湛春波 董秋梅 郝 華 劉春慧 王 琦 屈愛桃 邢雅儒 陳 琨

(1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)2011 級(jí)研究生，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110;2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特010110;3.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)2012 級(jí)研究生，內(nèi)蒙古 呼和浩特010110;4.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特010110 5.赤峰市第二蒙醫(yī)中醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 赤峰 024000;)

蒙藥忠倫阿湯由梔子、訶子、川楝子、苦參和地格達(dá)(蒙藥又名當(dāng)藥、紫花地丁)5 味藥組成，具有清熱、涼血、舒筋、止痛功效，是傳統(tǒng)蒙醫(yī)治療熱性黃水病，游痛證、痛風(fēng)等的常用方劑［1］，其癥狀病程相當(dāng)西醫(yī)學(xué)的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、急性風(fēng)濕熱等，目前國(guó)內(nèi)已有報(bào)道，在臨床上使用忠倫阿湯原方及加減類方在治療風(fēng)濕免疫病、骨關(guān)節(jié)炎等方面具有一定療效［2］。既往的基礎(chǔ)研究已表明蒙藥忠倫阿湯抗炎鎮(zhèn)痛作用明確，并能抑制膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型的足腫脹，具有較好的抑制腫瘤壞死因子、白介素等免疫炎癥的作用［3］。本研究旨在觀察藥物實(shí)驗(yàn)大鼠的長(zhǎng)期毒性，為進(jìn)一步指導(dǎo)臨床合理用藥提供依據(jù)，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。

1 材 料

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物：忠倫阿湯散，蒙藥復(fù)方制劑，黃色粉末，味苦，由內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)院提供，生產(chǎn)批號(hào)：20121216 規(guī)格：3g/袋，每袋含生藥3g，臨床成人用藥劑量為：1 袋/次(3g/次)，2 次/日。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：Wistar 大鼠80 只，雌雄各半，由內(nèi)蒙古大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，許可證號(hào)：SCXK(蒙)2002-0001，清潔級(jí)。

2 方 法

2.1 動(dòng)物飼養(yǎng)室環(huán)境：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察室溫度為(18 ±2)℃，相對(duì)濕度為40% ～60%，動(dòng)物飼養(yǎng)于獨(dú)立通風(fēng)隔離籠具中。

2.2 實(shí)驗(yàn)過程

2.2.1 動(dòng)物分組：Wistar 大鼠80 只，雌雄各半，按體重隨機(jī)分組，分高劑量組、中劑量組、低劑量組、空白對(duì)照組共4組，每組雌鼠10 只，雄鼠10 只，雌雄分籠飼養(yǎng)，每籠5 只。

2.2.2 實(shí)驗(yàn)藥物煎煮配置方法、藥物濃度及給藥劑量的確定：忠倫阿湯散劑分別按大鼠臨床等效給藥劑量的50 倍、25 倍、12.5 倍作為高、中、低各組的給藥劑量，耐藥倍數(shù)取近似值6，每星期稱體重1 次，按體重調(diào)節(jié)給藥劑量，實(shí)驗(yàn)藥物輕煎冷卻至室溫后萃取上清液，按實(shí)驗(yàn)要求蒸發(fā)掉多余水分，至所需體積后放入4℃冰箱備用，每日定時(shí)灌胃2次。

2.2.3 實(shí)驗(yàn)方法：研究方法參考彭城［5］《中醫(yī)藥動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本技術(shù)方法》，及陳奇《中藥藥理研究方法學(xué)》［6］。長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)給藥15 周后停藥，每組隨機(jī)抽取10 只大鼠做血常規(guī)，血液生化指標(biāo)分析，并解剖，相關(guān)臟器稱重，計(jì)算臟器系數(shù)，將所取臟器進(jìn)行固定，準(zhǔn)備進(jìn)行病理組織學(xué)實(shí)驗(yàn)觀察，余下大鼠停止灌胃給藥，正常飼養(yǎng)2 周進(jìn)行解剖觀察。

2.2.4 觀測(cè)指標(biāo)：一般情況：每天2 次灌胃后觀察大鼠的反應(yīng)，包括自主活動(dòng)，精神狀態(tài)、飲水、攝食、尿液糞便等情況，進(jìn)行記錄。血液學(xué)檢查：白細(xì)胞總數(shù)及其分類、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、血小板等。血液生化學(xué)檢查：AST、ALP、ALT、BUN、TP、ALB、Cr、TC、T-BIL、GLU 等十項(xiàng)指標(biāo)。大鼠病理組織學(xué)檢查：大鼠乙醚吸入麻醉后心臟取血，解剖，取心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、卵巢、睪丸、胸腺、甲狀腺、腦組織，經(jīng)10%中性福爾馬林溶液浸泡固定，常規(guī)石蠟切片，HE染色。

2.3 統(tǒng)計(jì)方法：統(tǒng)計(jì)資料用±s 表示，用SPSS17.0 醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，結(jié)果取α=0.05，P＜0.05 認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 一般情況：忠倫阿湯給藥組尿量明顯多于對(duì)照組，高劑量組大鼠尿量高于中劑量組，中劑量組高于低劑量組(鼠籠托盤內(nèi)尿液可見)，且高劑量組有藍(lán)綠色尿液，停藥后各組小便情況無差別。給藥期間各組大鼠偶有大便稀，可自行緩解。行為活動(dòng)和毛色各組無顯著差異。

3.2 體重：由表1、表2 可知，對(duì)照組與高、中、低各組比較，蒙藥忠倫阿湯灌胃給藥15 周，停藥恢復(fù)性觀察2 周，各組大鼠體重遞增，P＞0.05，沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 給藥期各組忠倫阿湯對(duì)大鼠體重的影響(±S，單位g ，n=20)

表2 停藥2 周后各組蒙藥忠倫阿湯對(duì)大鼠體重的影響(±S，單位g，n=10)

表3 給藥期各組忠倫阿湯對(duì)大鼠生化指標(biāo)的影響(±S，n=10)

表4 停藥后忠倫阿湯停藥后對(duì)大鼠生化指標(biāo)的影響(±S，n=10)

3.3 血常規(guī)：給藥期血常規(guī)，各項(xiàng)指標(biāo)對(duì)照組和高、中、低各組均無顯著差異，即P＞0.05，沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?；謴?fù)期各組血常規(guī)各組間比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

3.4 生化指標(biāo)：表3、表4 所示，與對(duì)照組比較，忠倫阿湯高、中、低劑量組給藥15 周和恢復(fù)性觀察2 周各組之間沒有顯著性差異，P＞0.05。

3.5 臟器系數(shù)：忠倫阿湯給藥15 周，肝、脾、腎、肺、卵/睪對(duì)照組和高、中、低各組比較無差異，P＞0.05。腎上腺、胸腺、心臟、甲狀腺、腦的臟器系數(shù)經(jīng)分析，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，經(jīng)兩組間比較，各組的對(duì)照組和高劑量組、中劑量組之間沒有差異，P＞0.05。

忠倫阿湯恢復(fù)期臟器系數(shù)，肝、脾、腎、卵/睪對(duì)照組和高中低各組比較無差異，P＞0.05。腎上腺、胸腺、心、肺、甲狀腺、腦，經(jīng)兩組間比較，對(duì)照組和高劑量組、中劑量組沒有顯著差異，P＞0.05。

3.6 病理變化：長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)中給藥組和對(duì)照組各組大鼠心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、卵巢、睪丸、胸腺、甲狀腺、腦組織未見明顯的增生和壞死，未見其他異常病理改變。

4 討 論

對(duì)天然藥物的安全性評(píng)價(jià)及毒理學(xué)研究目前越來越受到重視，對(duì)于指導(dǎo)臨床合理用藥，降低藥物的毒副作用及減少因毒性導(dǎo)致的新藥研發(fā)失敗具有重要意義［7］。天然藥中包括大量在少數(shù)民族地區(qū)使用的民族藥物，蒙藥在內(nèi)蒙古地區(qū)應(yīng)用廣泛，臨床療效顯著，雖然在大多數(shù)情況下使用安全有效，副作用相對(duì)較小，但是對(duì)于某些特殊疾病或人群，需長(zhǎng)期用藥者，是否存在毒性反應(yīng)等，要深入研究，通過實(shí)驗(yàn)研究客觀科學(xué)評(píng)價(jià)藥物的毒性作用。

目前，關(guān)于忠倫湯散劑的臨床毒副作用反應(yīng)，急慢性毒性實(shí)驗(yàn)研究國(guó)內(nèi)尚未見報(bào)道，由于缺乏臨床的安全性評(píng)價(jià)，及毒理學(xué)方面的實(shí)驗(yàn)研究，嚴(yán)重限制了該藥物的推廣應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，給藥期間大鼠行為活動(dòng)和毛色各組無顯著差異，飲水、攝食未見異常，體重均呈增長(zhǎng)趨勢(shì)，血液學(xué)及血液生化學(xué)指標(biāo)未見異常改變，各組臟器系數(shù)未見明顯差異，病理組織學(xué)檢查相關(guān)組織和臟器未見異常改變，停藥2周進(jìn)行恢復(fù)性觀察，未見藥物有延遲毒性反應(yīng)，因此，該實(shí)驗(yàn)表明蒙藥忠倫阿湯在實(shí)驗(yàn)階段內(nèi)未見明顯毒性反應(yīng)，提示該藥臨床給藥途徑和給藥劑量是基本安全的。

值得注意的是，在既往的研究中雖有報(bào)道指出川楝子在體內(nèi)有蓄積作用，長(zhǎng)期服用可引起蓄積中毒，苦參提取物也對(duì)肝腎細(xì)胞活力有明顯的抑制作用［8-10］，但本實(shí)驗(yàn)中，并未發(fā)現(xiàn)蒙藥復(fù)方忠倫阿湯的肝腎病理?yè)p傷，推測(cè)是否由于組成蒙藥復(fù)方后，通過藥物之間的相互配伍，起到了減毒增效作用，需要在今后的實(shí)驗(yàn)中，進(jìn)一步深入探討。

另外，在實(shí)驗(yàn)中由于大鼠臟器較小，取材時(shí)有可能附帶周圍結(jié)締組織、脂肪組織，空腔臟器中附帶的體液或血液，稱重時(shí)尚不能徹底剝離或清除，可能對(duì)臟器重量產(chǎn)生影響，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表現(xiàn)臟器系數(shù)組內(nèi)差異較小，在今后的實(shí)驗(yàn)中應(yīng)盡量避免這些影響因素造成的誤差。

［1］李艷春，胡志忠，羅素琴，等.蒙藥三子散中還原糖的含量測(cè)定［J］. 內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，32(16)：551 ～553.

［2］斯琴高娃，董秋梅.甲氨蝶呤聯(lián)合蒙藥忠倫阿湯治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的療效觀察［J］. 環(huán)球中醫(yī)藥，2014，(5)：385 ～387.

［3］李林，高自立，屈愛桃，等.蒙藥忠倫阿湯的抗炎鎮(zhèn)痛作用研究及對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠足腫脹的影響［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志.2011，17(3)：184 ～186.

［4］高自立，董秋梅，松林，等. 蒙藥忠倫阿湯對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠血清IL-1、IL-6 及TNF-α 的影響［J］.中醫(yī)雜志，2012，53(7)：1816 ～1817.

［5］彭城.中醫(yī)藥動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本技術(shù)方法［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：119.

［6］陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)(第二版)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：31 ～32.

［7］徐蓓，杜冠華. 藥物安全評(píng)價(jià)及藥物毒理學(xué)研究進(jìn)展［J］.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)刊，2006，8(5)：326 ～327.

［8］唐大軒，熊靜悅，梁婭君，等.川楝子對(duì)大鼠完全急性毒性作用研究［J］. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2011，22(10)：2387 ～2389.

［9］張茜，金若敏，祝曉雯，等.用肝腎共培養(yǎng)體系研究細(xì)胞毒性的方法學(xué)考察［J］. 中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2011，18(11)：36 ～58.

［10］王小鶯，李麟，韓嘵萍，等.復(fù)方苦參注射液的體外抗菌作用及急性毒性試驗(yàn)［J］. 中獸醫(yī)學(xué)雜志，2011(5)：13～14.