彭亮，李詒光，陳杰，饒毅，魏惠珍，眭榮春

(江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌 330006)

·中藥工業(yè)·

猴耳環(huán)消炎膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

彭亮，李詒光*，陳杰*，饒毅，魏惠珍，眭榮春

(江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌 330006)

目的：研究建立猴耳環(huán)消炎膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層鑒制法(TLC)為對(duì)猴耳環(huán)消炎膠囊中沒(méi)食子酸進(jìn)行定性鑒別；采用高效液相色譜法同時(shí)對(duì)猴耳環(huán)消炎膠囊中沒(méi)食子酸和槲皮素進(jìn)行定量測(cè)定。色譜柱為Odyssil C18(250 mm×4.6 mm，5μm)；流動(dòng)相為乙腈-0.2%磷酸水溶液，梯度洗脫；流速為1.0 mL·min-1；柱溫為30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm；進(jìn)樣量為5 μL。結(jié)果：薄層斑點(diǎn)清晰，分離效果好。沒(méi)食子酸在0.602～18.1 μg線性關(guān)系良好(r=0.999 5)，平均回收率為98.9%，RSD值為1.8%；槲皮素在0.016 9～0.507 μg線性關(guān)系良好(r=0.999 6)，平均回收率為99.5%，RSD值為1.5%。結(jié)論：建立的方法簡(jiǎn)便可行、準(zhǔn)確，可為猴耳環(huán)消炎膠囊的質(zhì)量控制提供參考。

猴耳環(huán)消炎膠囊；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層鑒別；高效液相色譜法；沒(méi)食子酸；槲皮素

猴耳環(huán)為豆科植物猴耳環(huán)Archidendronclypearia(Jack)Nielsen.干燥略帶小枝的葉，又名蛟龍木、洗頭木等，屬多年生喬木，是一種能治療多種熱毒癥候，珍稀且獨(dú)特的南方藥材[1]。民間傳統(tǒng)以猴耳環(huán)枝葉煮水來(lái)洗瘡、化膿性傷口及濕疹等，其去腐生新功能獨(dú)特。猴耳環(huán)消炎膠囊為猴耳環(huán)藥材單方制劑，收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》第6冊(cè)(WS3-B-1249-92)，具有清熱解毒、涼血消腫、收濕斂瘡、止瀉等作用[2]，用于上呼吸道感染、急性咽喉炎、急性扁桃體炎、急性胃腸炎等，亦可用于細(xì)菌性痢疾?，F(xiàn)代研究表明，猴耳環(huán)主要含有黃酮類、酚酸類等成分，如沒(méi)食子酸、槲皮素等[3-4]。其中，沒(méi)食子酸具有抗炎、抑菌、抗病毒等功能；槲皮素具有抗氧化、清除自由基、增強(qiáng)免疫功能等作用[5-6]，與猴耳環(huán)消炎膠囊的藥理作用相同，是其主要有效成分[7]。目前，尚沒(méi)有對(duì)猴耳環(huán)消炎膠囊進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的文獻(xiàn)報(bào)道。為有效控制猴耳環(huán)消炎膠囊的質(zhì)量，本文首次建立了該膠囊中沒(méi)食子酸的薄層鑒別方法，并建立了同時(shí)測(cè)定沒(méi)食子酸和槲皮素的高效液相色譜法，為猴耳環(huán)消炎膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100型高效液相色譜儀(包括Agilent ChemStation B.03.01軟件、G1379A在線真空脫氣機(jī)、G1311A四元泵、G1367A自動(dòng)進(jìn)樣器、G1316A柱溫箱、G1315B DAD檢測(cè)器)；SK5200LH超聲波清洗器(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)；AB204-N型精密分析天平(METTLER TOLEDO上海衡器有限公司)；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司)。

1.2 試藥

猴耳環(huán)消炎膠囊由貴州良濟(jì)藥業(yè)有限公司、廣州萊泰制藥有限公司、廣州市花城制藥廠提供，規(guī)格：0.4g/粒；猴耳環(huán)藥材由安徽省亳州市中信中藥飲片廠提供，經(jīng)鑒定為豆科植物猴耳環(huán)Archidendronclypearia(Jack)Nielsen.；沒(méi)食子酸對(duì)照品、槲皮素對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)分別為110831-201204，100081-200907)；薄層色譜用硅膠G(青島海洋化工廠)；乙腈為色譜純(山東禹王實(shí)業(yè)有限公司化工分公司)；水為娃哈哈飲用純凈水；甲醇等其他試劑均為分析純。

2 沒(méi)食子酸的薄層鑒別

取猴耳環(huán)消炎膠囊內(nèi)容物及缺猴耳環(huán)陰性樣品各2 g，分別加水100 mL，回流提取30 min，濾過(guò)，濾液用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30 mL。合并乙酸乙酯液，減壓回收至干，殘?jiān)蛹状? mL使其溶解，作為供試品溶液和陰性對(duì)照溶液。取猴耳環(huán)藥材1 g，加水100 mL，同法制成猴耳環(huán)對(duì)照藥材溶液。另取沒(méi)食子酸對(duì)照品，加甲醇制成質(zhì)量濃度為5 mg·mL-1沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液和對(duì)照品溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲酸乙酯-甲酸(5∶5∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鋁溶液，于105 ℃烘約5 min，置紫外光燈(254 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品和藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)此斑點(diǎn)，見圖1。

注：1.沒(méi)食子酸對(duì)照品；2.猴耳環(huán)對(duì)照藥材；3.陰性供試品；4～6.猴耳環(huán)消炎膠囊供試品(廣州萊泰制藥，批號(hào)分別為140101，140601，140702)圖1 猴耳環(huán)消炎膠囊薄層鑒別色譜圖

3 沒(méi)食子酸和槲皮素定量測(cè)定

3.1 對(duì)照品溶液的制備

取沒(méi)食子酸、槲皮素對(duì)照品適量，精密稱定，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成混合對(duì)照品溶液(每mL中分別含沒(méi)食子酸0.602 0 mg、槲皮素0.016 9 mg)。

3.2 供試品溶液的制備

取本品內(nèi)容物約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇50 mL，稱定重量，回流提取1.5 h，取出，放冷，再稱定重量，用50%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，取濾液，即得。

3.3 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色譜柱Odyssil C18(250 mm×4.6 mm，5μm)；流動(dòng)相為乙腈(A)-0.2%磷酸水溶液(B)，梯度洗脫(0～7 min，8% A；7～17 min，8%～24% A；17～27 min，24%～27% A)；流速為1.0 mL·min-1；柱溫為30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm；進(jìn)樣量為5 μL。結(jié)果表明，混合對(duì)照品溶液和供試品溶液的色譜圖中沒(méi)食子酸、槲皮素色譜峰無(wú)拖尾，分離度良好，見圖2～3。

圖2 混合對(duì)照品色譜圖

圖3 供試品色譜圖

3.4 線性關(guān)系考察

精密吸取3.1項(xiàng)下制備的混合對(duì)照品溶液1、5、10、20、30 μL，注入液相色譜儀中，按上述色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖。以對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)X，以峰面積為縱坐標(biāo)Y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進(jìn)行線性回歸。得回歸方程，沒(méi)食子酸：Y=620.26X+747.48(r=0.999 5)；槲皮素：Y=755.66X+4.467 5(r=0.999 6)。結(jié)果表明：沒(méi)食子酸對(duì)照品進(jìn)樣量在0.602～18.1 μg與峰面積有良好線性關(guān)系；槲皮素對(duì)照品進(jìn)樣量在0.016 9～0.507 μg與峰面積有良好線性關(guān)系。

3.5 精密度試驗(yàn)

取3.1項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次5 μL，按3.3項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，沒(méi)食子酸的平均峰面積為294.6，RSD為0.75%；槲皮素的平均峰面積為79.9，RSD為1.1%，表明儀器精密度良好。

3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取猴耳環(huán)消炎膠囊(貴州良濟(jì)藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20121008)，按3.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別在供試品溶液制備后0、2、4、8、12、24 h，按3.3項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果沒(méi)食子酸的平均峰面積的RSD為0.59%；槲皮素的平均峰面積的RSD為1.6%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取猴耳環(huán)消炎膠囊(貴州良濟(jì)藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20121008)6份，按3.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按3.3項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果沒(méi)食子酸的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為121.7 mg·g-1，RSD為0.31%；槲皮素的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.63 mg·g-1，RSD為2.3%，表明該方法重復(fù)性良好。

3.8 加樣回收試驗(yàn)

取已知含量猴耳環(huán)消炎膠囊(廣州花城制藥廠，批號(hào)：20140501)約0.5 g，共6份，精密稱定。分別精密加入一定量的沒(méi)食子酸對(duì)照品和槲皮素對(duì)照品，按3.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按3.3項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，見表1。沒(méi)食子酸平均回收率為98.9%，RSD為1.8%；槲皮素平均回收率99.5%，RSD為1.5%，表明該方法的準(zhǔn)確度良好。

表1 沒(méi)食子酸和槲皮素加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

3.9 樣品測(cè)定

取10批猴耳環(huán)消炎膠囊，按3.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按3.3項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，將測(cè)得的沒(méi)食子酸和槲皮素的峰面積值各自代入線性回歸方程中，計(jì)算各樣品中沒(méi)食子酸和槲皮素的含量，結(jié)果見表2。

表2 猴耳環(huán)消炎膠囊中沒(méi)食子酸和槲皮素含量(n=3) mg/粒

4 討論

4.1文獻(xiàn)報(bào)道，沒(méi)食子酸與槲皮素在254、360 nm處均有較強(qiáng)吸收[8-9]，但本品在360 nm處槲皮素峰面積較小，故選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，可與其他雜質(zhì)峰完全分離。

4.2由于沒(méi)食子酸與槲皮素極性差別較大，必須采用梯度洗脫。同時(shí)，在流動(dòng)相中加入磷酸可明顯改善沒(méi)食子酸和槲皮素色譜峰的峰形。

4.3猴耳環(huán)消炎膠囊中的槲皮素含量較低，不同廠家的有效成分波動(dòng)較大，提示成品的工藝還有待完善，成品質(zhì)量有待提高。

[1] 《全國(guó)中草藥匯編》編寫組.全國(guó)中草藥匯編[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1986：613-615.

[2] 廣東省食品藥品監(jiān)督管理局.廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)：第一冊(cè)[S].廣州：廣東科學(xué)技術(shù)出版社，2004：197-199.

[3] 蘇妙賢，唐之岳，黃偉歡，等.猴耳環(huán)化學(xué)成分研究[J].中藥材，2009，32(5)：705-707.

[4] 李鏡友，羅巧紅，張曼，等.HPLC法測(cè)定不同采收期猴耳環(huán)中沒(méi)食子酸的含量[J].中藥材，2009，32(6)915-916.

[5] 柯發(fā)敏，張開蓮.沒(méi)食子酸的研究進(jìn)展[J].瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，34(4)：440-442

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[7] 劉永剛，王曉東，張小兵.猴耳環(huán)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)藥師，2008，11(1)：29-31.

[8] 李艷芳，夏泉，許風(fēng)清，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定熱淋清制劑中沒(méi)食子酸和槲皮素的含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2008，14(12)：15-17.

[9] 梁泰剛，劉偉，趙承孝，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定養(yǎng)心草中沒(méi)食子酸、槲皮素和山柰酚的含量[J].光譜實(shí)驗(yàn)室，2009，26(4)：881-884.

QualityStandardofHouerhuanAnti-inflammatoryCapsules

PENGLiang，LIYiguang*，CHENJie*，SUIRongchun

(JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine，Nanchang330006，China)

Objective：To establish the quality standards for Houerhuan anti-inflammatory capsules.Methods：The gallic acid was identified by TLC，the contents of gallic acid and quercetin were determined by HPLC.The chromatographic separation was performed on Odyssil C18column(250 mm×4.6 mm，5 μm)，the mobile phase was acetonitrile-0.2% H3PO4in gradient elution.The flow rate was 1.0 mL·min-1，and the column temperature maintained at 30℃.The detection wavelength was 254 nm，and the injection volume was 5 μL.Results：TLC spots were clear，and good separated.The linearity of gallic acid was good in the range of 0.602-18.1 μg(r=0.999 5)，and the average recovery was 98.9%(RSD=1.8%).The linearity of quercetin was good in the range of 0.016 9-0.507 μg(r=0.999 6)，and the average recovery of 99.5%(RSD=1.5%).Conclusion：The established method is simple，accurate and can provide reference for quality control of Houerhuan anti-inflammatory capsules.

Houerhuan anti-inflammatory capsules；quality standard；TLC；HPLC；gallic acid；quercetin

2014-12-10)

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李詒光，主任中藥師，研究方向：中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)與開發(fā)；E-mail：lyg@jzjt.com 陳 杰，副教授，研究方向：中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)與開發(fā)；E-mail：813680107@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.7.015