胡珊 王永清

川崎病外周血淋巴細(xì)胞與T細(xì)胞亞群的相關(guān)性分析

胡珊 王永清

目的 探討川崎?。↘D）患兒外周血淋巴細(xì)胞與T細(xì)胞亞群的相關(guān)性，為川崎病免疫學(xué)機(jī)制研究提供參考。方法 47例KD患兒及對(duì)照組51例支氣管肺炎患兒，入院后同時(shí)采集外周血檢測(cè)淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、比例，以及T細(xì)胞亞群包括CD 3+、CD 4+、CD 8+、CD 4+/CD 8+及CD 56+CD 16+百分比。分別對(duì)各項(xiàng)結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果 川崎病組外周血淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及比例與CD 56+CD 16+均呈負(fù)相關(guān)（r=-0.42，P＜0.05；r=-0.39，P＜0.05）；川崎病組及對(duì)照組淋巴細(xì)胞比例與CD 3+及CD 4+呈正相關(guān)（r=0.38，P＜0.01，r=0.28，P＜0.05；r=0.51，P＜0.01，r=0.33，P＜0.05）。2組淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及比例與其他T細(xì)胞亞群（CD 8+及CD 4+/CD 8+）均無(wú)相關(guān)性。結(jié)論 外周血淋巴細(xì)胞與T細(xì)胞亞群的相關(guān)性結(jié)果提示T淋巴細(xì)胞參與川崎病急性期的免疫反應(yīng)機(jī)制，對(duì)川崎病發(fā)病機(jī)制研究可能有輔助意義。

川崎?。涣馨图?xì)胞；T細(xì)胞亞群

川崎?。╧awasaki disease，KD）是一種病因未明的好發(fā)于5歲以下兒童以全身血管炎為主要病變的急性發(fā)熱出疹性疾病，以免疫系統(tǒng)激活和血管內(nèi)皮系統(tǒng)廣泛損害為特征，已成為兒童后天性心臟病的重要因素之一[1]。由T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答機(jī)制，尤其表現(xiàn)在T淋巴細(xì)胞引起的特異性免疫紊亂現(xiàn)象，在KD發(fā)病機(jī)制研究中引起一定的關(guān)注。本研究對(duì)KD住院患兒外周血淋巴細(xì)胞與T細(xì)胞亞群的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析總結(jié)，以觀察KD患兒急性期免疫功能狀況。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取常州市第一人民醫(yī)院兒科于2004年1月～2012年12月確診KD的47例住院患兒臨床資料作為KD組，所有病例均符合美國(guó)心臟病協(xié)會(huì)2004年川崎病臨床診斷指南修訂的KD診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。其中男27例，女20例，男女比例為1.35∶1；年齡6個(gè)月～12歲，平均年齡（33.3±28.1）個(gè)月；住院時(shí)間9～21 d，平均（14.3±3.7）d。入院時(shí)冠狀動(dòng)脈病變（coronary artery lesion，CALs）發(fā)生率為15%（7/47）。選取同期51例支氣管肺炎住院患兒（排除支原體肺炎及呼吸道合胞病毒肺炎等）作為對(duì)照組，其中男27例，女24例，男女比例為1.17∶1；年齡2個(gè)月～7歲，平均年齡（30.4±21.3）個(gè)月；住院時(shí)間5～15 d，平均（7.4±2.3）d。2組患兒一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2 檢測(cè)方法 2組患兒入院后同時(shí)抽取外周血檢測(cè)淋巴細(xì)胞及T細(xì)胞亞群。采用流式與激光技術(shù)檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及百分比，儀器來(lái)源于日本Sysmex XE-2100型號(hào)檢測(cè)儀。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)T細(xì)胞亞群包括CD 3+、CD 4+、CD 8+、CD 4+/CD 8+及CD 56+CD 16+百分比，儀器來(lái)源于美國(guó)BD FACSCalibur型號(hào)檢測(cè)儀。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料用“x±s”表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。數(shù)據(jù)采用雙變量線性相關(guān)分析，分析結(jié)果以Pearson相關(guān)系數(shù)r表示，-1＜r＜0表示負(fù)相關(guān)，0＜r＜1表示正相關(guān)。線性趨勢(shì)采用散點(diǎn)圖表示。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2組患兒淋巴細(xì)胞及T細(xì)胞亞群比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表1。KD組外周血淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及比例與CD 56+CD 16+均呈負(fù)相關(guān)（r=-0.42，P＜0.05；r=-0.39，P＜0.05），線性趨勢(shì)散點(diǎn)圖呈近似負(fù)相關(guān)。KD組及對(duì)照組淋巴細(xì)胞比例與CD 3+（r=0.38，P＜0.01；r=0.28，P＜0.05）及CD 4+（r=0.51，P＜0.01；r=0.33，P＜0.05）呈正相關(guān)，線性趨勢(shì)散點(diǎn)圖呈近似正相關(guān)。2組淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及比例與其他T細(xì)胞亞群（CD 8+及CD 4+/CD 8+）均無(wú)相關(guān)性。見(jiàn)表2、表3。線性趨勢(shì)見(jiàn)散點(diǎn)圖（圖1～6）。

3 討論

近年來(lái)KD發(fā)病率呈逐年增長(zhǎng)趨勢(shì)，但其發(fā)病機(jī)制尚未完全明確[3]，大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為T(mén)淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答及炎性細(xì)胞因子的級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)引起全身血管炎性損傷，導(dǎo)致急性期、恢復(fù)期甚至更久血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷及功能障礙，是引起KD免疫機(jī)制的重要因素；常常由一種或多種廣泛分布的感染源侵犯易感人群而引起[4]。

本研究對(duì)47例KD患兒及51例肺炎患兒數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，2組淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、比例以及T細(xì)胞亞群數(shù)據(jù)比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。且肺炎組已排除相關(guān)免疫因素參與的病原菌病例，提示在KD急性期，相較于紅細(xì)胞沉降率、CRP等炎性指標(biāo)的異常，T細(xì)胞亞群在發(fā)病早期的變化尚不明顯；說(shuō)明在KD急性期或發(fā)病早期，其免疫紊亂狀態(tài)體現(xiàn)的并不顯著。也有學(xué)者通過(guò)分析KD早期T細(xì)胞亞群等在ROC曲線下特征，發(fā)現(xiàn)其各指標(biāo)的診斷特異度及敏感度均偏低，故認(rèn)為T(mén)細(xì)胞亞群尚不能作為KD的早期診斷指標(biāo)[5]。

表1 2組患兒淋巴細(xì)胞及T細(xì)胞亞群比較（x±s）

表2 川崎病組淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及比例與T細(xì)胞亞群相關(guān)性分析結(jié)果

表3 對(duì)照組淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及比例與T細(xì)胞亞群相關(guān)性分析結(jié)果

圖1 川崎病組

圖4 川崎病組

圖2 川崎病組

圖5 對(duì)照組

圖3 川崎病組

圖6 對(duì)照組

3.1 淋巴細(xì)胞與CD 56+CD 16+本研究結(jié)果顯示，KD組外周血淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及比例與CD 56+CD 16+均呈負(fù)相關(guān)（r= -0.42，P＜0.05；r=-0.39，P＜0.05），線性趨勢(shì)散點(diǎn)圖呈近似負(fù)相關(guān)；肺炎組統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示均無(wú)相關(guān)性。CD 56+CD 16+主要表達(dá)于NK細(xì)胞表面，這種負(fù)相關(guān)性提示KD急性期外周血淋巴細(xì)胞越高，NK細(xì)胞表達(dá)水平反而降低，與部分文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果相一

致[6-7]。

KD急性期NK細(xì)胞水平的變化與其參與急性期免疫機(jī)制有關(guān)。Charles等[8]發(fā)現(xiàn)KD急性期，在損傷動(dòng)脈壁可見(jiàn)大量NK細(xì)胞和單核/吞噬細(xì)胞的聚集和浸潤(rùn)，可進(jìn)一步推斷外周血NK細(xì)胞表達(dá)水平的降低與其參與KD急性期免疫反應(yīng)的消耗增加有關(guān)。另一方面，有研究顯示[9]，KD急性期外周血CD 16+NK細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)明顯降低，但NK細(xì)胞在外周血中的變化是否為KD發(fā)病機(jī)制中的主要因素尚未明確。

3.2 淋巴細(xì)胞與CD 3+及CD 4+本研究結(jié)果顯示，KD組及肺炎組淋巴細(xì)胞比例與CD 3+（r=0.38，P＜0.01；r=0.28，P＜0.05）及CD 4+（r=0.51，P＜0.01；r=0.33，P＜0.05）呈正相關(guān)，線性趨勢(shì)散點(diǎn)圖呈近似正相關(guān)。2組淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及比例與其他T細(xì)胞亞群（CD 8+及CD 4+/CD 8+）均無(wú)相關(guān)性。

一方面，提示可從KD患兒外周血淋巴細(xì)胞比例粗略推斷T細(xì)胞亞群CD 3+及CD 4+的變化趨勢(shì)。這種正相關(guān)性現(xiàn)象說(shuō)明，外周血淋巴細(xì)胞比例越高，KD急性期由CD 4+T細(xì)胞分化而來(lái)的Th 1/Th 2細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)水平亦相應(yīng)升高[10]。故從T淋巴細(xì)胞比例的失調(diào)及表達(dá)功能的異常，可間接反映出KD急性期存在細(xì)胞免疫功能的紊亂。本組病例未進(jìn)行T淋巴細(xì)胞活化的相關(guān)檢測(cè)，但在KD急性期T淋巴細(xì)胞所體現(xiàn)的正相關(guān)性，以及細(xì)胞因子的級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)，提示KD患兒在免疫紊亂過(guò)程中，可能同時(shí)伴有部分炎性介質(zhì)的參與。

另一方面，淋巴細(xì)胞比例的高低與其他細(xì)胞系統(tǒng)變化有關(guān)，本研究結(jié)果顯示僅有淋巴細(xì)胞比例存在一定正相關(guān)性，其他細(xì)胞系統(tǒng)的失調(diào)可能同時(shí)參與KD免疫系統(tǒng)紊亂過(guò)程，尤其是單核/巨噬細(xì)胞系統(tǒng)[11-12]及中性粒細(xì)胞[13]的改變。

研究結(jié)果顯示，KD急性期中性粒細(xì)胞的的變化與IVIG對(duì)KD的療效以及并發(fā)CALs密切相關(guān)[14-15]。并且，作為預(yù)測(cè)IVIG無(wú)反應(yīng)性及并發(fā)CALs高危因素的重要評(píng)分系統(tǒng)之一——小林評(píng)分[16]，其中即包含一項(xiàng)：中性粒細(xì)胞比例≥0.80（2分），說(shuō)明中性粒細(xì)胞比例越高，可能更易發(fā)生IVIG無(wú)反應(yīng)性及CALs。結(jié)合本文相關(guān)性分析結(jié)果，若淋巴細(xì)胞比例越高，中性粒細(xì)胞比例越低，則NK細(xì)胞表達(dá)水平越低，且CD 3+及CD 4+表達(dá)越高。故可以推斷，從KD急性期外周血淋巴細(xì)胞比例可粗略估計(jì)患兒免疫功能紊亂程度，為KD急性期治療提供部分參考（如IVIG使用劑量或是否加用激素等），但尚不能憑單一指標(biāo)來(lái)制定合適方案。

3.3 T細(xì)胞亞群與KD免疫機(jī)制分析 T細(xì)胞亞群作為反映機(jī)體細(xì)胞免疫功能的一項(xiàng)重要指標(biāo)，在KD患兒免疫機(jī)制的研究較為廣泛，本研究結(jié)果顯示，外周淋巴細(xì)胞與T細(xì)胞亞群CD 56+CD 16+以及CD 3+、CD 4+存在一定的相關(guān)性分析，從而可粗略估計(jì)KD患兒免疫功能紊亂狀態(tài)，為臨床實(shí)踐提供部分參考。有學(xué)者[17]認(rèn)為KD患兒急性期外周血CD 3+及CD 8+百分比明顯下降，CD 4+百分比、CD 4+/CD 8+、血清IL-2及sIL-2 R水平明顯升高，提示川崎病患兒急性期存在細(xì)胞免疫功能及免疫調(diào)節(jié)功能紊亂。Hirabayashi等[18]發(fā)現(xiàn)，且缺乏CD 4+CD 25+FOXP 3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的KD患兒更易發(fā)展為IVIG-無(wú)反應(yīng)型，提示調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在KD免疫機(jī)制及預(yù)后轉(zhuǎn)歸中仍有重要作用。故作為KD免疫機(jī)制的重要環(huán)節(jié)，由T淋巴細(xì)胞引起的免疫調(diào)節(jié)功能損傷仍需更為廣泛的研究成果以完善補(bǔ)充。

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Objective To investigate the correlations between lymphocytes and T-cell subsets in blood for Kawasaki disease (KD) in children, providing some references for immunological mechanisms of KD. Methods A total of 47 children with KD and 51 children of bronchopneumonia as the control group were observed with lymphocytes and T-cell subsets of blood at the same time, which including CD 3+, CD 4+, CD 8+, CD 4+/ CD 8+and CD 56+CD 16+. All the results were tested by correlation analysis respectively. Results We found the negative correlation between the count and the ration of lymphocyte and CD 56+CD 16+(r=-0.369, P＜0.05；r=-0.316, P＜0.05) in KD group. There was positive correlation between the ration of lymphocyte in both the two groups and CD 3+(r=0.384, P＜0.01；r=0.283, P＜0.05) and CD 4+(r=0.511, P＜0.01；r=0.326, P＜0.05). There was no significant difference in other test dates in correlation analysis between two groups. Conclusion The results of correlation analysis between lymphocytes and T-cell subsets in blood, indicated that T lymphocytes participant in the immunological mechanisms in acute KD, which maybe helpful for the pathogenesis research of Kawasaki disease in children.

Kawasaki disease；Lymphocytes；T-cell subsets

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.29.001

江蘇 213000 蘇州大學(xué)附屬第三醫(yī)院常州市第一人民醫(yī)院兒科（胡珊 王永清）

胡珊 E-mail:hushan 2011@163.com