唐干益，李安，李敏，廖樂樂，潘小冰，胡豐，張一凡，林娟，覃仁安

1.深圳流花醫(yī)院，廣東 深圳 518002

2.中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院，廣東 珠海 519000

3.廣州白云山和記黃埔中藥有限公司，廣東 廣州 510515

消炎利膽片防治膽結(jié)石實(shí)驗(yàn)研究

唐干益1，李安2，李敏1，廖樂樂1，潘小冰1，胡豐1，張一凡3，林娟3，覃仁安3

1.深圳流花醫(yī)院，廣東 深圳 518002

2.中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院，廣東 珠海 519000

3.廣州白云山和記黃埔中藥有限公司，廣東 廣州 510515

目的：研究消炎利膽片對膽結(jié)石的防治作用并探討其作用機(jī)制。方法：采用皮下注射鹽酸林可霉素法建立豚鼠膽色素結(jié)石模型，記錄成石率，測定總膽紅素、結(jié)合膽紅素、鈣離子、β-葡萄糖醛酸苷酶活性及肝功能相關(guān)指標(biāo)等，研究消炎利膽片對膽結(jié)石形成的影響。結(jié)果：與模型組相比，治療組豚鼠膽結(jié)石成石率顯著降低，膽汁中游離膽紅素、鈣離子、β-葡萄糖醛酸苷酶活性顯著降低（P<0.05），高劑量組肝功能指標(biāo)谷草轉(zhuǎn)氨酶與谷丙轉(zhuǎn)氨酶比值顯著升高（P<0.01）。結(jié)論：消炎利膽片對膽結(jié)石的形成有顯著的抑制作用，并能改善肝損傷。

膽結(jié)石；消炎利膽片；肝功能；豚鼠

隨著人們生活方式和飲食結(jié)構(gòu)發(fā)生巨大變化，膽結(jié)石的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢。隨著對膽囊功能、膽囊切除后病理生理變化的深入研究及微創(chuàng)技術(shù)的發(fā)展，“保膽取石”的理念逐漸被外科醫(yī)生和患者接受，并取得了良好的效果。然而，保膽術(shù)后膽囊結(jié)石的復(fù)發(fā)率較高，成為新的研究熱點(diǎn)。分析腹腔鏡聯(lián)合膽道鏡保膽取石術(shù)患者的臨床資料發(fā)現(xiàn)，術(shù)后口服消炎利膽片的患者，膽結(jié)石復(fù)發(fā)率顯著降低。消炎利膽片由穿心蓮、溪黃草、苦木三味藥組成，具有清熱，祛濕，利膽的功效，臨床上主要用于肝膽濕熱引起的口苦、脅痛；急性膽囊炎、膽管炎。本研究旨在探討消炎利膽片對膽石癥的防治作用及其作用機(jī)制，以為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)藥物消炎利膽片［0.26 g/片，相當(dāng)于飲片2.6 g，由廣州白云山和記黃埔中藥有限公司生產(chǎn)，批號：A4A007，臨床用量4.68 g/（人·d）］。實(shí)驗(yàn)前用蒸餾水配成所需濃度的水溶液。

1.2動物普通級豚鼠，雌雄各半，250～350 g，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號：SCXK（粵）2011-0015，No.44002100002976。

1.3儀器UV2550紫外分光光度計(jì)（島津）、水浴鍋、電子天平、318C+型多功能酶標(biāo)儀（上海沛歐分析儀器有限公司）、3-30K型低溫離心機(jī)（Sigma）。

1.4方法

1.4.1模型建立選用健康豚鼠90只，雌雄各半，隨機(jī)分為6組：空白組10只、模型組16只、陽性藥物組（熊去氧膽酸）16只、消炎利膽片低劑量組（0.5倍臨床劑量）16只、消炎利膽片中劑量組（相當(dāng)于臨床劑量）16只、消炎利膽片高劑量組（2倍臨床劑量）16只。正常喂養(yǎng)7天，第8天開始，按照50 mg/（kg·d）于大腿根部皮下注射鹽酸林可霉素，連續(xù)7天。藥物組在造模同時予藥物灌胃。模型組及正常組以藥物組等體積生理鹽水灌胃，連續(xù)5周后處死。期間每周稱重1次，以調(diào)整給藥劑量。

1.4.2指標(biāo)檢測稱量體重，記錄進(jìn)食量，觀察精神狀態(tài)、營養(yǎng)狀況等。麻醉后，腹主動脈取血，離心后回收血漿備用。觀察膽囊及肝臟形態(tài)，摘取膽囊，觀察結(jié)石情況、計(jì)算成石率。收集膽汁，離心后取上清液備用。采用試劑盒測定膽汁總膽紅素（TBil）、結(jié)合膽紅素（DBil）含量，并計(jì)算游離膽紅素（IBil），測定鈣離子含量，β-葡萄糖醛酸苷酶（β-glucuronidase，β-G）活性，血漿谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）與谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）活性。

2　結(jié)果

2.1實(shí)驗(yàn)動物生長形態(tài)實(shí)驗(yàn)過程中，模型組較空白組進(jìn)食量、體重均明顯下降，被毛雜亂無光澤。消炎利膽片各劑量組及陽性藥物組以上狀況均有所改善，但與正常組比較，仍有一定差異。

2.2膽囊及肝臟形態(tài)正常組膽囊中膽汁清亮、透明，呈淡黃色，肝臟呈紅褐色，無斑點(diǎn)病變。模型組膽汁顏色較深，膽囊底部有明顯的塊狀結(jié)石或泥沙樣沉淀，部分膽囊壁有充血現(xiàn)象。部分豚鼠肝臟邊緣呈透明狀，表面有白色或黃褐色斑點(diǎn)。消炎利膽片各劑量組成石情況有不同程度的減少，肝臟損傷情況亦有改善，且有一定的劑量相關(guān)性。

2.3各組膽囊成石情況見表1。模型組成石率與空白組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），豚鼠膽結(jié)石模型建立成功。實(shí)驗(yàn)動物口服陽性對照藥熊去氧膽酸后的成石情況較模型組有顯著性差異（P＜0.05）。消炎利膽片低劑量、中劑量組成石率與模型組相比較，有一定程度的降低，且與劑量相關(guān)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。消炎利膽片高劑量組與模型組相比，成石率顯著降低（P＜0.01），且與陽性對照藥相比，抑制成石效果更佳。

表1　各組膽囊成石情況　　例

2.4膽汁中各生化指標(biāo)分析見表2。與空白組比較，模型組膽汁中IBil、Ca2+含量顯著升高，DBil顯著降低，β-G的活性顯著增強(qiáng)（P＜0.05，P＜0.01）。消炎利膽片組與模型組相比可見：低劑量組膽汁TBil、Ca2+及β-G活性均有一定程度的降低，DBil增加，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。IBil降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。中、高劑量組膽汁IBil含量及β-G活性均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。DBil較模型組均顯著升高（P＜0.01）。高劑量組TBil、Ca2+含量顯著降低（P＜0.05，P＜0.01）。

表2　膽汁中各生化指標(biāo)分析（±s）

表2　膽汁中各生化指標(biāo)分析（±s）

與模型組比較，①P＜0.05，②P＜0.01

組別n空白組模型組低劑量組中劑量組高劑量組10 16 16 16 16 TBil（μmol/L）17.06±4.40 19.20±1.71 18.74±2.58 18.15±1.47 17.42±1.60②DBil（μmol/L）14.38±4.75①10.47±2.51 11.79±3.13 13.36±2.35②14.13±2.32②IBil（μmol/L）2.68±0.93②8.72±1.84 6.95±1.52②4.79±1.22②3.29±1.00②Ca2+（mmol/L）1.52±0.33①1.86±0.38 1.76±0.24 1.62±0.29 1.56±0.30①β-G（×10-3U /mgprot）1.94±0.49②2.79±0.58 2.47±0.71 2.11±0.64①2.01±0.59②

2.5肝功能指標(biāo)比較見表3。模型組與空白組相比，ALT、AST活性均顯著升高，AST/ALT減?。≒＜0.01），且小于1，提示該膽結(jié)石模型對肝臟有一定的損傷。陽性藥物對鹽酸林可霉素造成的肝臟損傷無改善作用，且有微弱的加重。消炎利膽片低劑量組即顯示出對鹽酸林可霉素造成的肝損傷有一定程度的改善作用，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。中、高劑量組顯著的降低ALT、AST活性，且AST/ALT升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。

表3　肝功能指標(biāo)比較（±s）

表3　肝功能指標(biāo)比較（±s）

與模型組比較，①P＜0.05，②P＜0.01

組別空白組模型組陽性藥物組低劑量組中劑量組高劑量組n 10 16 16 16 16 16 A LT（U/gprot）20.95±4.58②90.50±13.38 100.21±15.89 84.94±14.20 75.74±12.70②59.99±9.35②A ST（U/gprot）38.32±5.14②53.14±10.97 53.16±11.87 51.43±9.43 48.03±10.60 43.61±7.81②A ST/A LT 1.89±0.34②0.59±0.08 0.53±0.05①0.61±0.05 0.63±0.08 0.73±0.08②

3　討論

近年來，膽結(jié)石的發(fā)病率逐年上升，資料表明，在西方國家，膽結(jié)石的發(fā)病率為5.9%～21.9%。而在亞洲，大約有3.1%～10.7%的人患有膽石癥［1］。雷正明等［2］術(shù)后隨訪1183例手術(shù)治療膽結(jié)石患者發(fā)現(xiàn)，服用消炎利膽片的患者再手術(shù)率為5.08%；常規(guī)治療組再手術(shù)率為16.8%。劉宏斌等［3］對比97例行腹腔鏡聯(lián)合膽道鏡保膽取石術(shù)患者的臨床資料發(fā)現(xiàn)，術(shù)后口服消炎利膽片患者中，膽結(jié)石復(fù)發(fā)率為3.45%，對照組復(fù)發(fā)率為5.13%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。臨床數(shù)據(jù)證明消炎利膽片對膽結(jié)石的形成有一定的防治作用。但是其作用機(jī)制尚未有研究報道。

膽色素結(jié)石形成有三個必要條件和一個中心環(huán)節(jié)：必要條件即膽汁中IBil增多、膽汁中Ca2+增加及助溶因素減弱，中心環(huán)節(jié)即膽紅素鈣的沉淀與溶解平衡失調(diào)［4］。其中膽汁中IBil的增高，是膽色素結(jié)石形成最重要的因素。Maki學(xué)說認(rèn)為，膽囊受到細(xì)菌感染后不僅能產(chǎn)生多糖復(fù)合物，促進(jìn)膽色素沉淀和聚集，而且可以產(chǎn)生β-G促進(jìn)膽石形成［5］。β-G將能溶于水的膽紅素葡萄糖醛酸苷水解為IBil和葡萄糖醛酸。β-G在膽囊組織內(nèi)和膽汁中活性升高后，可以使DBil分解生成IBil的反應(yīng)加劇。在生理情況下，即使膽汁中有IBil、Ca2+存在，也不易形成結(jié)石，其原因之一在于IBil含量很少，另一方面在于膽汁中的膽鹽能使其離子化，避免與Ca2+接觸。當(dāng)膽汁中IBil含量增加時，便會產(chǎn)生膽紅素鈣沉淀，成為膽色素結(jié)石的基礎(chǔ)。Soloway RD［6］進(jìn)一步量化了IBil在膽色素結(jié)石形成中的地位，指出膽汁中IBil占TBil的比例大于15%時，膽汁有成石趨勢。

消炎利膽片由穿心蓮、溪黃草、苦木三味藥組成，方中穿心蓮清熱解毒，燥濕消腫為君藥；溪黃草清熱燥濕為臣藥；苦木燥濕利膽為佐使藥。諸藥相合，共奏清熱解毒、燥濕利膽之功。前期研究表明：消炎利膽片總提取物的利膽作用明顯，可以明顯加快膽汁的排出，且對膽囊平滑肌收縮促進(jìn)作用顯著［7］。因此，對于由于膽囊排空異常，引起膽汁淤積而出現(xiàn)的膽結(jié)石癥，消炎利膽片有一定的治療或輔助治療作用。另外，消炎利膽片對2，4-二硝基氟苯和巴豆油誘發(fā)的耳腫脹及血管通透性增加具有明顯的抑制作用，提示消炎利膽片對急性炎癥有顯著的抑制效果［8］。

皮下注射鹽酸林可霉素建立膽結(jié)石模型的原理主要是造成肝損傷進(jìn)而引起膽囊炎癥。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示消炎利膽片對血漿ALT、AST含量有明顯的抑制作用，說明其對肝損傷具有改善作用。但仍與正常值有一定的差距，且ALT/AST小于1，提示肝臟仍有一定程度的損傷，可能與藥物經(jīng)肝臟代謝有關(guān)。另一方面，消炎利膽片中、高劑量能夠顯著降低膽汁中β-G活性、IBil及Ca2+含量，抑制膽結(jié)石的形成。由于消炎利膽片對急性炎癥具有顯著的抑制效果，可能通過抑制膽囊的炎癥反應(yīng)，減少β-G的產(chǎn)生，進(jìn)而抑制DBil分解生成IBil的反應(yīng)。同時，消炎利膽片顯著降低膽汁中Ca2+的含量，從而抑制膽紅素鈣沉淀的產(chǎn)生。

綜上所述，消炎利膽片對皮下注射鹽酸林可霉素引起的膽結(jié)石有顯著的抑制作用，可能與減少肝損傷，抑制膽囊炎癥，降低膽汁中β-G活性及IBil、Ca2+的含量有關(guān)，消炎利膽片能明顯降低保膽取石術(shù)后結(jié)石的復(fù)發(fā)率，且價格便宜，具有明顯的臨床使用優(yōu)勢和特色，值得進(jìn)一步研究和推廣。

［1］萬曉冬，王成龍，徐俊.外科手術(shù)聯(lián)合消炎利膽片治療膽結(jié)石患者85例臨床觀察［J］.海峽藥學(xué)，2012，24（7）：169-170.

［2］雷正明，黎靖，李秋，等.消炎利膽治療對肝膽結(jié)石病術(shù)后復(fù)發(fā)的防治效果［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2006，16（3）：423-425.

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（責(zé)任編輯：駱歡歡，李海霞）

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R575.62

A

0256-7415（2015）09-0211-03

10.13457/j.cnki.jncm.2015.09.098

2015-06-30

國家“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)（2009ZX09308-003）

唐干益（1972-），男，副主任藥師，主要從事藥劑學(xué)研究。

覃仁安，E-mail：qinrenan@813zy.com。