李向欣 王艷飛 解俊敏 賈新未 王占啟 張芳

臨床研究

急性ST段抬高型心肌梗死PCI術(shù)后血小板CD40L及血小板指標(biāo)臨床相關(guān)性分析

李向欣 王艷飛 解俊敏 賈新未 王占啟 張芳

目的 探討急性ST段抬高型心肌梗死（STEMI）患者經(jīng)皮冠狀動脈介入治療（PCI）術(shù)后血小板CD40L及血小板指標(biāo)變化的臨床意義。方法 選取河北大學(xué)附屬醫(yī)院2013年4月至2014年4月接診的急性ST段抬高型心肌梗死行PCI術(shù)患者63例為研究組；另選同期行健康體檢者50名為對照組。兩組皆采取流式細(xì)胞技術(shù)進(jìn)行血小板CD40L檢測，并測定血小板計(jì)數(shù)（PLT）、血小板體積分布寬度（PDW）、血小板平均體積（MPV）、血小板壓積（PCT）、肌鈣蛋白I（Tn-I）等，應(yīng)用Person相關(guān)分析法分析血小板CD40L及血小板指標(biāo)臨床相關(guān)性，其中研究組檢測時間包括術(shù)前與術(shù)后，而對照組健康者則僅為入組時。結(jié)果 ①研究組術(shù)前與對照組入組時比較，CD40L及Tn-I明顯升高（P<0.05）。②研究組患者術(shù)后與對照組入組時比較，CD40L 明顯升高［（8.97±0.73）MFI比（0.80±0.27）MFI]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。研究組患者術(shù)后 Tn-I明顯高于對照組入組時［（18.74±2.65）μg/L 比（0.010±0.008）μg/L，P<0.05]；MPV、PDW 數(shù)值高于對照組入組時（P<0.05）；而兩組患者 PLT、PCT未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。③研究組患者術(shù)后 CD40L、Tn-I、MPV、PDW 較術(shù)前明顯升高。④PCI術(shù)后患者血小板CD40L水平與MPV及PDW呈正相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論 急性ST段抬高型心肌梗死行PCI患者的血小板形態(tài)改變屬于血小板活化的主要特點(diǎn)，而血小板指標(biāo)可能對血小板CD40L的表達(dá)產(chǎn)生影響，從而引發(fā)凝血及炎癥反應(yīng)，應(yīng)加強(qiáng)重視。

急性心肌梗死； 經(jīng)皮冠狀動脈介入治療； 血小板表達(dá)細(xì)胞分化抗原40配體； 血小板指標(biāo)； 臨床相關(guān)性

急性ST段抬高型心肌梗死（STEMI）指持久而嚴(yán)重的心肌缺血導(dǎo)致部分心肌急性壞死。病理機(jī)制是冠脈斑塊破裂致血栓堵塞管腔，臨床表現(xiàn)包括胸骨后劇烈疼痛、大汗、瀕死感、急性循環(huán)功能衰竭癥狀，以及出現(xiàn)心律失常、白細(xì)胞計(jì)數(shù)升高、發(fā)熱等現(xiàn)象，血小板聚集率也隨之增強(qiáng)[1,2]。臨床治療STEMI已廣泛采用經(jīng)皮冠狀動脈介入治療（PCI）。該手術(shù)屬于介入性血運(yùn)重建術(shù)，可伴隨內(nèi)分泌、血管等細(xì)胞因子變化而引發(fā)血小板及其指標(biāo)活化、聚集及炎性因子釋放等[3]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，急性心肌梗死PCI術(shù)后患者血小板表達(dá)細(xì)胞分化抗原40配體（CD40L）會明顯升高[4]，同時與血小板指標(biāo)有一定相關(guān)性[5]。本研究對STEMI患者PCI術(shù)后血小板CD40L及血小板指標(biāo)臨床相關(guān)性進(jìn)行了進(jìn)一步研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取河北大學(xué)附屬醫(yī)院心內(nèi)科2013年4月至2014年4月接診的急性ST段抬高型心肌梗死PCI患者63例為研究組，選取同期行健康體檢者50例作為對照組。研究組男性43例、女性 20 例，年齡 50～80（65.1±8.5）歲；對照組男性33 例、女性 17 例，年齡 45～75（64.32±8.71）歲。兩組年齡、性別等一般資料比較未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），具有可比性。所有患者均簽署知情同意授權(quán)委托書并經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核同意。

心肌梗死的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]：有心肌標(biāo)志物的改變，至少1次肌鈣蛋白I（Tn-I）數(shù)值超過正常參考值上限的99百分位，幷伴有如下依據(jù)之一：①缺血性胸痛；②心電圖連續(xù)2個導(dǎo)聯(lián)（V1、V2導(dǎo)聯(lián)除外）ST段抬高超過0.1 mV，V1、V2導(dǎo)聯(lián)ST抬高超過0.2 mV，或合并完全性左束支傳導(dǎo)阻滯。排除標(biāo)準(zhǔn)：①入院前1個月內(nèi)手術(shù)或者出現(xiàn)感染性疾病者；②嚴(yán)重臟器功能衰竭，合并其他嚴(yán)重心臟疾病；③心源性休克或者既往PCI、冠狀動脈搭橋術(shù)史；④合并外周/腦血管出血性或栓塞性疾病者；⑤合并血液系統(tǒng)疾病、惡性腫瘤等；⑥2周內(nèi)應(yīng)用了血小板受體拮抗劑者；⑦對造影劑、抗凝劑過敏或存在抗凝禁忌。

1.2 檢測指標(biāo)與方法

1.2.1 標(biāo)本收集[7]研究組患者于PCI術(shù)前及術(shù)后4 h抽血，對照組于健康體檢時抽靜脈血，共6 ml。其中2 ml分離血清后保存待檢，用于進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)（PLT）、血小板體積分布寬度（PDW）、血小板平均體積（MPV）、血小板壓積（PCT）、肌鈣蛋白I（Tn-I）等檢測。另外4 ml放置在抗凝管中，利用枸櫞酸鈉（3.8%）進(jìn)行抗凝處理，血與抗凝劑的體積比控制在9∶1，室溫下500 r/min離心10 min后，采集上層富血小板血漿，并迅速和多聚甲醛（1%）固定；剩余血液以3000 r/min離心10 min后，獲取貧血小板血漿，用于調(diào)整富血小板血漿中的血小板數(shù)目，盡量將血小板數(shù)量控制在5×1011/L。本次研究獲取的標(biāo)本全部留置在EP管中，保存在4℃冰箱中待檢。

1.2.2 Tn-I測定[8]應(yīng)用化學(xué)發(fā)光免疫分析法，試劑盒從西門子醫(yī)學(xué)診斷產(chǎn)品（上海）有限公司購得。測定過程均嚴(yán)格按照試劑盒使用說明書進(jìn)行。

1.2.3 血小板相關(guān)參數(shù)測定 血小板相關(guān)參數(shù)使用SK9000全自動血細(xì)胞分析儀（深圳市盛信康科技有限公司）測定。分析前進(jìn)行參數(shù)設(shè)定，使用配套試劑進(jìn)行血小板參數(shù)檢測，分別為PLT、PDW、MPV、PCT。每日進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制，嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行，標(biāo)本采取抗凝靜脈血，同時于2 h內(nèi)完成相關(guān)測定工作，儀器自動分析結(jié)果。

1.2.4 CD40L測定[9]采用流式細(xì)胞技術(shù)，抗體為熒光標(biāo)記小鼠抗人CD40L抗體（Bender公司）。在研究組標(biāo)本100 μl血小板懸液中加入熒光標(biāo)記小鼠抗人 CD40L 抗體 20 μl，同時在對照組 100 μl血小板懸液中加入熒光標(biāo)記小鼠IgG1，于避光與室溫下溫育30 min，并進(jìn)行2次PBS洗滌，重懸細(xì)胞后對CD40L平均熒光強(qiáng)度（MFI）進(jìn)行測定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。計(jì)量資料用±s表示，行t檢驗(yàn)，并應(yīng)用Perrson相關(guān)分析法進(jìn)行相關(guān)性分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組各項(xiàng)指標(biāo)比較 研究組患者術(shù)前各項(xiàng)指標(biāo)與對照組患者入組時比較，CD40L平均熒光強(qiáng)度、Tn-I指標(biāo)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），PLT、MPV、PDW、PCT指標(biāo)比較未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。見表1。術(shù)后研究組患者血小板CD40L平均熒光強(qiáng)度、Tn-I、MPV及PDW均明顯高于對照組入組時，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而PLT、PCT未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。見表2。研究組術(shù)后與術(shù)前比較，患者血小板CD40L平均熒光強(qiáng)度、Tn-I、MPV及PDW明顯高于術(shù)前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而 PLT、PCT未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。見表 3。

表1 研究組患者術(shù)前與對照組入組時各項(xiàng)指標(biāo)比較（±s）

表1 研究組患者術(shù)前與對照組入組時各項(xiàng)指標(biāo)比較（±s）

注：CD40L：血小板表達(dá)細(xì)胞分化抗原40配體；Tn-I：肌鈣蛋白I；PLT：血小板計(jì)數(shù)；MPV：血小板平均體積；PDW：血小板體積分布寬度；PCT：血小板壓積

組別例數(shù)CD40L（MFI）Tn-I（μg/L）PLT（×109/L）MPV（fL）PDW（%）PCT（%）對照組 50 0.80±0.27 0.010±0.008 204.37±28.22 8.29±1.18 15.32±1.21 0.20±0.05研究組 63 4.82±0.26 12.750±1.820 211.91±29.15 8.45±1.13 17.34±1.73 0.21±0.03 t值 80.256 49.451 1.385 0.254 1.624 0.208 P值 <0.05 <0.05 >0.05 >0.05 >0.05 >0.05

表2 研究組患者術(shù)后與對照組入組時各項(xiàng)指標(biāo)比較（±s）

表2 研究組患者術(shù)后與對照組入組時各項(xiàng)指標(biāo)比較（±s）

注：CD40L：血小板表達(dá)細(xì)胞分化抗原40配體；Tn-I：肌鈣蛋白I；PLT：血小板計(jì)數(shù)；MPV：血小板平均體積；PDW：血小板體積分布寬度；PCT：血小板壓積

組別例數(shù)CD40L（MFI）Tn-I（μg/L）PLT（×109/L）MPV（fL）PDW（%）PCT（%）對照組 50 0.80±0.27 0.010±0.008 204.37±28.22 8.29±1.18 15.32±1.21 0.20±0.05研究組 63 8.97±0.73 18.740±2.650 226.39±27.24 11.43±2.17 22.05±1.82 0.23±0.08 t值 74.741 15.676 1.615 9.334 8.915 0.334 P值 <0.05 <0.05 >0.05 <0.05 <0.05 >0.05

表3 研究組患者術(shù)后與術(shù)前各項(xiàng)指標(biāo)比較（±s）

表3 研究組患者術(shù)后與術(shù)前各項(xiàng)指標(biāo)比較（±s）

注：CD40L：血小板表達(dá)細(xì)胞分化抗原40配體；Tn-I：肌鈣蛋白I；PLT：血小板計(jì)數(shù)；MPV：血小板平均體積；PDW：血小板體積分布寬度；PCT：血小板壓積

時間例數(shù)CD40L（MFI）Tn-I（μg/L）PLT（×109/L）MPV（fL）PDW（%）PCT（%）術(shù)前 63 4.82±0.26 12.750±1.820 211.91±29.15 8.45±1.13 17.34±1.73 0.21±0.03術(shù)后 63 8.97±0.73 18.740±2.650 226.39±27.24 11.43±2.17 22.05±1.82 0.23±0.08 t值 42.507 14.789 1.854 9.668 10.258 0.235 P值 <0.05 <0.05 >0.05 <0.05 <0.05 >0.05

2.2 指標(biāo)臨床相關(guān)性 急性ST段抬高型心肌梗死PCI術(shù)后血小板CD40L水平與MPV及PDW呈正相關(guān)（r值分別為 0.739、0.694，P<0.05）；而 CD40L與Tn-I、PLT、PCT之間無相關(guān)性（r值分別為0.201、0.176、0.048，P>0.05）。

3 討論

急性ST段抬高型心肌梗死屬于急性冠脈綜合征常見疾病。研究顯示，血小板在該病的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸中都起著十分重要的作用。當(dāng)動脈內(nèi)膜受損后使血小板在該處黏附進(jìn)而聚集，并且會釋放活性物質(zhì)，導(dǎo)致血小板進(jìn)一步聚集與血管收縮[10]，進(jìn)而引發(fā)單核細(xì)胞聚集在內(nèi)膜而發(fā)展成泡沫細(xì)胞，因此，急性心肌梗死患者血小板活化程度要明顯高于健康人。

本研究針對急性ST段抬高型心肌梗死PCI患者63例與健康體檢者50名進(jìn)行研究，兩組對象皆采取流式細(xì)胞技術(shù)對血小板CD40L進(jìn)行檢測（其中檢測時間研究組包括術(shù)前與術(shù)后，而對照組健康者則僅為入組時），同時利用Perrson相關(guān)分析法分析血小板CD40L及血小板指標(biāo)臨床相關(guān)性。結(jié)果顯示，研究組患者術(shù)后血小板CD40L平均熒光強(qiáng)度、肌鈣蛋白I、血小板平均體積及血小板體積分布寬度均明顯高于對照組入組時，組間對比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；同時急性心肌梗死PCI術(shù)后血小板CD40L水平與血小板體積及分布寬度呈正相關(guān)（P<0.05）。從結(jié)果分析，急性心肌梗死引發(fā)血小板數(shù)目減少卻反饋性激活聚合細(xì)胞，從而產(chǎn)生更多血小板。巨噬細(xì)胞新合成血小板體積很大，MPV可反映血小板的體積與大小，而血小板體積增大則屬于血小板活化的主要標(biāo)志。急性心肌梗死PCI術(shù)后血小板CD40L明顯升高，其裂解產(chǎn)生的sCD40L也明顯增多，可見血小板CD40L具有重要的病理生理功能[11]。有研究表明，PCI術(shù)后再狹窄與CD40/CD40配體（CD40L）呈正相關(guān)[12]。此外，急性ST段抬高型心肌梗死PCI術(shù)后血小板CD40L與PDW、MPV間呈正相關(guān)，主要由于血小板體積增大后血小板活性增強(qiáng)，含有更多致密顆粒，激活釋放出更多活性物質(zhì)。而血小板CD40L則屬于比較常見的一種，這類物質(zhì)又會誘發(fā)炎癥反應(yīng)，從而進(jìn)一步加重血管壁損害，導(dǎo)致更嚴(yán)重的事件。相關(guān)研究顯示，血小板質(zhì)量或者數(shù)量異常都會影響血栓彈力圖（TEG）的主要參數(shù)，正是因?yàn)檫@種特性使TEG能敏感、準(zhǔn)確地評估血小板活性，觀察血小板聚集功能以指導(dǎo)抗栓治療，但是TEG不能反映血小板本身變化及其與血管內(nèi)皮、炎癥因子的作用情況[13,14]。本研究提示，盡管PCI術(shù)前給予患者阿司匹林及硫酸氫氯吡格雷片負(fù)荷劑量口服抗血小板治療，但仍然不能逆轉(zhuǎn)血小板活性增強(qiáng)等一系列過程，因此，術(shù)后進(jìn)一步強(qiáng)化抗血小板治療更為重要。

綜上所述，急性ST段抬高型心肌梗死PCI患者的血小板形態(tài)改變屬于血小板活化的主要特點(diǎn)，而血小板指標(biāo)可能對血小板CD40L的表達(dá)產(chǎn)生影響，從而引發(fā)凝血及炎癥反應(yīng)，應(yīng)加強(qiáng)重視。

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Clinical correlation analysis of platelet CD40L and related indexes in acute ST-elevation myocardial infarction post-PCI

LI Xiang-xin＊，WANG Yan-fei，XIE Jun-min，et al.＊Cardiology Department，the Third Hospital of Baoding，Baoding 071000，China

WANG Yan-fei，E-mail：WYF52572@163.com

ObjectiveThis study was to discuss the clinical correlation of platelet CD40L and related indexes in acute ST-elevation myocardial infarction （STEMI）patients after percutaneous coronary intervention（PCI）.MethodsSixty-three patients with STEMI undergoing PCI from affiliated hospital of Hebei university in April 2013 to April 2014 were studied as research group and 50 healthy people as control.All subjects were using flow cytometry to test CD40L and test the count of platelet（PLT），platelet distribution width（PDW），mean platelet volume（MPV），platelet thrombocytocrit（PCT），troponin I（Tn-I）.Person correlation analysis was used to analyze the clinical association between the platelet CD40L and related indexes.All cases in research group were examined before and after PCI and only one time in control group.ResultsPlatelet CD40L and Tn-I significantly increased inresearch group before PCI when comparing control（P<0.05）.The platelet CD40L and Tn-I has same trend after PCI［（8.97±0.73）vs（0.80±0.27），（18.74±2.65）μg/L vs（0.010±0.008）μg/L， P<0.05].MPV and PDW were also higher than the control group（P<0.05）.However，there was no significance in PLT and PCT between groups.Within research group，CD40L，Tn-I，MPV and PDW were increasing obviously after PCI when comparing before.Person correlation analysis demonstrated a positive correlation between platelet CD40L and MPV，PDW（P<0.05）.ConclusionIn STEMI patients the platelet shape change belongs to the main characteristics of platelet activation，and platelet indexes may affect platelet CD40L expression and thus cause blood coagulation and inflammation.We should take an intensive attention.

Acute myocardial infarction； Percutaneous coronary intervention； Platelet CD40L；Platelet index；Clinical relevance

071000 河北省保定市，保定市第三醫(yī)院心內(nèi)科（李向欣）；河北大學(xué)附屬醫(yī)院心內(nèi)科（王艷飛、解俊敏、賈新未、王占啟、張芳）

王艷飛，E-mail：WYF52572@163.com

10．3969/j．issn．1672－5301．2015．02．015

R542.2+2

A

1672-5301（2015）02-0152－04

2014-10-25）