蘇文晶

(泉州市森林病蟲防治檢疫站，福建 泉州362000)

綠僵菌［Metarhizium (Metsch.)Sorokin］是蟲生真菌的重要類群之一，寄主范圍廣，能寄生8 個目30個科約200 種昆蟲、螨類及線蟲［1］。綠僵菌致病力強、效果好，對人、畜、作物無毒害，是蟲生真菌研究領域的主要對象之一［2］。從防治規(guī)?？?，綠僵菌已發(fā)展成為僅次于白僵菌的真菌殺蟲劑［3］。相關研究表明，蟲生真菌菌落形態(tài)、產(chǎn)孢量和胞外蛋白酶等均與菌株的毒力相關［4－9］;不同白僵菌菌株生物學特性［10］以及對靶標害蟲的致病力［11－12］都存在一定差異。不同綠僵菌菌株生物學特性與對靶標害蟲的致病力也存在差異。高效菌株的篩選是利用蟲生真菌生物防治農(nóng)林害蟲的基礎工作［13］，因此，本研究比較了15 株不同來源的金龜子綠僵菌菌落形態(tài)、生長速度和產(chǎn)孢量等生物學特性，以期篩選出具有優(yōu)良生產(chǎn)性狀的菌株，為綠僵菌優(yōu)良菌株的生產(chǎn)和應用提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

供試的15 株金龜子綠僵菌(M.anisopliae)菌株由福建省林業(yè)科學研究院森林保護研究所提供，其寄主及原始采集地見表1。

表1 金龜子綠僵菌的寄主及原始采集地Table 1 The hosts and original localities of the tested strains of M.anisopliae

1.2 培養(yǎng)基

PDA 培養(yǎng)基，配方為:200 g 馬鈴薯+30 g 葡萄糖+20 g 瓊脂+1 000 mL 水。

1.3 生物學特性研究

1.3.1 菌落形態(tài)及生長性狀 將滅菌的PDA 培養(yǎng)基冷卻至45 －50 ℃，取10 mL 置于直徑9 cm 的培養(yǎng)皿中，冷卻后備用。在無菌條件下，將供試菌株點接于PDA 培養(yǎng)基的平皿中，每菌株3 個重復，恒溫(25 ±1)℃培養(yǎng)。每天觀察菌落的生長，包括色澤、形態(tài)和產(chǎn)孢量等情況。分別在培養(yǎng)第5、10 和15 天采用十字交叉法測量菌落生長直徑，記錄菌落特征。

1.3.2 產(chǎn)孢量 取上述培養(yǎng)好的平板，用打孔器在菌落中心至邊緣中點部位打取菌塊，每個平板按120°間隔打取3 個孔。將打取的菌塊置于0.05%吐溫-80 無菌水溶液中，經(jīng)磁力攪拌器攪拌10 min，適當稀釋后置顯微鏡下用血球計數(shù)板計數(shù)，折算成單位面積的產(chǎn)孢量。每個菌株測定3 個平板。

2 結果與分析

2.1 菌落形態(tài)及分類

供試的15 個金龜子綠僵菌在PDA 培養(yǎng)基上培養(yǎng)15 d 的菌落形態(tài)見圖1。從圖1 可以看出，各菌落形態(tài)差異顯著。根據(jù)菌落特征、產(chǎn)孢特征和孢子顏色將15 株綠僵菌菌株分為6 類(表2)。由表2 可見，各菌株菌落均由中心逐漸向外均勻增長，孢子大部分呈明顯或不明顯的同心輪環(huán)狀分布。不同菌株的菌落、孢子顏色和菌絲分布差異明顯，其中A、B、C 類菌株較多，分別有3、3、6 株，A 類和C 類菌株產(chǎn)孢較多，B 類菌株產(chǎn)孢較少。而D、E、F 類各有1 個菌株，D 類菌株的主要特征是菌落邊緣孢子呈綠色，而其他菌株孢子大部分呈灰綠色或墨綠色。E 類菌株主要特征是菌絲呈白色絮狀，孢子墨綠色且分布于菌落中央?yún)^(qū)域。F 類菌株主要特征是菌落上孢子后期結成塊狀脫落。

圖1 不同來源金龜子綠僵菌菌株在PDA 培養(yǎng)15 d 的菌落形態(tài)Fig.1 Colonial morphology of the M.anisopliae strains from different sources on the 15th day in PDA

表2 不同來源金龜子綠僵菌的菌落特征與分類Table 2 Colony characteristics classification of M.anisopliae from different sources

2.2 菌株生長速度比較

菌落生長速度快慢是衡量菌株是否具有優(yōu)良生產(chǎn)性能的重要指標之一。供試的15 株綠僵菌菌株生長速度見表3。15 株綠僵菌菌株生長速度在培養(yǎng)初期(10 d 以內(nèi))差異顯著。第5 天時，MaQZ-01、MaJGZ-01、MaZPTR-04、MaQL-02、MaQL-03 等菌株的菌落直徑超過3 cm(表3)。MaQZ-01、MaJGZ-01 和MaFZ-04菌株10 d 時菌落直徑超過6 cm，生長速度顯著快于其他菌株，但該3 個菌株之間生長速度差異不顯著。而到了15 d，各菌株進入大量產(chǎn)孢階段，除Ma-20、MaJGSTR-01 菌落直徑較小外(分別為5.54、3.93 cm)，其他菌株菌落直徑均超過6 cm，并且兩兩間差異不顯著。

表3 不同來源金龜子綠僵菌的生長情況1)Table 3 Growth of M.anisopliae from different sources

2.3 菌株產(chǎn)孢量的比較

從圖2 可見，不同菌株產(chǎn)孢量差異顯著，MaQZ-01、MaZPTR-04 和MaSHTR-05 等3 個菌株產(chǎn)孢量顯著高于其他菌株，分別達到0.147 ×109、0.145 ×109和0.137 ×109個·cm－2，MaJGZ-01 和MaQL-03 菌株產(chǎn)孢較少，分別為0.054 ×109、0.053 ×109個·cm－2。MaQZ-01 的產(chǎn)孢量是MaQL-03 的2.5 倍。

圖2 不同來源金龜子綠僵菌菌株的產(chǎn)孢量Fig.2 Sporulation quantity of M.anisopliae from different sources

3 小結

本研究表明，不同地理、寄主來源的15 株金龜子綠僵菌菌落形態(tài)、顏色、產(chǎn)孢量、孢子顏色等性狀均存在明顯差異。根據(jù)以上特征，將15 株菌株分為6 類，其中A、B、C 類菌株分別有3、3、6 株，D、E、F 類各有1株。不同菌株生長速度存在顯著差異，MaQZ-01、MaJGZ-01 和MaFZ-04 菌株培養(yǎng)10 d 時菌落直徑均超過6 cm，生長速度顯著高于其他菌株。MaQZ-01、MaZPTR-04 和MaSHTR-05 菌株產(chǎn)孢量顯著高于其他各菌株，分別達到0.147 ×109、0.145 ×109和0.137 ×109個·cm－2。綜合生長速度與產(chǎn)孢量2 個指標，MaQZ-01 菌株產(chǎn)孢能力強且生長迅速，具備優(yōu)良的生產(chǎn)性能，在今后病蟲害的林間防治中具有較大的應用潛力，但需進一步研究該菌株對不同靶標害蟲的致病力，以確定適宜的防治對象。

致謝:福建省林業(yè)科學研究院森林保護研究所何學友博士為本研究提供技術指導，謹此致謝。

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