王世月

摘 要：禽流感是指由于禽流感病毒導(dǎo)致人與動(dòng)物共患的一種急性傳染病，主要發(fā)生在雞、鴨等禽類中，嚴(yán)重時(shí)臨床癥狀表現(xiàn)為全身敗血癥等。根據(jù)禽流感病原體的不同，可分為非致病性、低致病性和高致病性3種類型，其中高致病禽流感發(fā)病急、傳播速度快、死亡率高，被世界衛(wèi)生組織列為A類動(dòng)物疫病。該文通過對(duì)高致病禽流感抗體檢測(cè)過程中存在的問題進(jìn)行探討和分析，提出了有利于改善抗體檢測(cè)的措施，為有效防控高致病禽流感提供參考。

關(guān)鍵詞：高致病禽流感；抗體檢測(cè)；問題；措施

中圖分類號(hào) S858.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2015）03-04-120-02

禽流感是由于A型流感病毒而導(dǎo)致家禽及野禽出現(xiàn)病癥的一種傳染病，而高致病性禽流感則是由于A型禽流行性感冒病毒而引起的一種傳染病[1]。禽類在感染了禽流感病毒后的癥狀主要表現(xiàn)為以下2種：一是呼吸道及消化道癥狀不太嚴(yán)重，死亡率也較低；另一種則極為嚴(yán)重，表現(xiàn)為出現(xiàn)全身性、敗血性癥狀，該病傳播速度快，嚴(yán)重時(shí)死亡率高達(dá)100%，而且可以直接傳染人類，致人死亡，給生產(chǎn)造成極大損失和嚴(yán)重危害公共安全。目前，最為有效的防治措施是注射禽流感疫苗，使易感動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生保護(hù)性抗體。近年來，通過對(duì)高致病性禽流感H5疫苗注射后進(jìn)行抽樣檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，多數(shù)養(yǎng)殖場(chǎng)免疫后抗體檢測(cè)合格率普遍偏低。在此背景下，通過對(duì)高致病禽流感抗體檢測(cè)存在的問題進(jìn)行分析并制定預(yù)防措施，對(duì)于防控高致病禽流感有著重要意義。

1 實(shí)驗(yàn)安排

養(yǎng)殖條件和養(yǎng)殖量基本相同，試驗(yàn)場(chǎng)地設(shè)在廣德縣張某、楊某2個(gè)肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)，由同一防疫隊(duì)分別進(jìn)行高致病禽流感H5N1滅活苗免疫，其中對(duì)張某養(yǎng)殖場(chǎng)的免疫注射現(xiàn)場(chǎng)安排一個(gè)村級(jí)防疫員進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)。免疫時(shí)間為2012年3月26日，于免疫后21d、25d、30d分別對(duì)2個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)肉雞群的抗體水平進(jìn)行抽樣檢測(cè)。

2 試驗(yàn)方法

抗體檢測(cè)方法采用血凝和血凝抑制實(shí)驗(yàn)，具體步驟如下：⑴測(cè)定抗原效價(jià)：在96孔V形微量反應(yīng)板的1～12孔均加入25μL生理鹽水；吸取25μL標(biāo)準(zhǔn)抗原或病毒液加入第1孔，混勻；從第1孔吸取25μL液體加入第2孔，混勻后吸取25μL加入第3孔，如此進(jìn)行對(duì)倍稀釋至第12孔，從第12孔吸取25μL棄之，換滴頭；每孔再加入25μL生理鹽水；將體積1%的雞紅細(xì)胞懸液充分搖勻后，每孔均加入25μL雞紅細(xì)胞懸液；微量振蕩器上振蕩混勻，室溫（20～25℃）靜置30min后觀察結(jié)果。對(duì)照孔細(xì)胞將成明顯的鈕扣狀沉到孔底；將板傾斜，觀察紅細(xì)胞有無呈淚滴狀流淌。判定抗原效價(jià)，配制四單位病毒抗原液。（2）測(cè)定血清抗體效價(jià)：在微量反應(yīng)板的1～11孔加入25μL生理鹽水，第12孔加入50μL生理鹽水；吸取25μL血清加入第1孔，充分混勻后吸25μL于第2孔依次倍比稀釋至第10孔，從第10孔吸取25μL棄去；1～11孔均加入含4HAU混勻的病毒抗原液25μL，微量振蕩，室溫靜置至少30min每孔加入25μL1%的雞紅細(xì)胞懸液混勻，微量振蕩30s，室溫靜置約30min觀察結(jié)果，紅細(xì)胞對(duì)照孔成明顯的紐扣狀沉到孔底時(shí)即可判定結(jié)果。

3 試驗(yàn)結(jié)果

由表1可以看出：在免疫后21d時(shí)2個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)的抗體檢測(cè)合格率分別為0和50%，25d時(shí)抗體檢測(cè)合格率分別為30%、70%；30d時(shí)抗體檢測(cè)合格率分別為50%、80%，張某養(yǎng)殖場(chǎng)的合格率一直高于楊某的養(yǎng)殖場(chǎng)。通過20/1000的抽樣檢測(cè)，按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，抗體檢測(cè)結(jié)果合格率在70%以上視為免疫合格，可知楊某養(yǎng)殖場(chǎng)免疫失敗，張某的免疫基本符合要求。

表1 不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)2組抗體的檢測(cè)結(jié)果

[抗體檢測(cè)時(shí)間（d）＼&組別＼&抗體檢測(cè)合格率（%）＼&21＼&楊某＼&0＼&張某＼&50＼&25＼&楊某＼&30＼&張某＼&70＼&30＼&楊某＼&50＼&張某＼&80＼&]

4 分析與討論

通過上述實(shí)例結(jié)果可以反映出在肉雞免疫的過程中存在著多方面的問題[2]，從而造成檢測(cè)結(jié)果不好，免疫失敗。筆者現(xiàn)結(jié)合日常工作出現(xiàn)的問題作如下分析：

4.1 高致病禽流感的流行特點(diǎn)及防控現(xiàn)狀 禽流感病毒的宿主多樣，不僅對(duì)家禽、野禽等禽類具有感染力，而且對(duì)豬、馬、人也有感染的可能，尤其是高致病性禽流感可以感染人類并造成死亡。目前對(duì)該病的主要防控措施是人為的給易感動(dòng)物進(jìn)行免疫接種使機(jī)體產(chǎn)生抗體，而群體的抗體水平直接影響到免疫接種的效果，與疾病防治的效果有著密不可分的關(guān)系。國(guó)內(nèi)外對(duì)禽流感抗體進(jìn)行監(jiān)測(cè)的技術(shù)多種多樣，主要包括血凝和血凝抑制試驗(yàn)、瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)以及RT-PCR等等，其中最為常用的為血凝和血凝抑制試驗(yàn)。然而，近來的報(bào)道表明，該病主要易感動(dòng)物禽類的免疫接種療效并未取得較好的效果。根據(jù)農(nóng)業(yè)部2007年制定的《高致病性禽流感防治技術(shù)規(guī)范》中規(guī)定的禽血凝抑制（Hl）試驗(yàn)方法，對(duì)免疫后21～120d的禽群進(jìn)行禽流感免疫抗體檢測(cè)，抗體效價(jià)≥4log2為免疫合格，存欄禽群免疫抗體合格率在70%以上為群體免疫合格。然而在日常的抗體監(jiān)測(cè)中發(fā)現(xiàn)，有部分禽群在免疫21d后，抗體水平仍達(dá)不到合格水平；不同種類、不同日齡的禽群免疫抗體水平也參差不齊。

4.2 抗體檢測(cè)合格率低的原因

4.2.1 防疫員和技術(shù)因素 從以上2組抗體檢測(cè)結(jié)果可以看出，張某養(yǎng)殖場(chǎng)的抗體檢測(cè)合格率明顯高于楊某，其主要原因可能是由于張某養(yǎng)殖場(chǎng)免疫時(shí)有防疫員在現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)督。這也反應(yīng)了目前抗體檢測(cè)合格率低的主要原因可能是在進(jìn)行防疫的過程中技術(shù)不夠規(guī)范，出現(xiàn)漏防、少防。在對(duì)這些家禽進(jìn)行高致病禽流感的防疫過程中，可能會(huì)由于防疫人員工作的不仔細(xì)而導(dǎo)致一些免疫動(dòng)物疏漏和注射劑量不足，從而導(dǎo)致在對(duì)家禽進(jìn)行抽樣檢測(cè)時(shí)得到的檢測(cè)結(jié)果不令人滿意。

4.2.2 時(shí)間因素 本次實(shí)驗(yàn)在21d、25d和30d時(shí)的抽樣檢測(cè)結(jié)果顯示，隨著時(shí)間的增加，抗體檢測(cè)合格率也在逐漸上升，這就說明了抗體檢測(cè)合格率低的另外一個(gè)主要原因可能是目前多數(shù)抗體檢測(cè)都是在免疫后21d的進(jìn)行有關(guān)。在實(shí)際工作中，大量事實(shí)證明肉雞首次免疫H5N121d采樣抗體結(jié)果極少能達(dá)到70%的合格率。

4.2.3 疫苗質(zhì)量 疫苗質(zhì)量是影響免疫效果的主要原因之一。如果防疫隊(duì)的防疫人員在使用前沒有對(duì)疫苗進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量檢查，忽略了疫苗中存在的質(zhì)量問題，從而可能導(dǎo)致家禽的檢測(cè)結(jié)果不合格。

4.3 提高抗體檢測(cè)水平的措施 根據(jù)檢測(cè)結(jié)果對(duì)高致病禽流感抗體檢測(cè)過程中存在的問題進(jìn)行分析，為了有效的提高抗體檢測(cè)的水平以及降低高致病禽流感的發(fā)病率，筆者有針對(duì)性地制定了如下措施[3]：一是加強(qiáng)對(duì)各個(gè)動(dòng)物防疫隊(duì)的監(jiān)督管理，嚴(yán)格控制因防疫隊(duì)員操作造成的漏免、注射劑量不足等造成的免疫失?。欢前押盟璧囊呙缳|(zhì)量關(guān)。在進(jìn)行防疫前，防疫人員一定要對(duì)疫苗的質(zhì)量進(jìn)行嚴(yán)格的檢查，避免使用出現(xiàn)破損、顏色改變、有無沉淀、有效期等，同時(shí)在進(jìn)行使用前要對(duì)疫苗進(jìn)行預(yù)溫，以利于減少在防疫過程中動(dòng)物的應(yīng)激反應(yīng)，從而有效的保證抗體檢測(cè)的水平；三是規(guī)范疫苗操作技術(shù)。在進(jìn)行疫苗的注射前，檢測(cè)人員一定要對(duì)注射器、針頭等器具進(jìn)行消毒，同時(shí)要保證疫苗的注射劑量符合規(guī)定以及注射的部位準(zhǔn)確，避免因疫苗的技術(shù)操作不規(guī)范而對(duì)抗體檢測(cè)的水平造成影響；四是檢測(cè)人員要認(rèn)真做好抗體檢測(cè)和疫病監(jiān)測(cè)工作。檢測(cè)人員對(duì)來樣要及時(shí)檢測(cè)，做到認(rèn)真細(xì)致，檢測(cè)報(bào)告準(zhǔn)時(shí)送達(dá)到養(yǎng)殖戶手中，對(duì)于免疫不合格的家禽要及時(shí)通知做好的補(bǔ)防工作，從而提高抗體水平，有效控制疫病的發(fā)生。

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