韋慶華　周玉珍　婁曉鳴等

摘要：以朱頂紅蘇紅的母株小鱗莖為外植體，通過在培養(yǎng)基中添加不同濃度組合的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)與抗褐化、污染的紫薯提取液、甲基紫提高增殖系數(shù)、降低褐化與污染。結(jié)果表明：在MS+6-BA 2.0 mg/L、NAA 0.01 mg/L+0.01 g/L 甲基紫培養(yǎng)基中，增殖系數(shù)最高，可達(dá)11.4，并能有效控制真菌污染和褐化。在繼代培養(yǎng)1～13代時(shí)，增殖系數(shù)基本保持在9～11，繼代14次以后增殖系數(shù)明顯降低。

關(guān)鍵詞：朱頂紅蘇紅；離體增殖技術(shù)；甲基紫；褐化現(xiàn)象；增殖系數(shù)；外植體；生長(zhǎng)調(diào)節(jié)；真菌污染；繼代培養(yǎng)

中圖分類號(hào)： S682.2+50.4+3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2015）03-0036-02

朱頂紅為石蒜科朱頂紅屬多年生鱗莖類草本植物，近幾年作為高檔盆栽花卉品種的種球都從國(guó)外引進(jìn)[1]，我國(guó)缺少自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的品種與配套的規(guī)?；x體繁殖技術(shù)。蘇州農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院長(zhǎng)期從事朱頂紅品種資源引進(jìn)與選育研究，近年從雜交后代中篩選出一批優(yōu)良單株，通過分生擴(kuò)繁形成株系，有些品系通過了江蘇省農(nóng)作物品種審定委員會(huì)的鑒定，其中朱頂紅新品種蘇紅（Hippeastrum hybridumcv.Suhong）以其花大色艷且重瓣而深受市場(chǎng)青睞，因此離體快繁技術(shù)成為該新品種種球生產(chǎn)的關(guān)鍵技術(shù)。本試驗(yàn)通過對(duì)朱頂紅新品種蘇紅離體增殖技術(shù)研究，為朱頂紅種球的大量繁殖提供技術(shù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

外植體材料取自朱頂紅新品種蘇紅種球，該品種花色草莓紅（RAL3018）和純白色（RAL9010）相間，重瓣，花瓣18～20瓣，冠徑18 cm，小花數(shù)4朵，株高32 cm，花期4—5月。試驗(yàn)在蘇州農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院相城科技園組培室內(nèi)進(jìn)行。

1.2 方法

1.2.1 初代培養(yǎng)

春季取母球側(cè)邊新長(zhǎng)出的小籽球，洗凈，剝除外層的鱗片，保留1～2張長(zhǎng)約2 cm的嫩葉，用洗衣粉將鱗莖清洗干凈后，在流水下沖洗1 h，用濾紙吸干表面水分后進(jìn)行初代消毒處理，在超凈工作臺(tái)上用75%乙醇浸泡30 s，倒出乙醇，再倒入0.1%氯化汞浸泡12 min，用無菌水清洗5次，將小籽球的鱗莖橫切成帶鱗莖盤的0.5 cm小塊接入初代培養(yǎng)基MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L中，在培養(yǎng)室中培養(yǎng)[2]，平均50 d轉(zhuǎn)接1次，經(jīng)3次同一培養(yǎng)基轉(zhuǎn)接培養(yǎng)，球徑長(zhǎng)至0.4～0.5 cm時(shí)轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為：溫度（25±1） ℃，光照12 h/d，光照度3 000 lx 左右。

1.2.2 繼代（增殖）培養(yǎng)

將初代培養(yǎng)的小球莖轉(zhuǎn)入添加不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物濃度的增殖培養(yǎng)基（MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L、MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.01mg/L、MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L、MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L）中，將初代培養(yǎng)的種球按四分法切割，每小切塊帶有部分鱗莖盤，50 d后對(duì)增殖系數(shù)與發(fā)生根數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。每瓶增殖系數(shù)=增殖后球莖發(fā)生數(shù)量/接種數(shù)，每處理統(tǒng)計(jì)10瓶，用于數(shù)據(jù)分析。

1.2.3 紫薯提取液制作與甲基紫添加方法

紫薯提取液制作方法參考Lu等的方法[3]并進(jìn)行改良。稱取250 g紫薯+750 g純凈水，先將稱好的紫薯微波爐煮熟，紫薯和純凈水混合煮沸10 min，將紫薯碾碎后與同煮的水混合，用80目篩過濾混合液，得過濾液400 mL。紫薯液添加量分別為0、50、150、200 mL/L，加入增殖培養(yǎng)基中備用，用增殖培養(yǎng)基添加0.01 g/L甲基紫作為對(duì)照，每處理50瓶，轉(zhuǎn)接30 d后對(duì)培養(yǎng)瓶苗的污染與褐化率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，50 d后統(tǒng)計(jì)增殖生長(zhǎng)情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)鱗莖增殖的影響

把鱗莖切割小塊轉(zhuǎn)接在添加不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，結(jié)果見表1。表1顯示，增殖培養(yǎng)基MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L、MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L、MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L中培養(yǎng)的鱗莖增殖系數(shù)差異不顯著（P>0.05），其中培養(yǎng)基MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L中鱗莖的增殖系數(shù)最高，為11.0，但根數(shù)最少，為0.2條，根系細(xì)弱；培養(yǎng)基MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L中的增殖系數(shù)最低，為3.8，而平均根條數(shù)最多，為4.9條，且根系粗壯，與MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L、MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 001 mg/L、MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L增殖培養(yǎng)基中鱗莖增殖系數(shù)差異顯著。由此可以看出，初代培養(yǎng)基 MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L已不適宜繼續(xù)用于增殖培養(yǎng)中。

在培養(yǎng)基MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L、MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L中的細(xì)胞分裂素6-BA的濃度相同，提高生長(zhǎng)素NAA的濃度則不利于增殖系數(shù)的提高，即在增殖培養(yǎng)中產(chǎn)生的根系越少，鱗莖的增殖系數(shù)越高，NAA應(yīng)該控制在0.01 mg/L。增殖培養(yǎng)基MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L、MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 001 mg/L中培養(yǎng)的鱗莖增殖系數(shù)和根數(shù)差異不顯著（P>005），可見細(xì)胞分裂素6-BA濃度的提高并不利于鱗莖的增殖，還出現(xiàn)了小球的玻璃化現(xiàn)象，因此增殖培養(yǎng)的最佳配方為MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L。

2.2 紫薯提取液、甲基紫對(duì)增殖培養(yǎng)的影響