吳艷蓉，王慶，孫啟時(shí)

(1.沈陽市肛腸醫(yī)院 藥劑科，遼寧 沈陽 110002；2.遼寧泰陽醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司，遼寧 本溪 117004；3.沈陽藥科大學(xué) 中藥學(xué)院，遼寧 沈陽 110016)

·基礎(chǔ)研究·

不同產(chǎn)地遼細(xì)辛質(zhì)量比較

吳艷蓉1，王慶2，孫啟時(shí)3*

(1.沈陽市肛腸醫(yī)院 藥劑科，遼寧 沈陽 110002；2.遼寧泰陽醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司，遼寧 本溪 117004；3.沈陽藥科大學(xué) 中藥學(xué)院，遼寧 沈陽 110016)

目的：比較不同產(chǎn)地中藥材遼細(xì)辛的質(zhì)量。方法：用水蒸氣蒸餾法提取并測(cè)定揮發(fā)油的含量，GC-MS法測(cè)定揮發(fā)油中甲基丁香酚、黃樟醚和欖香脂素的相對(duì)含量，HPLC測(cè)定馬兜鈴酸A的含量，原子分光儀等測(cè)定藥材中無機(jī)元素的含量，并用SPSS統(tǒng)計(jì)分析系統(tǒng)進(jìn)行聚類分析。結(jié)果：化學(xué)試驗(yàn)測(cè)定與聚類分析的結(jié)果基本一致，5個(gè)產(chǎn)地的遼細(xì)辛藥材聚為3類。結(jié)論：應(yīng)把揮發(fā)性成分(揮發(fā)油總量、甲基丁香酚、欖香脂素)、有益的無機(jī)元素含量高，毒副作用成分黃樟醚、馬兜鈴酸A和重金屬元素含量低作為評(píng)價(jià)中藥材遼細(xì)辛質(zhì)量的依據(jù)。將化學(xué)試驗(yàn)與聚類分析相結(jié)合，使結(jié)果分析更為快速、準(zhǔn)確。

遼細(xì)辛；不同產(chǎn)地；質(zhì)量比較；化學(xué)實(shí)驗(yàn)測(cè)定；聚類分析

遼細(xì)辛的主要有效成分為揮發(fā)油，揮發(fā)油中主要含甲基丁香酚、黃樟醚和欖香脂素。甲基丁香酚有麻醉和鎮(zhèn)痛作用，黃樟醚為廣譜抗菌成分，但同時(shí)有較大毒副作用，兩者可作為藥材細(xì)辛的品質(zhì)評(píng)價(jià)指標(biāo)[1]。馬兜鈴酸可造成嚴(yán)重的腎臟損害，亦是一種潛在的致癌物質(zhì)[2]。細(xì)辛含有四十多種微量元素，其藥理活性與微量元素的含量特征有一定的相關(guān)性[3-4]。筆者分別測(cè)定了遼細(xì)辛中揮發(fā)性成分、馬兜鈴酸A和無機(jī)元素的含量，并用SPSS統(tǒng)計(jì)分析系統(tǒng)進(jìn)行聚類分析，用數(shù)量分類法對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)，為遼細(xì)辛的質(zhì)量控制提供參考。

1 材料與儀器

1.1 樣品

遼細(xì)辛樣品分別采自遼寧省桓仁縣、新賓縣和清原縣，吉林省汪清縣和富江鄉(xiāng)，經(jīng)沈陽藥科大學(xué)孫啟時(shí)教授鑒定為遼細(xì)辛的根及根莖，樣品來源詳見表1。

1.2 儀器與試劑

GCMS-QP5050A型氣質(zhì)聯(lián)用儀、DB-1MS石英毛細(xì)管色譜柱、LC-10AT型高效液相色譜儀(日本島津公司)；Kromasil C18色譜柱(200 mm×4.6 mm，5 μm，大連依利特有限公司)；EST 210-4型電子天平(沈陽龍騰電子稱量儀器有限公司)；DL_180型超聲儀(35±5 KHz，180 W，浙江省象山石浦海天電子儀器廠)；萬能粉碎機(jī)(10 000 r·min-1，200 W，河北省齊家務(wù)科學(xué)儀器廠)。

馬兜鈴酸A對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：0746-200103)；試驗(yàn)用水為純凈水(杭州娃哈哈集團(tuán))；乙腈(色譜純，天津市康科德科技有限公司)；環(huán)己烷(色譜純，天津市博迪化工有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 揮發(fā)油的含量測(cè)定

遼細(xì)辛揮發(fā)油的含量測(cè)定按《中華人民共和國藥典》2010版一部附錄ⅩD中揮發(fā)油測(cè)定法[5]進(jìn)行。各產(chǎn)地遼細(xì)辛的揮發(fā)油含量測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 不同產(chǎn)地遼細(xì)辛的揮發(fā)油含量

2.2 甲基丁香酚、黃樟醚和欖香脂素的相對(duì)含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 Kromasil C18色譜柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)；起始柱溫為55 ℃，保持5 min后，10 ℃·min-1升溫至260 ℃，氣化室溫度為270 ℃；載氣為氦氣；進(jìn)樣量為0.4 μL；分流比為10∶1；電離方式為EI；電子能量為70 eV；離子源溫度為230 ℃；掃描頻率為1000 amu·s-1。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密吸取2.1項(xiàng)下各產(chǎn)地?fù)]發(fā)油1.5 μL，置于15 mL量瓶中，加入環(huán)己烷溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 精密度試驗(yàn) 取同一份樣品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄各主要共有峰的峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD均小于1.6%。結(jié)果表明，儀器的精密度良好。

2.2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，分別在0、2、4、8、16 h測(cè)定，記錄各主要共有峰的峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD均小于2.1%。結(jié)果表明，樣品在16 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 精密量取供試品5份，分別制成供試品溶液，測(cè)定主要共有峰的峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD均小于0.98%。結(jié)果表明，該方法的重復(fù)性良好。

2.2.6 樣品測(cè)定 吸取供試品溶液，進(jìn)樣分析，經(jīng)計(jì)算機(jī)檢索并與標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照，鑒定出揮發(fā)油的主要組成成分，見圖1。并計(jì)算相對(duì)含量，結(jié)果見表3。

1.黃樟醚；2.甲基丁香酚；3.欖香脂素。圖1 遼細(xì)辛揮發(fā)油的GC-MS圖譜

2.3 馬兜鈴酸A的含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件 流動(dòng)相為乙腈-水(40∶60)；流速為1.0 mL·min-1；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量為20 μL；檢測(cè)波長為390 nm。理論塔板數(shù)按馬兜鈴酸A峰計(jì)算不低于5000[6]。

表3 不同產(chǎn)地遼細(xì)辛揮發(fā)性成分GC-MS含量測(cè)定結(jié)果

2.3.2 樣品含量測(cè)定 精密稱取遼細(xì)辛藥材粉末各1 g，加甲醇-水(3∶1)溶液25 mL，浸泡15 min，超聲處理20 min，濾過，濾液再以0.45 μm微孔濾膜濾過[7]。精確吸取20 μL，注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，記錄馬兜鈴酸A的峰面積，計(jì)算出含量，結(jié)果見表4。

表4 不同產(chǎn)地遼細(xì)辛中馬兜鈴酸A的含量

2.4 無機(jī)元素含量分析

2.4.1 依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)和使用儀器 依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)：JY/T015-1996，DB21-617-1991；使用儀器：等離子體發(fā)射光譜儀，分光光度計(jì)。

2.4.2 樣品測(cè)定 筆者委托中國科學(xué)院林業(yè)土壤研究所對(duì)五個(gè)產(chǎn)地的遼細(xì)辛樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見表5。

表5 不同產(chǎn)地遼細(xì)辛中無機(jī)元素的含量

3 聚類分析

以5個(gè)不同產(chǎn)地遼細(xì)辛藥材為分類單位，以揮發(fā)油、甲基丁香酚、黃樟醚、欖香脂素、馬兜鈴酸A、無機(jī)元素等24項(xiàng)試驗(yàn)數(shù)據(jù)為分類特征，進(jìn)行聚類分析[8]，結(jié)果見圖2。

圖2 不同產(chǎn)地遼細(xì)辛化學(xué)成分的聚類分析結(jié)果

4 討論

4.1遼細(xì)辛中的有效成分主要是揮發(fā)油?！吨腥A人民共和國藥典》2010版規(guī)定，本品含揮發(fā)油不得少于2.0%(mL·g-1)。甲基丁香酚、欖香脂素和黃樟醚3種物質(zhì)存在于31種細(xì)辛屬植物中，故可認(rèn)為是中國細(xì)辛屬植物揮發(fā)油的特征性成分[9]。甲基丁香酚對(duì)支氣管有顯著的松弛作用，其與欖香脂素有明顯的麻醉鎮(zhèn)痛作用[10]。黃樟醚雖為廣譜抗霉菌的有效成分，但毒性較大，可使呼吸中樞麻痹[11]，對(duì)肝細(xì)胞損傷尤為嚴(yán)重，是致癌物質(zhì)。由揮發(fā)油的含量測(cè)定結(jié)果可知，5個(gè)產(chǎn)地的遼細(xì)辛揮發(fā)油含量均達(dá)到《中華人民共和國藥典》要求。就揮發(fā)性成分而言，以吉林省汪清縣遼細(xì)辛的揮發(fā)油總量最高，主要有效成分甲基丁香酚含量最高，毒副作用成分黃樟醚含量最低。欖香脂素在有的產(chǎn)地的藥材中雖有檢出，但含量都很低。

4.2馬兜鈴酸廣泛存在于馬兜鈴科植物中，是中藥具有腎毒性的主要原因。20世紀(jì)60年代對(duì)馬兜鈴酸的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，其有抗腫瘤活性和增強(qiáng)機(jī)體白細(xì)胞吞噬能力的作用[12]。隨著對(duì)馬兜鈴酸和含馬兜鈴酸中藥的進(jìn)一步研究及臨床應(yīng)用的推廣，發(fā)現(xiàn)其有較強(qiáng)的致突變、致癌作用及一些不良反應(yīng)，特別是腎毒性[13]。筆者對(duì)5個(gè)產(chǎn)地的遼細(xì)辛樣品進(jìn)行馬兜鈴酸A含量檢測(cè)，結(jié)果顯示遼寧清原的藥材樣品中未檢出馬兜鈴酸A，遼寧桓仁產(chǎn)遼細(xì)辛中馬兜鈴酸A的含量較高。

4.3現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)證明，遼細(xì)辛具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎以及較強(qiáng)的心血管系統(tǒng)作用。將遼細(xì)辛的藥理活性與其道地藥材中含量較高的幾種微量元素的生理活性進(jìn)行比較，可初步推測(cè)遼細(xì)辛的某些藥理作用可能與其中幾種微量元素的含量有關(guān)[4]。

4.4應(yīng)把揮發(fā)性成分(揮發(fā)油總量、甲基丁香酚、欖香脂素)和有益的無機(jī)元素含量高，毒副作用成分黃樟醚、馬兜鈴酸A和重金屬元素含量低作為評(píng)價(jià)中藥材遼細(xì)辛質(zhì)量的依據(jù)。

4.5聚類分析結(jié)果顯示，5個(gè)產(chǎn)地的遼細(xì)辛聚為3類。產(chǎn)地3、4、5為第一類，產(chǎn)地1為為第二類，產(chǎn)地2為第三類?；瘜W(xué)試驗(yàn)的結(jié)果顯示，第一類樣品的揮發(fā)油、甲基丁香酚以及某些有益微量元素的含量相對(duì)較高，毒性及不良反應(yīng)成分黃樟醚、馬兜鈴酸A的含量很低或沒有，質(zhì)量相對(duì)較好。聚類分析的結(jié)果與化學(xué)分析數(shù)據(jù)基本吻合，因此，以化學(xué)試驗(yàn)與聚類分析相結(jié)合的方式獲得中藥材的質(zhì)量分析結(jié)果，可為中藥材質(zhì)量控制提供更為科學(xué)準(zhǔn)確的參考依據(jù)。

[1] 周長征，楊春澍，馬長華，等.氣相色譜法測(cè)定細(xì)辛揮發(fā)油中甲基丁香酚和黃樟醚的含量[J].中國藥學(xué)雜志，1999，34(12)：836-839.

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Quality Comparison ofAsarumheterotropoidesvar.mandshuricumfromdifferentproducingplaces

WU Yanrong1，WANG Qing2，SUN Qishi3*

(1.Pharmacy Department，Shenyang ColoproctologicalHospital，Shenyang 110002，China；2.Liaoning Tai yang Pharmaceutical Technology Development Co.，Ltd.，Benxi 117004，China；3.School of Traditional Chinese Materia Medica，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China)

Objective：To compare the quality ofAsarumheterotropoidesFr.Schmidt var.mandshuricum(Maxim.)Kitag.produced in different places.Methods：Steam distillation was used to extract and determine the content of the essential oil.The relative content of methyleugenol，safrole and elenicin was determined by GC-MS.Aristolochic acid A was determined by HPLC.The content of inorganic elements was determined by atomic absorption spectrometer.Fuzzy cluster was used to analyze the results by SPSS.Results：Chemical experiment results and cluster analysis results were basically accordant.The medicinal materials from five places were divided into three categories.Conclusion：The high content of the volatile components(total essectial oils，methyleugenol，and elemicin)and inorganic element，and low content of the harmful safrole，aristolochic acid A and heavy metal elements should be used for quality evaluation ofA.heterotropoidesvar.mandshuricum.The analytical chemistry experiment combined with cluster analysis of the results is more rapid and accurate.

AsarumheterotropoidesFr.Schmidt var.mandshuricum(Maxim.)Kitag.；different produced places；comparison of quality；chemical experiment analysis；cluster analysis

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.2.007

2014-07-22)

*

孫啟時(shí)，男，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：中藥資源開發(fā)和利用；E-mail：sunqishi@sina.com