張海芳 石曉紅 王林和 張國(guó)盛 趙麗芹

摘要：研究以大腸桿菌（Escherichia coli）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、沙門(mén)氏菌（Salmonella）、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、巨大芽孢桿菌（Bacillus magaterium）、蠟狀芽孢桿菌（Bacillus magaterium）為指示菌，采用紙片法評(píng)估了臭柏（Sabina vulgaris Ant ）精油廢液對(duì)食品污染細(xì)菌的抑菌效果，結(jié)果表明，精油廢液對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門(mén)氏菌有抑制效果，且對(duì)大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的抑菌效果較好；水蒸氣蒸餾后的廢液比共水蒸餾后的廢液抑菌效果好。水蒸氣蒸餾的廢液隨著蒸餾次數(shù)的增加，所含的有效成分越多，抑菌效果越好。

關(guān)鍵詞：臭柏（Sabina vulgaris Ant ）精油廢液； 食品污染細(xì)菌； 抑菌效果

中圖分類(lèi)號(hào)：S482.2+92；TS207.4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2015）13-3157-02

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.13.022

Inhibition Effects of Sabina vulgaris Ant Essence Oil Extraction Liquid Waste against Food Pollution Bacteria

ZHANG Hai-fang1，SHI Xiao-hong2a，WANG Lin-he2b，ZHANG Guo-sheng2b，ZHAO Li-qin2a

（1.Material Engineering College，Inner Mongolia Chemical Engineering Professional College， Huhhot 010010，China；2. Inner Mongolia Agricultural University，a.College of Food Science and Engineering；b.College of Ecology and Environmental Science， Huhhot 010010，China）

Abstract： The paper method was used to evaluate the inhibition effects of Sabina vulgaris Ant essence oil extraction liquid waste against food pollution bacteria， taking Escherichia coli， Staphylococcus aureus， Salmonella， Bacillus subtilis， Bacillus magaterium and Bacillus magaterium as the indicator bacteria. The results indicated that Sabina vulgaris Ant essence oil extraction liquid waste had inhibition effects against E. coli， S. aureus and Salmonella， and the bacteriostatic effect of E. coli and Salmonella was better than S. aureus. The bacteriostatic effect of the water steam distillation wasted liqud was better than the wasted liquid after water distillation. With the increase time of steam distillation， the more steam distillation waste contain active ingredients， and it had the better antimicrobial effect.

Key words： Sabina vulgaris Ant essence oil extraction liquid waste； food pollution bacteria； bacteriostatic effect

臭柏（Sabina vulgaris Ant）又稱(chēng)沙地柏、叉子圓柏、新疆圓柏及爬地柏等，屬柏科圓柏屬常綠匍匐灌木。臭柏不僅具有生態(tài)作用，而且其枝、葉和種子等可以入藥，主治多種疾病[1]。臭柏是西北干旱、半干旱沙區(qū)的一種重要鄉(xiāng)土樹(shù)種，對(duì)該地區(qū)生態(tài)維護(hù)具有重要意義。該植物也是北方城市園林建設(shè)的一種新型綠化樹(shù)種。尤為重要的是，臭柏是中國(guó)首先發(fā)現(xiàn)并報(bào)道的一種優(yōu)秀殺蟲(chóng)植物，具有較大的開(kāi)發(fā)利用前景[2]。隨著生產(chǎn)技術(shù)的進(jìn)步和科技的發(fā)展，食品行業(yè)的生產(chǎn)過(guò)程越來(lái)越趨于純機(jī)械化流水線式生產(chǎn)。生產(chǎn)時(shí)的消毒環(huán)節(jié)需要更安全的消毒劑，而食品生產(chǎn)過(guò)程中使用的化學(xué)消毒劑一直被人們?cè)嵅?。因此，人們迫切需要找到一種綠色安全的消毒產(chǎn)品。臭柏精油是從臭柏中提取的一種天然植物精油，已有研究報(bào)道，其不僅具有殺蟲(chóng)活性[3，4]，而且抑菌效果顯著，對(duì)大部分致病菌有殺菌效果[5，6]?，F(xiàn)對(duì)臭柏提取精油后的廢液做抑菌研究，旨在探明其是否有抑菌效果以及其抑菌效力大小，以便為精油提取企業(yè)變廢為寶提供一新的增效途徑，為該廢液開(kāi)發(fā)食品消毒液提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 菌株

大腸桿菌（Escherichia coli）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、沙門(mén)氏菌（Salmonella）、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、巨大芽孢桿菌（Bacillus magaterium）、蠟狀芽孢桿菌（Bacillus magaterium），試驗(yàn)的所有指示菌均由內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室提供，主要的微生物種類(lèi)為致病細(xì)菌。

1.2 培養(yǎng)基

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：牛肉膏3 g，蛋白胨5 g，NaCl 5 g，去離子水1 000 mL，瓊脂15～20 g，調(diào)節(jié)pH至7.4～7.6，121 ℃蒸氣滅菌30 min。

液體培養(yǎng)基：在上述制備方法中， 不加入瓊脂。

1.3 臭柏精油廢液

試驗(yàn)用的臭柏精油廢液（簡(jiǎn)稱(chēng)“廢液”）分兩類(lèi)（均由內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)生態(tài)環(huán)境學(xué)院提供），分別為水蒸氣蒸餾后的蒸餾廢液和共水蒸餾后的水煮廢液。共水蒸餾是將植物粗粉加水浸泡后，直接加熱蒸餾出水和精油，冷卻后，分離出精油。水蒸氣蒸餾是將植物粉碎后置于蒸餾器中，通入水蒸餾，精油隨水蒸氣一起餾出。廢液用濾紙進(jìn)行除渣過(guò)濾，將各個(gè)蒸餾鍋編號(hào)，密封，4 ℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 菌懸液制備

將指示菌菌株從斜面上挑出，于液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)活化。24 h后，用移液槍移取200 μL菌懸液置于10 mL無(wú)菌生理鹽水或無(wú)菌水三角瓶中振蕩10 min，菌懸液約105 CFU/mL備用。

1.5 抑菌活性的測(cè)定

采用紙片擴(kuò)散法[7]。用打孔器將濾紙制成直徑為6 mm的小圓紙片，干熱滅菌后分別浸泡于裝有不同編號(hào)廢液溶液的試管中，對(duì)照浸泡于無(wú)菌生理鹽水中。將已滅菌并冷卻至50 ℃左右的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基倒入無(wú)菌平板，水平放置待凝固；將200 μL標(biāo)準(zhǔn)指示菌菌懸液加入上述平板中，用無(wú)菌三角涂布棒涂布均勻。然后在每個(gè)營(yíng)養(yǎng)平板中均勻、平鋪放入3片濾紙片，其中2片為浸有同一編號(hào)廢液溶液的，1片為浸有無(wú)菌生理鹽水的作對(duì)照。將上述貼好濾紙片的含菌平板放置于37 ℃培養(yǎng)箱，24 h后取出觀察并測(cè)量抑菌圈的大小。重復(fù)試驗(yàn)3次。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與處理采用游標(biāo)卡尺分別測(cè)量每一個(gè)抑菌圈兩個(gè)垂直方向的直徑大小，記錄各重復(fù)的平均值[8]。

2 結(jié)果與分析

2.1 臭柏精油廢液對(duì)指示菌的抑菌效果

從表1可以看出，通過(guò)共水蒸餾法和水蒸氣蒸餾法提取后的臭柏精油廢液對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌及沙門(mén)氏菌均有不同程度的抑制作用，但對(duì)枯草芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌及蠟狀芽孢桿菌無(wú)抑制作用。臭柏精油廢液對(duì)3種菌的抑制能力由大到小依次為：大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌，臭柏精油廢液對(duì)大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的抑菌圈直徑較大，即抑菌效果較好，對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌圈較小，即對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌效果較差。不同方法提取臭柏精油廢液的抑菌能力有所不同，共水蒸餾后的廢液比水蒸氣蒸餾后的廢液抑菌能力相對(duì)較弱。

2.2 不同方法提取臭柏精油的廢液對(duì)各種測(cè)試菌抑菌效果的影響

由于試驗(yàn)用臭柏精油廢液分兩大類(lèi)即共水蒸餾廢液和水蒸氣蒸餾廢液。水蒸氣蒸餾廢液是用同一鍋水，多次蒸餾物料，所得的廢液經(jīng)過(guò)不同次數(shù)的蒸餾后所含的有效成分量也不同，分別用每鍋次進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，所得結(jié)果見(jiàn)表2。從表2可以看出，采用水蒸氣蒸餾的廢液隨著蒸餾次數(shù)的增加，所含的有效成分越多，抑菌能力越好。而共水法提取精油較徹底，廢液中所含有效成分量也較少，所以抑菌力相對(duì)比較弱。

3 小結(jié)

臭柏精油廢液對(duì)大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的抑菌效果好，對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌效果較差，對(duì)枯草芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌及蠟狀芽孢桿菌無(wú)抑制作用。

不同方法提取臭柏精油后的廢液的抑菌能力有所不同，共水蒸餾后的廢液比水蒸氣蒸餾后的廢液抑菌能力弱。水蒸氣蒸餾的廢液隨著蒸餾次數(shù)的增加，所含的有效成分越多，抑菌效果越好。

參考文獻(xiàn)：

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