杜建超　福建省晉江市動物疫病預防控制中心　福建晉江　362200

鉬對F1代雌性小鼠雌激素的影響

杜建超福建省晉江市動物疫病預防控制中心福建晉江362200

本試驗主要探討金屬元素鉬（Mo）對F1代雌性小鼠雌激素的影響。試驗選擇健康昆明系ICR F1雌性小白鼠20只，體重30～40 g，適應5 d后，隨機分為4組?；A日糧相同，試驗組分別在其飲水中加入100、200和400mg/L鉬酸鈉，對照組給予正常飲水。喂養(yǎng)7周后，測量其體重并記錄。采用眼球摘除采血法采集血液制備血清，測定小鼠的肝臟、腎臟、脾臟，計算肝臟、腎臟、脾臟的臟器指數(shù)。采用發(fā)光免疫技術測定小鼠血清雌二醇水平。

鉬小鼠雌激素

1　前　言

1.1鉬鉬（Mo）是動物、植物、微生物及人類必需的微量元素，是黃嘌呤氧化酶、醛氧化酶、亞硫酸氧化酶的組成成分，鉬主要是通過影響這些酶的合成和活性來實現(xiàn)其生物學功能，但過量的鉬可導致動物中毒。鉬是一種在食物和飲水，并在多種維生素和維生素補充劑中普遍存在的微量元素。

1.2關于鉬中毒的研究鉬中毒時有報道，但不同種類的動物對鉬的耐受性存在明顯的差異。劉鳳軍等研究發(fā)現(xiàn)小劑量的鉬鹽并不能引起生殖性能的改變［1］，由于鉬在體內(nèi)沒有富集作用［2］，短時間內(nèi)攝入過量的鉬可以造成對生殖性能的一定程度的損壞，但是一定時間后，隨著鉬鹽的代謝，小劑量鉬造成的毒性損傷是可逆的，可以恢復。

隨著工業(yè)化的快速發(fā)展，在我們?nèi)粘Ｉ钽f可能隨時存在于我們的日常生活中。例如平常的飲食、飲水以及接觸的金屬合金等。微量元素鉬雖然是人體所必須的元素，但是少量長時間的攝入或者說接觸是否同樣會引起鉬中毒呢？這個方向很值得我們?nèi)祟惾パ芯刻剿鳌Ｒ虼?，本試驗設計了鉬暴露模擬試驗來對鉬中毒進行研究探討。

2　材料與方法

2.1試驗材料

2.1.1試驗動物的選擇試驗選擇健康昆明系ICR雌性小白鼠，由鄭州大學動物試驗中心提供

2.1.2試驗動物的分組試驗選擇健康F1代昆明系ICR雌性小白鼠，由鄭州大學動物試驗中心提供。F1代小鼠的飼養(yǎng)：健康的雌性小白鼠40只和16只，適應5 d后，隨機分成4組，每組10只雌性和4只雄性小白鼠，雌雄分開飼養(yǎng)，自由采食，基礎日糧相同，飲水中加入不同劑量的鉬（以Na2MoO4· 2H2O形式），分別是對照組（0 mg/L）、低鉬組（100mg/L）、中鉬組（200 mg/L）、高鉬組（400 mg/L），4周后雌雄合籠飼養(yǎng)。產(chǎn)的仔即為F1代。

表1　四組小鼠的處理方法

2.1.3試驗動物的飼養(yǎng)管理將F1代雌性小鼠飼養(yǎng)于自制的籠子中，每天早上8∶00左右，晚上在6∶30左右喂料，自由飲水。小白鼠有隨時采食的習性，夜間更為活躍。小白鼠的飼料消耗量，隨著生長發(fā)育和生產(chǎn)繁殖的不同階段而有所不同。小鼠的營養(yǎng)需要一般日糧中含蛋白質(zhì)20%～25%，脂肪5%～12%，纖維素2.5%，碳水化合物45%～60%。由于長期人工養(yǎng)的小白鼠，對環(huán)境的適應性差，不耐冷熱，要求生活在清潔無塵，空氣新鮮，溫度在18～22℃，相對濕度50%～60%，噪音85分貝以下，氨濃度20mg/kg。通風換氣8～12次/h的環(huán)境中。因此，它對飼養(yǎng)房舍的建筑、環(huán)境條件要求比較嚴格。為了保持飼養(yǎng)環(huán)境良好，每周換墊料2次，并對試驗室進行每周清潔2次。飲水方面采用飲水瓶，每周換水3次。并給予適當時間的通風，溫度不夠時，用電暖氣對試驗室進行加熱，以保證小鼠生活的適宜溫度，并且觀察小白鼠的健康狀況，做好記錄［3］。

2.1.4試驗動物的日糧配方白面25%，麩皮18%，酵母粉1%，玉米面20%，骨粉3%，高梁面15%，魚粉4%，食鹽1%，豆餅面22%，雞蛋1%，魚肝油1%，骨肉粉2%。

2.1.5試驗試劑蒸餾水；95%乙醇；雌激素診斷試劑盒 （北京泰格科信，批號：20081106）；Na2MoO4· 2H2O（分子量241.95）：分析純，天津市化學試劑四廠；生理鹽水：氯化鈉注射液，河南華利藥業(yè)有限責任公司，生產(chǎn)批號：C09030104。

2.1.6試驗器材載玻片、標簽紙、鑷子、濾紙、電子天平（FA1104型，上海上平儀器公司）、微生物檢測分析系統(tǒng)、燒杯、培養(yǎng)皿、廣口容量瓶、25 uL微量移液器及槍頭、滴管以及常用手術器械等。

2.2試驗方法

2.2.1采血和分離臟器試驗采用眼球摘除采血法將小鼠處死。將小鼠固定后，采血者的左手拇食兩指從背部較緊地握住小鼠的頸部 （大鼠采血需帶上紗手套），應防止動物窒息。當取血時左手拇指及食指輕輕壓迫動物的頸部兩側(cè)，使眶后靜脈叢充血。右手持彎頭鑷子將一側(cè)凸出眼眶的眼球摘除［4］，同時，助手持試管收集血液，在采血過程中可擠壓小鼠后軀以使血液回流，方便得到足夠血液量。若得到的血量不夠后，在小鼠死亡前可摘除另一側(cè)眼球。摘取眼球采血使小鼠死亡后立即剪開腹腔，分離并摘取小鼠肝臟、腎臟、脾臟。

2.2.2雌激素的測定采取的血液以3 000～4 000 r/min的速度進行離心處理，取上層血漿送534醫(yī)院檢測雌激素水平（化學免疫發(fā)光法）。

2.2.3肝臟、腎臟、脾臟的臟器指數(shù)測定試驗采用眼球摘除采血法將小鼠處死后，對小鼠進行解剖，仔細分離小鼠的肝臟、腎臟、脾臟，分別測定重量，記錄數(shù)據(jù)，計算臟器指數(shù)。

臟器指數(shù)計算公式：肝臟指數(shù)=肝臟重量（g）/小鼠體重（g）；腎臟指數(shù)=腎臟重量（g）/小鼠體重（g）；脾臟指數(shù)=脾臟重量（g）/小鼠體重（g）。

2.3數(shù)據(jù)處理采用SPSS統(tǒng)計分析軟件對試驗數(shù)據(jù)進行分析，用t檢驗法檢驗各染毒組與對照組之間差異的顯著性。

3　結(jié)　果

3.1試驗觀察試驗組動物沒有發(fā)現(xiàn)急性死亡的情況，但是試驗組尤其是高鉬組小鼠較對照正常組矮小，被毛會開叉，色澤度也沒對照正常組好。

3.2不同鉬含量對小鼠體重和肝臟、腎臟、脾臟臟器指數(shù)的影響結(jié)果見表2。

3.3鉬對小鼠雌激素的影響見圖1。

4　分析與討論

表2　鉬對小鼠體重和肝臟、腎臟、脾臟臟器指數(shù)的影響

圖1　鉬對小鼠雌激素的影響

4.1鉬對體重、肝臟、腎臟、脾臟的影響試驗組小鼠體重顯著低于對照組小鼠體重，且試驗組小鼠的體重隨鉬攝入量的攝入的增加而減輕，但差異不顯著（P＞0.05）。這與郭小權等［5］的研究結(jié)果一致：高鉬中毒會引起動物機體體重下降，生長受阻，同時還會引起其他身體器官的變化。本試驗認為，體重產(chǎn)生變化可能有以下幾個因素：（1）小鼠食欲減退，影響其體重下降；（2）過量的鉬能抑制超氧化物歧化酶、黃嘌呤氧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、琥珀酸氧化酶、硫化物氧化酶等生物酶活性，從而影響細胞的正常代謝［6］，導致整體體重的下降。（3）過量的鉬還可影響磷的代謝，降低磷的吸收利用，從而導致骨骼代謝障礙，影響骨骼發(fā)育［7］，骨骼發(fā)育不好導致小鼠相對矮小，從而間接影響其體重下降。

Mo-100組、Mo-200組小鼠的肝臟重量指數(shù)低于對照組的肝臟重量指數(shù)，Mo-400組的肝臟重量指數(shù)高于對照組，且試驗組的肝臟重量指數(shù)的大小隨鉬攝入量的增加而遞增，但差異不顯著（P＞0.05）。本試驗認為，Mo-100組、Mo-200組小鼠的肝臟重量指數(shù)低于對照組，說明肝臟可能發(fā)生萎縮或生長受阻。而Mo-400組的肝臟重量指數(shù)高于對照組，說明高鉬可能導致肝臟發(fā)生萎縮或者生長受阻，但是隨著鉬劑量的增加，肝臟可能產(chǎn)生肝硬化或者纖維化，甚至發(fā)生炎癥，引起肝臟腫大，從而引起肝臟重量指數(shù)的升高。小鼠肝臟指數(shù)的增加或降低均有肝功能異常的酶學改變，輕者僅有血總蛋白TP和白蛋白ALB異常變化，重者ALT、AST、ALP、BIL一項或多項升高，多數(shù)TP、ALB下降［7］。

Mo-100組小鼠的腎臟重量指數(shù)小于對照組的腎臟重量指數(shù)，Mo-200組、Mo-400組的腎臟重量指數(shù)均大于對照組，且試驗組的腎臟重量指數(shù)的大小隨鉬攝入量的增加而遞增，但差異不顯著 （P＞0.05）。腎臟主要參與的是尿液的排放，從試驗中可見Mo-100組小鼠的腎臟重量指數(shù)小于對照組，而Mo-200組、Mo-400組的腎臟重量指數(shù)均大于對照組，造成該結(jié)果的原因可能是Mo-100組的毒性并不能對腎臟造成病理性損傷，它可能只是抑制了腎臟的排毒能力，而隨著鉬劑量的增加，腎臟所能耐受的最大毒性值被打破，直接導致腎臟發(fā)生病理性變化，可能發(fā)生腫大、充血等，這就是導致本試驗結(jié)果的原因。

不同劑量鉬對小鼠體重、肝臟、腎臟的影響差異不顯著，但對小鼠脾臟的影響差異顯著。本試驗研究表明：Mo-100組小鼠的脾臟重量指數(shù)小于對照組的脾臟重量指數(shù)，Mo-200組、Mo-400組的脾臟重量指數(shù)均大于對照組，且試驗組的脾臟重量指數(shù)的大小隨鉬攝入量的增加而遞增。從表2可知，Mo-400組脾臟指數(shù)差異顯著（P＜0.05）。造成該結(jié)果的原因，可以解釋為Mo-200組毒性超出了脾臟的耐受毒性范圍，從而導致脾臟發(fā)生病理性變化。

4.2鉬對性激素水平的影響動物生殖系統(tǒng)的發(fā)育和功能維持受到下丘腦-垂體-性腺（HPG）軸的調(diào)控。下丘腦、垂體、性腺在中樞神經(jīng)的調(diào)控下形成一個封閉的自動反饋系統(tǒng)，三者相互協(xié)調(diào)、相互制約使動物的生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)保持相對穩(wěn)定。下丘腦接受經(jīng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)分析與整合后的各種信息，以間歇性脈沖形式分泌促性腺激素釋放激素 （GnRH），刺激垂體前葉分泌促性腺激素（GTH），即卵泡刺激素（FSH）和黃體生成素（LH），然后促進睪丸或卵巢的發(fā)育并分泌睪酮T或雌二醇。性腺、垂體、下丘腦釋放的調(diào)控因子又可以作用于上級中樞或其自身，形成長軸、短軸和超短軸反饋調(diào)節(jié)通路。

4.3鉬對雌激素的影響雌激素是由卵巢和胎盤產(chǎn)生的。雌二醇是體內(nèi)主要由卵巢成熟濾泡分泌的一種天然雌激素，能促進和調(diào)節(jié)雌性性器官及副性征的正常發(fā)育。雌激素是一類有廣泛生物活性的類固醇化合物，它不僅有促進和維持雌性生殖器官和第二性征的生理作用，并對內(nèi)分泌系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、肌體的代謝、骨骼的生長和成熟，皮膚等各方面均有明顯的影響。

微量元素鉬可能影響丘腦下部-垂體的神經(jīng)內(nèi)分泌功能。丘腦下部-垂體-性腺軸對生殖機能有調(diào)節(jié)作用。丘腦下部分泌促性腺激素釋放激素，引起垂體促性腺激素LH和FSH釋放，LH和FSH刺激性腺分泌雌性激素（卵巢），性腺激素促進生殖系統(tǒng)發(fā)育，維持生殖系統(tǒng)功能。一般認為，激素必須與靶器官細胞的特異性受體結(jié)合后方能產(chǎn)生生物效應。研究表明，無論出生前還是出生后接觸鉬均可改變青春期和成年期小白鼠子宮雌激素受體數(shù)量和雌激素受體的親和力，從而改變子宮對雌激素的反應性。

試驗表明：Mo-100組、Mo-200組、Mo-400組小鼠的雌二醇水平均高于對照組的雌二醇水平，且試驗組雌二醇水平的高低隨鉬攝入量的增加而呈先遞增后遞減的趨勢，Mo-200組的雌二醇水平最高，但差異不顯著（P＞0.05）。這可能是由于高鉬劑量的鉬促使下丘腦-垂體功能亢進，從而促性腺激素分泌增多，最終使卵巢分泌雌激素增加。

5　結(jié)　論

試驗結(jié)果表明：（1）高鉬能夠引起F1代小鼠體重下降，脾臟的臟器指數(shù)增加，并且脾臟臟器指數(shù)差異顯著（P＜0.05）。（2）高鉬能夠促進F1代小鼠雌二醇的生成，引起F1代小鼠雌二醇水平升高，但試驗組與對照組間差異不顯著（P＞0.05）。

［1］史志誠.動物毒物學［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2001：217-219.

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［3］郭路.鉬對雄性小鼠生殖性能的影響［D］.鄭州：河南科技大學，2009：10.

［4］王秋霞.微量元素鉬與人體健康［J］.微量元素與健康研究，2003，20（4）：58-59.

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［7］向麗華，陳燕萍，張智，等.24味有毒中藥長期毒性試驗對大鼠臟器指數(shù)的影響［J］.中藥藥理學，2006，12（1）：36-37.

Effects ofmolybdenum on estrogen of the F1 generation femalem ice

Du Jianchao
（Animal Disease Control and Prevention Center in Jinjiang City，F(xiàn)ujian 362200）

To investigate the effects ofmetalmolybdenum on estrogen of the F1 generation of femalemice，20 healthy ICR rats，30～40 g，were randomly allotted to four groups.Sodium molybdatewas administrated tomice at different doses（aqueous solution with 0mg/L Mo，100mg/LMo，200mg/LMo，400mg/LMo）for seven weeks，the control group received normal drinking water.During the test animals，the situation of all the animalswas observed and recorded.After 7 weeks of feeding，body weightwasmeasured and recorded.Preparation of serum was under blood collection by enucleation，and the liver，kidney and spleen ofmice were determined.And the organ index of liver，kidney and spleen were calculated.The levels of estradiolwere determined by immunoassay technology.

molybdenum mice estrogen

A

1003-4331（2015）02-0001-04