantification was 2.0 ng. Conclusions The method is accurate， sensitive and suitable for determinaton of related substances of Sodium Sulfamethoxazole.

HPLC； Sodium Sulfamethoxazole； Related substances

R927

B

1671-8194（2015）13-0014-02