胡守蓮 邱棟樑

河南省信陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南信陽(yáng) 464000

HPLC法測(cè)定曲安奈德新霉素貼膏中醋酸曲安奈德的含量

胡守蓮 邱棟樑

河南省信陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南信陽(yáng) 464000

目的建立曲安奈德新霉素貼膏中醋酸曲安奈德含量的HPLC測(cè)定方法。方法采用反相高效液相色譜法，使用DIONEX Acclaim 120 C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱，以甲醇-水（60∶40）作為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)240nm，流速1.0mL/min，柱溫為30℃。結(jié)果醋酸曲安奈德在0.05～0.50μg范圍內(nèi)線性較好（r=0.9999）,平均回收率為98.09%（RSD為0.73%）。結(jié)論該方法快速、簡(jiǎn)便、可靠、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，處方中其他成分對(duì)測(cè)定亦無(wú)干擾，分離效果好，可用于曲安奈德新霉素貼膏中醋酸曲安奈德含量測(cè)定。

曲安奈德新霉素貼膏；醋酸曲安奈德；HPLC；含量測(cè)定

曲安奈德新霉素貼膏是由上海衛(wèi)生材料廠有限公司生產(chǎn)的復(fù)方制劑，其組份為醋酸曲安奈德、硫酸新霉素。用于局限性神經(jīng)性皮炎、慢性濕疹。也可用于小面積的銀屑病。還有文獻(xiàn)報(bào)道本品用于治療結(jié)節(jié)性癢疹[1]和蕁麻疹[2]安全有效。醋酸曲安奈德為腎上腺皮質(zhì)激素類藥，外用有抗炎、抗過(guò)敏及止癢作用，能消除局部非感染性炎癥引起的發(fā)熱、發(fā)紅及腫痛[3]。目前，曲安奈德新霉素貼膏在臨床上仍在廣泛使用，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載在國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)第十一冊(cè)中，無(wú)含量測(cè)定，為了完善藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本文采用高效液相色譜法進(jìn)行曲安奈德新霉素貼膏中醋酸曲安奈德含量的測(cè)定。

1 儀器與材料

1.1 儀器

高效液相色譜儀（戴安Ultimate 3000，DAD檢測(cè)器）；電子天平（普利賽斯 92SM-202A-DR）。

1.2 材料

醋酸曲安奈德對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100125-200404），曲安奈德新霉素貼膏（上海衛(wèi)生材料廠有限公司，批號(hào)：111103，120512 130714）。甲醇為色譜醇（SIGMA-ALDRICH，批號(hào)SHBC0053V），水為純化水，其他化學(xué)試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：DIONEX Acclaim 120 C18（250mm× 4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（60∶40），檢測(cè)波長(zhǎng)：240nm[4]，流速：1.0mL/min，柱溫：30℃，進(jìn)樣體積為10μL，理論板數(shù)不低于3000。

2.2 試驗(yàn)溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱定醋酸曲安奈德對(duì)照品12.5mg，置100mL容量瓶中，加甲醇適量振搖使溶解，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備溶液。精密量取對(duì)照品貯備溶液5mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液，備用。

2.2.2 供試品溶液制備[5-6]取本品約1.5片（39cm2），除去蓋襯，剪成小塊，精密稱定，置50mL燒杯中，加入石油醚（60～90℃）35mL，振搖，使膏體溶解，溶液轉(zhuǎn)移至另一燒杯中，容器及殘?jiān)允兔眩?0～90℃）洗滌三次（20mL、15mL、10mL），洗滌液并入上述溶液中，再用同體積的乙醇洗滌容器及殘?jiān)瑢⒁掖枷礈煲涸谶厰嚢柘戮従徏尤肷鲜龊喜⒌氖兔岩褐?，靜置，使沉淀完全，濾過(guò)，濾液置分液漏斗中，容器及沉淀以石油醚（60～90℃）-乙醇（1∶1）混合液洗滌3次（20mL、10mL、10mL），洗液并入分液漏斗中，加水20mL，振搖，靜置，取乙醇液，石油醚層用少量80%乙醇液洗滌3次，合并乙醇液，置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量，振搖使溶解，置25mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，備用。

2.2.3 陰性供試品溶液制備 取不含醋酸曲安奈德的空白制劑樣品，照2.2.2項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備，備用。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

分別吸取2.2項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，陰性供試品溶液，供試品溶液各10μL注入色譜儀并記錄色譜圖（如圖1），醋酸曲安奈德峰與其它峰分離完全，陰性供試品溶液在醋酸曲安奈德出峰位置無(wú)干擾。

圖1 HPLC色譜圖

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系 取2.2.1項(xiàng)下的對(duì)照品溶液分別進(jìn)2μL、5μL、10μL、15μL、20μL，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（如圖2），線性回歸方程為：y=26.544x+0.1067（r=0.9999）。表明醋酸曲安奈德在0.05～0.50μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖2 醋酸曲安奈德線性關(guān)系圖

2.4.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取樣品（批號(hào)：111103）,按2.2.2項(xiàng)下方法制備。分別放置0h、4h、8h、12h、16h后進(jìn)樣分析，記錄峰面積平均值為7.351（RSD為0.46%），表明待測(cè)成分在該溶液體系中16h內(nèi)穩(wěn)定。2.4.3 精密度試驗(yàn) 精密吸取2.2.1項(xiàng)下對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果測(cè)得醋酸曲安奈德峰面積的平均值為7.659（RSD為0.38%，n=6）。表明儀器精密度良好。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)（111103）的樣品5份，按2.2.2項(xiàng)下方法制備，測(cè)定含量，結(jié)果表明方法重復(fù)性較好。見表1。

表1 重復(fù)性試驗(yàn)

2.4.5 回收率試驗(yàn) 取本品（批號(hào)：111103）適量，共9份，約為0.75片（19.5cm2）的80%、100%、120%，精密稱定，精密加入2.2.1項(xiàng)下醋酸曲安奈德對(duì)照品貯備溶液2.5mL，按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定，計(jì)算回收率。測(cè)得醋酸曲安奈德平均加樣回收率（n=9）為98.09%，RSD=0.73%。結(jié)果表明，用高效液相色譜法測(cè)定醋酸曲安奈德含量準(zhǔn)確度高。見表2。2.4.6 樣品含量測(cè)定 按2.2.2項(xiàng)下方法制備，用0.45μm濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算含量。結(jié)果見表3。

表2 回收率實(shí)驗(yàn)（n=9）

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 提取溶劑選擇

用2.2.2項(xiàng)下的方法以石油醚（60～90℃）為溶劑溶解膏體與以氯仿為溶劑溶解膏體進(jìn)行比較，結(jié)果乙醇沉淀后，用氯仿為溶劑的樣品過(guò)濾后溶液不澄清，故選用石油醚（60～90℃）為溶劑溶解膏體。關(guān)于醋酸曲安奈德含量測(cè)定方法，目前文獻(xiàn)報(bào)道主要有高效液相色譜法[7-10]，紫外-可見分光光度法[11]，熒光分析法[12]。高效液相色譜法具有分離效能高、分析速度快、選擇性高和靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，是質(zhì)量控制中最為常用的一種分析方法。本研究建立的曲安奈德新霉素貼膏中醋酸曲安奈德含量測(cè)定方法，結(jié)果醋酸曲安奈德在（0.05～0.50）μg范圍內(nèi)線性較好（r=0.9999）,平均回收率為98.09%，表明該方法快速、簡(jiǎn)便、可靠、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，可用于曲安奈德新霉素貼膏中醋酸曲安奈德含量測(cè)定。為曲安奈德新霉素貼膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)一步完善提高提供依據(jù)。

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Determination of triamcinolone acetonide acetate in triamcinolone acetonide and neomycin paste by HPLC

HU Shoulian QIU Dongliang

Xinyang Provincial Institute of Food and Drug Control,Xinyang 464000,China

ObjectiveTo establish a method for content determination of triamcinolone acetonide acetate in triamcinolone acetonide and neomycin paste by HPLC.MethodsThe experimental condition of the RP-HPLC method was as follows：DIONEX Acclaim 120 C18（250mm×4.6mm，5μm）,with linear gradient elution using methanol and water（60∶40）,The detected wavelength was 240 nm,the flow rate was 1.0 ml/min,The column temperature was at 30℃.ResultsThe fluocinolone acetonide curve was linear in the range of 0.05～0.50μg（r=0.9999）.The average recovery rate was 98.09% withRSDof 0.73%.ConclusionThe method is simple,reliable,accurate and It could be used in the determination of triamcinolone acetonide acetate in triamcinolone acetonide and neomyc in paste

Triamcinolone acetonide and neomycin paste;Triamcinolone acetonide acetate;HPLC;Determination

R927.2

B

2095-0616（2015）05-48-03

2014-11-22）