包納日斯 何套格蘇 牧 丹 包青蘭

(1.內蒙古醫(yī)科大學蒙醫(yī)藥學院，內蒙古 呼和浩特 010010;2.內蒙古醫(yī)科大學計算機信息學院，內蒙古 呼和浩特 010010;3.內蒙古醫(yī)科大學2013 級碩士研究生，內蒙古 呼和浩特 010010;4.內蒙古醫(yī)科大學2015 級碩士生，內蒙古 呼和浩特 010010;)

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是一種長期過量飲酒使肝實質細胞脂肪變性和脂肪貯積為特征的臨床病理綜合征，大量流行病學調查顯示，我國NAFLD 的發(fā)病率可高達15%以上，并且隨著生活水平的提高，發(fā)病率正成倍增加［1］，因此，有效防治NAFLD，以及加強對NAFLD 治療的探討具有積極意義。本研究通過建立大鼠NAFLD 動物模型，根據(jù)祖國傳統(tǒng)蒙醫(yī)藥理論“三根調節(jié)法”，即抑“赫依”、清“希拉”、祛“巴達干”［2］，使用蒙醫(yī)臨床中常用的、并取得了確切療效的蒙藥方劑巴日巴德-10，觀察其對NAFLD 大鼠肝功、血脂水平以及抗氧化能力的影響，為探索其作用機制提供一定的實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗藥物：馬來酸羅格列酮片，葛蘭素史克(天津)有限公司，批號：08030115;巴日巴德-10 -由國家蒙藥制劑中心(內蒙古國際蒙醫(yī)院制劑室)提供【呼衛(wèi)注字(97)001-116】，批號：20120421。

1.2 動物：SD 大鼠，SPF 級，體重80 -100g，由四川省醫(yī)學科學院實驗動物研究所提供，實驗動物合格證號：SCXK(川)2008 -24。

1.3 試劑：膽固醇，成都市科龍化工試劑廠，批號：090521;膽鹽，北京奧博星生物技術有限責任公司，批號：20090807;大鼠胰島素酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，批號：200911;其余試劑盒均購自南京建成生物工程公司。

1.4 儀器：VARIOSKAN FLASH 2.4.3 全波長多功能讀數(shù)儀(Thermo);全自動生化分析儀(7080)CDSYJYK022;AnkeTDL-60c 離心機(上海安亭科學儀器廠);電子天平BP121s 型(STRTORIUS)。

1.5 方法

1.5.1 動物分組 SD 大鼠，適應性飼養(yǎng)1wk 后，按體重隨機分為空白對照組和模型對照組?？瞻讓φ战M動物給予大鼠標準基礎飼料，模型對照組每天灌胃給予酒精(56%)加高脂乳劑(1000g 高脂飼料：100g 豬油，20g 膽固醇，5g 膽鹽，50g 蔗糖，825g 水)。于第4wk 末處死4 只大鼠，做血脂水平檢測及病理檢查，結果提示NAFLD 模型成功。將NAFLD 大鼠按體重隨機分為模型對照組、陽性藥物對照組(馬來酸羅格列酮片)、巴日巴德-10 大、中劑量組4 組，每組8 只動物?？瞻讓φ战M給予等體積的蒸餾水，模型對照組組繼續(xù)灌服脂肪乳劑2wk 之后也給予等體積的蒸餾水，其余各組均按上述相應給藥劑量給予相應藥物，每天1 次，連續(xù)4wk。實驗期間動物自由進水和進食(各組動物均以大鼠標準基礎飼料喂養(yǎng))。末次給藥后大鼠禁食16h，取血并分離血清檢測各項指標。迅速取出肝臟，經(jīng)大體解剖觀察后，取肝組織約1g 左右，用冷的生理鹽水制成10%的肝組織勻漿，離心后取上清液，供肝組織勻漿指標檢測。

1.5.2 血清指標檢測 全自動生化分析儀測定血清TG 、甘油三酯(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、LDL-C、AST、谷丙轉氨酶(ALT)、FFA 以及空腹血糖(FBS)，elisa 試劑盒測FINS 并計算空腹胰島素抵抗指數(shù)FIRI 評價其胰島素抵抗程度。FIRI = ln［FBS(mmol·L-1)× FINS(mU·L-1)/22.5］，F(xiàn)IRI 的大小與IR 程度呈正相關［4］。

1.5.3 肝組織勻漿指標檢測 取肝組織勻漿上清液，全自動生化儀測定TC、TG 含量?？捡R斯亮藍法測定肝組織蛋白含量，按試劑盒說明測定超氧化物岐化酶(SOD)、MDA含量。

2 結果

2.1 對NNAFLD 模型大鼠血脂的影響：與空白對照組相比較NNAFLD 模型組大鼠TG、FFA 顯著升高(P＜0.01 或P＜0.05)。連續(xù)給藥4wk 后羅格列酮可顯著降低血清LDL-C 水平(＜0.05)，但對其他指標無顯著影響。巴日巴德-10 可顯著降低血清TG、LDL -C、FFA 水平(P＜0.01 或P＜0.05)，但對TC、HDL-C 無顯著影響，見表1。

組別 劑量/g·kg -1 TG/mmol·L -1 TC/mmol·L -1 HDL-C/mmol·L -1 LDL-C/mmol·L -1 FFA/μmol·L -1.8 ±197.3模型對照組 0.58 ±0.15* 1.47 ±0.22 0.93 ±0.17 0.36 ±0.11 1518.7 ±412.4＊＊羅格列酮組 0.003 0.48 ±0.07 1.28 ±0.27 1.06 ±0.21 0.24 ±0.09# 1244.8 ±484.0*巴日巴德-10 2.500 0.36 ±0.06* ## 1.42 ±0.29 1.10 ±0.21 0.24 ±0.10# 926.8 ±247.6##巴日巴德-10 1.250 0.39 ±0.07## 1.26 ±0.19* 0.94 ±0.14* 0.20 ±0.04* ## 1240.0 ±269.7*空白對照組 0.45 ±0.05 1.40 ±0.26 1.11 ±0.14 0.30 ±0.10 868

2.2 對NNAFLD 模型大鼠肝功能指標的影響：與空白對照組相比較NNAFLD 模型組大鼠AST 顯著升高(P＜0.01)。連續(xù)給藥4wk 后羅格列酮可顯著降低血清AST 水平(P＜0.05)，但對ALT 無顯著影響。蒙藥巴日巴德-10 可顯著降低AST 水平(P＜0.01)，對ALT 也無顯著影響，見表-2。

組別 劑量/g·kg -1 AST/IU·L -1 ALT/IU·L -1 149.1 ±27.0 46.80 ±11.95模型對照組 191.0 ±21.6＊＊ 48.45 ±10.16羅格列酮組 0.003 164.2 ±28.3# 46.25 ±6.78巴日巴德-10 2.500 152.1 ±26.3## 48.10 ±11.83巴日巴德空白對照組-10 1.250 155.3 ±20.2## 46.75 ±9.38

2.3 對NAFLD 模型大鼠FBS、FINS 以及FIRI 的影響 與空白對照組相比較NAFLD 模型組大鼠FINS、FIRI 顯著升高(P＜0.01 或P＜0.05)。連續(xù)給藥4wk 后羅格列酮可顯著降低FBS、FINS、FIRI 水平(P＜0.01 或P＜0.05)。巴日巴德-10 可顯著降低FINS、FIRI 水平(P＜0.01 或P＜0.05)，但對FBS 無顯著影響，見表3。

組別 劑量/g·kg -1 FBS/mmol·L -1 FINS/mU·L -1 FIRI 5.72 ±0.46 7.07 ±0.63 0.6 ±0.07模型對照組 5.79 ±0.66 10.64 ±1.40＊＊0.81 ±0.13*羅格列酮組 0.003 4.82 ±0.69* # 7.24 ±1.37## 0.42 ±0.24#巴日巴德-10 2.500 5.67 ±0.74 6.54 ±0.51## 0.52 ±0.19##巴日巴德空白對照組-10 1.250 5.75 ±0.20 6.61 ±0.41## 0.66 ±0.11

2.4 對NAFLD 大鼠肝組織中TG、TC、SOD 和MDA 的影響：與空白對照組相比較NAFLD 模型組大鼠肝組織TG、TC、MDA 水平顯著升高(P＜0.01)。給藥4wk 后羅格列酮可顯著降低TC，升高SOD 水平(P＜0.01 或P＜0.05)，但對TG、MDA 無顯著影響。蒙藥巴日巴德-10 可顯著降低TG、TC、MDA 水平(P＜0.01 或P＜0.05)，但對SOD 無顯著影響，見表4。

組別 劑量/g·kg -1 TG/mmol·L -1 TC/mmol·L -1 SOD/U·mg prot -1 MDA/nmol·mg prot -1 1.08 ±0.39 0.84 ±0.29 24.31 ±2.44 3.53 ±0.71模型對照組 1.76 ±0.51＊＊ 1.34 ±0.48＊＊ 22.88 ±0.52 5.26 ±0.93＊＊陽性對照組 0.003 1.58 ±0.45* 0.86 ±0.27## 24.42 ±1.33# 4.44 ±0.78*巴日巴德-10 2.500 0.98 ±0.24## 0.73 ±0.15## 25.11 ±2.86 3.31 ±0.95##巴日巴德-10 1.250 1.42 ±0.33 0.8 ±0.26## 23.98 ±1.52 3.空白對照組13 ±0.6##

3 討論

目前對NAFLD 的發(fā)病機理沒有完全解釋清楚，但它的病理生理學被認為與酒精無關，與肥胖、胰島素抵抗、氧化應激和線粒體功能障礙、細胞因子和脂肪因子的相互作用、細胞凋亡以及小腸細菌的過度生長等有關［5］。現(xiàn)在普遍認同的是“二次打擊”學說，這個假說認為“一次打擊”胰島素抵抗導致了肝臟脂肪變性，進而出現(xiàn)脂肪代謝紊亂，TG、TC、FFA 等的堆積以及肝臟損傷?！岸未驌簟笔且匝趸瘧ず椭|過氧化反應為中心。由氧化應激引發(fā)的活性氧簇(ROS)的大量增加導致了脂質過氧化反應、炎癥、肝細胞凋亡和纖維化［6］。

蒙醫(yī)藥是我國傳統(tǒng)醫(yī)藥學重要組成部分，由于蒙古族主要以肉食品、乳制品、面食品等為主食的飲食習慣NAFLD的發(fā)病率較高，蒙醫(yī)學經(jīng)典著作中有“脂肪過盛病”之說，即脂肪肝病。蒙醫(yī)理論認為“脂肪過剩病”主要是由于調節(jié)人體生理平衡的“赫依”“希拉”“巴達干”(稱之為“三根”)功能失調，導致飲食未消化，肝臟內脂肪聚集的一種消化系統(tǒng)慢性疾病。臨床中常采用“三根調節(jié)法”，抑“赫依”、清“希拉”、祛“巴達干”，使三根趨于平衡，從而維持人體生理的正常代謝［7-9］。代表方劑巴日巴德-10 在臨床中用于“三根調節(jié)”已經(jīng)獲得了確切療效，尤其對“混合型脂肪肝”的治療臨床上被公認。

本實驗通過灌胃給予高脂肪乳劑建立大鼠NAFLD 模型，造模后大鼠血清AST、FFA、TG、FIRI 顯著升高，TC、ALT、LDL-C 水平有升高的趨勢，HDL -C 水平有降低趨勢但無顯著性差異，肝組織TG、TC、MDA 水平也顯著升高，SOD 水平有降低的趨勢但無顯著性差異。提示NAFLD 模型大鼠出現(xiàn)一定程度的肝功能異常、血脂升高、脂質過氧化反應以及胰島素抵抗，基本符合人類NAFLD 的特點。給藥后巴日巴德-10 可顯著降低NAFLD 模型大鼠血清TG、AST、FFA、FIRI、LDL-C 水平以及肝組織TG、TC、MDA 水平。表明蒙藥巴日巴德-10 可在一定程度上降低NAFLD 模型大鼠血脂水平，改善肝功能損傷和胰島素抵抗，同時還具有一定抗氧化能力，改善氧化應激和脂質過氧化反應。以上結果提示用蒙藥巴日巴德-10 治療NAFLD 可能與其改善肝功能、降血脂、抗氧化作用以及改善胰島素抵抗有關，為揭示“三根調節(jié)法”(抑“赫依”、清“希拉”、祛“巴達干”)提供了實驗依據(jù)，同時為了進一步探索蒙醫(yī)藥治療NAFLD 的機制我們應做更深一步的研究。

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