辛愛玲，郭潤琴

(1.洛陽市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 洛陽 471023；2.廣東省食品藥品職業(yè)技術(shù)學(xué)校，廣東 廣州 510663)

·中藥工業(yè)·

天麻熄風(fēng)膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

辛愛玲1*，郭潤琴2

(1.洛陽市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 洛陽 471023；2.廣東省食品藥品職業(yè)技術(shù)學(xué)校，廣東 廣州 510663)

目的：建立天麻熄風(fēng)膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：用顯微鑒別法及TLC法對處方中各種藥材進(jìn)行定性鑒別，HPLC測定天麻素的含量。采用Thermo Hypersil ODS柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相為乙腈-0.05%磷酸溶液(3∶97)；流速為1 mL·min-1；檢測波長為221 nm。結(jié)果：顯微鑒別特征專屬，薄層色譜斑點(diǎn)清晰，陰性對照無干擾；天麻素在10.48～94.32 μg·mL-1呈良好的線形關(guān)系(r=0.999 9，n=5)。結(jié)論：本方法專屬性強(qiáng)、簡便、準(zhǔn)確，可用于天麻熄風(fēng)膠囊的質(zhì)量控制。

天麻熄風(fēng)膠囊；顯微鑒別；薄層色譜；高效液相色譜

天麻熄風(fēng)膠囊由天麻、蔓荊子、莪術(shù)、半夏和甘草5種中藥材組成，具有平肝、熄風(fēng)、止痙、疏散風(fēng)熱、清利頭目的功能。適用于筋脈牽掣、肢體麻木、頭風(fēng)眩暈、目暗不明、周身疼痛等癥。天麻熄風(fēng)膠囊現(xiàn)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅有性狀及檢查項(xiàng)，不能很好地控制質(zhì)量，為進(jìn)一步提高其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本試驗(yàn)對天麻熄風(fēng)膠囊進(jìn)行了顯微鑒定，避開交叉，排除干擾，選取各藥材具有鑒別價(jià)值的特征為鑒別要點(diǎn)。檢出了方中天麻、蔓荊子、半夏及甘草，并對它們進(jìn)行了TLC鑒別，與顯微鑒定結(jié)果相呼應(yīng)。采用HPLC建立了該方中君藥天麻的主要成分—天麻素的含量測定方法。試驗(yàn)結(jié)果表明，該法專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確、簡便，能夠有效地控制該制劑的質(zhì)量。

1 顯微鑒別

1.1 儀器與試藥

德國徠卡DM500型照相顯微鏡；天麻熄風(fēng)膠囊(洛陽市第二中醫(yī)院制劑室，批號(hào)分別為20130918，200130919，20131120)。

1.2 方法與結(jié)果

取天麻熄風(fēng)膠囊內(nèi)容物研磨均勻，制備粉末片子，置顯微鏡下觀察各藥味的鑒別特征，見圖1。

1.2.1 天麻 用醋酸甘油水裝片觀察糊化多糖類的薄壁，細(xì)胞無色，有的細(xì)胞可見長卵形、長橢圓形或類圓形，遇碘液顯棕色或淡棕紫色。

1.2.2 半夏 橢圓形細(xì)胞存在于粘液細(xì)胞中。

1.2.3 甘草 纖維成束，壁厚，微木化，周圍薄壁細(xì)胞含草酸鈣方晶，形成晶纖維。

1.2.4 蔓荊子 非腺毛2～3個(gè)細(xì)胞，頂端細(xì)胞基部稍粗，有疣突。

1.多糖類的薄壁細(xì)胞(天麻)；2.嵌晶纖維(甘草)；3.草酸鈣針晶束(半夏)；4.非腺毛(蔓荊子)。圖1 天麻熄風(fēng)膠囊顯微圖

2 薄層色譜鑒別

2.1 儀器與材料

KQ2200B型超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；GC-8AFF薄層數(shù)碼成像系統(tǒng)(CAMAG公司)；Canon PowerShot G5數(shù)碼照相機(jī)；天麻素對照品、莪術(shù)對照藥材、蔓荊子對照藥材、半夏對照藥材(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)分別為807-200104，121304-200902，121277-200401，121272-200401)。

2.2 方法與結(jié)果

2.2.1 天麻 取天麻熄風(fēng)膠囊粉末約1.5 g，加70%甲醇15 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL，使其溶解，作為供試品溶液。取天麻熄風(fēng)膠囊缺天麻陰性樣品按同法制備成陰性對照溶液。另取天麻素對照品，加甲醇制成質(zhì)量濃度為1 mg·mL-1溶液，作為對照品溶液。照TLC法試驗(yàn)吸取上述3種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(8∶1∶3∶0.1)為展開劑，展開、取出、晾干，噴以10%磷鉬酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，斑點(diǎn)顯色清晰，背景無干擾，Rf值適中，陰性對照無干擾。見圖2。

1.樣品20130918；2.樣品20130919；3.樣品20131120；4.天麻素對照品；5.缺天麻陰性對照樣品。圖2 天麻TLC鑒別色譜圖

2.2.2 蔓荊子 取天麻熄風(fēng)膠囊10 g，加石油醚(60～90 ℃)50 mL，加熱回流2 h，濾過，棄去石油醚，藥渣揮干，加丙酮80 mL，加熱回流1.5 h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL，使其溶解，作為供試品溶液。取天麻熄風(fēng)膠囊缺蔓荊子陰性樣品按同法制備成陰性對照溶液。另取蔓荊子對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。照TLC法試驗(yàn)吸取上述3種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇(3∶2∶0.2)為展開劑，展開、取出、晾干，噴以10%三氯化鋁乙醇液。在日光及紫外燈(365 nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，斑點(diǎn)顯色清晰，背景無干擾，Rf值適中，陰性對照無干擾。見圖3。

A.日光下檢視圖；B.紫外燈下檢視圖1.樣品20130918；2.樣品20130919；3.樣品20131120；4.蔓荊子對照藥材；5.缺蔓荊子陰性對照樣品。圖3 蔓荊子TLC鑒別色譜圖

2.2.3 半夏 取天麻熄風(fēng)膠囊10 g，加乙醇50 mL，加熱回流30 m，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL，使其溶解，作為供試品溶液。取天麻熄風(fēng)膠囊缺半夏陰性樣品按同法制備成陰性對照溶液。另取半夏對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。照TLC法試驗(yàn)吸取上述3種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯-丙酮-甲酸(30∶6∶4∶0.5)為展開劑，展開、取出、晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液。在日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，斑點(diǎn)顯色清晰，背景無干擾，Rf值適中，陰性對照無干擾。見圖4。

1.樣品20130918；2.樣品20130919；3.樣品20131120；4.半夏對照藥材；5.缺半夏陰性對照樣品。圖4 半夏TLC鑒別色譜圖

2.2.4 莪術(shù) 取天麻熄風(fēng)膠囊1.5 g，加乙醚20 mL，放置2 h，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL，使其溶解，作為供試品溶液。取天麻熄風(fēng)膠囊缺莪術(shù)陰性樣品按同法制備成陰性對照溶液。另取莪術(shù)對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。照TLC法試驗(yàn)吸取上述3種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯(93∶7)為展開劑，展開、取出、晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液。在日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，斑點(diǎn)顯色清晰，背景無干擾，Rf值適中，陰性對照無干擾。見圖5。

1.樣品20130918；2.樣品20130919；3.樣品20131120；4.莪術(shù)對照藥材；5.缺莪術(shù)陰性對照樣品。圖5 莪術(shù)TLC鑒別色譜圖

3 天麻熄風(fēng)膠囊中天麻素的含量測定

3.1 儀器與材料

高效液相色譜儀(Waters 2695)；二極管陣列檢測器2996；DF-160A電子分析天平(常熟市衡器廠)；天麻素對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：807-200104)；乙腈為色譜純，蒸餾水經(jīng)微孔濾膜(0.45 μm)過濾，其他試劑均為分析純。

3.2 方法與結(jié)果

3.2.1 色譜條件 Thermo Hypersil ODS柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫為40 ℃；流動(dòng)相為乙腈-0.05%磷酸溶液(3∶97)；流速為1 mL·min-1；檢測波長為221 nm。理論板數(shù)按天麻素峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。

3.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取天麻素對照品適量，加流動(dòng)相溶解制成質(zhì)量濃度為1.048 mg·mL-1的溶液，作為對照品儲(chǔ)備溶液。

3.2.3 供試品溶液的制備 取天麻熄風(fēng)膠囊內(nèi)容物5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，稱定重量，加熱回流3 h，放置至室溫，稱重，用稀乙醇補(bǔ)足失去的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密吸取續(xù)濾液10 mL，濃縮至近干，殘?jiān)右译?水(3∶97)混合溶液溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中。用乙腈-水(3∶97)混合溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.2.4 陰性對照溶液的制備 天麻熄風(fēng)膠囊原方去天麻，按制劑工藝制備成空白制劑。取空白制劑5 g，按3.2.3樣品處理方法，制得陰性樣品溶液。按3.2.1色譜分析方法操作進(jìn)樣，結(jié)果表明，陰性對照無干擾。見圖6。

A.天麻素對照品；B.天麻息風(fēng)膠囊樣品；C.缺天麻陰性對照品。圖6 天麻素HPLC色譜圖

3.2.5 線性范圍的考察 分別精密量取對照品儲(chǔ)備溶液0.1、0.3、0.5、0.7、0.9 mL置10 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取10 μL注入色譜儀，測定峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，計(jì)算得回歸方程為Y=171.014 8X-0.474 95，r=0.999 9，表明天麻素在10.48～94.32 μg·mL-1線性關(guān)系良好。

3.2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取3.2.5項(xiàng)下對照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定峰面積，RSD=0.78%，表明該方法精密度良好。

3.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液(批號(hào)：20130918)10 μL，于0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣，測定峰面積，RSD=1.08%(n=6)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同批樣品5份(批號(hào)：20130918)如3.2.3法提取，按照3.2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，結(jié)果RSD=0.94%，表明該方法重復(fù)性良好。

3.2.9 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量同批樣品9份，分別精密加入天麻素對照品溶液，如3.2.3法制備成加標(biāo)樣品溶液，按照3.2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

3.2.10 樣品含量測定 分別精密吸取對照品溶液與樣品溶液各10 μL，注入色譜儀，以外標(biāo)法按面積計(jì)算，測得3批樣品含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品測定結(jié)果

4 討論

4.1本方共有5種藥材組成，其中天麻為君藥，故本試驗(yàn)對方中天麻分別進(jìn)行了顯微鑒定及薄層鑒定，并對其主要成分天麻素進(jìn)行了含量測定，有效控制了方中君藥的真?zhèn)渭皟?yōu)劣。對方中臣藥及佐藥(莪術(shù)、蔓荊子、半夏)進(jìn)行了鑒定，其中莪術(shù)與蔓荊子顯微特征均含有油細(xì)胞，在片子上不易區(qū)分，故對莪術(shù)進(jìn)行了薄層鑒別。蔓荊子具有特定的非腺毛特征，半夏具有草酸鈣針晶束存在于粘液細(xì)胞中的獨(dú)特特征，故對蔓荊子及半夏分別進(jìn)行了顯微鑒定和薄層鑒定，鑒定結(jié)果相呼應(yīng)。甘草在方中僅作為使藥，且用量較少，故在本試驗(yàn)中僅做了顯微鑒定，以確定其真?zhèn)巍?/p>

4.2在對蔓荊子的薄層色譜鑒別中，根據(jù)有關(guān)資料[1-2]，筆者先后用了石油醚和甲醇提取，結(jié)果莪術(shù)成分對其干擾嚴(yán)重，最后用石油醚去脂、丙酮提取的辦法，取得滿意結(jié)果。

4.3在對半夏的薄層色譜鑒別中，參考相關(guān)資料[1，3]，多半采用檢測半夏中的氨基酸類成分來進(jìn)行鑒別，專屬性不強(qiáng)，干擾明顯，不能作為鑒別依據(jù)，故選擇了以半夏藥材來進(jìn)行比較鑒別。

4.4本試驗(yàn)中，參考有關(guān)文獻(xiàn)[4-10]，筆者曾對流動(dòng)相的選擇、供試品的取樣量、提取溶劑、提取方法等多種因素進(jìn)行了考察，最后確定以下條件為最佳方案：柱溫為40 ℃；流動(dòng)相為乙腈-0.05%磷酸溶液(3∶97)；流速為1 mL·min-1；供試品取樣量為5 g，用稀乙醇進(jìn)行提取，經(jīng)過中間步驟的處理，最后以乙腈-水(3∶97)溶解定容。取天麻素對照品溶液用紫外進(jìn)行全波長掃描測定，結(jié)果在221 nm處有最大吸收，故選擇221 nm作為檢測波長。

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Study on Quality Standard of Tianmaxifeng Capsules

XIN Ailing1*，GUO Runqin2

(1.Institute for Food and Drug Control，Henan Luoyang 471023，China；2.Guangdong Food and Drug Vocational Technical School，Guangdong Guangzhou 510663，China)

Objective：To establish the quality standard for Tianmaxifeng Capsules.Methods：Microscopical identification and TLC method were used to qualitative identification of all materia medica in prescription，and the content of gastrodin was determined by HPLC with Thermo Hypersil ODS column(4.6 mm×250 mm，5 μm)，the mobile phase was composed of acetonitrile and 0.05% phosphoric acid(3∶97)，the flow rate was 1 mL·min-1and the detection wavelength was set at 221 nm.Results：Microscopic identification features were exclusive，the TLC sports developed were fairly clear，and the blank test showed no interference.The line of the content of gastrodin in Tianmaxifeng Capsules was nearly straight between 10.48-94.32 μg·mL(r=0.999 9，n=5).Conlcusion：The methods are specific，accurate and quick to operate，and can be used for the quality control of Tianmaxifeng Capsules.

Tianmaxifeng capsules；microscorpic identification；TLC；HPLC

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.2.016

2014-05-22)

*

辛愛玲，主管藥師，研究方向：中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；Tel：(0379)63937083，E-mail：xinling0609@163.com