馬寶倉，陳忻，張楠

(首都醫(yī)科大學(xué) 中醫(yī)藥學(xué)院，北京 100069)

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黃芩苷對魚藤酮致BV2細(xì)胞激活損傷的影響

馬寶倉，陳忻Δ，張楠

(首都醫(yī)科大學(xué) 中醫(yī)藥學(xué)院，北京 100069)

目的 觀察黃芩苷對魚藤酮致BV2細(xì)胞激活損傷的影響。方法 采用MTT法測定魚藤酮染毒BV2細(xì)胞存活率、ICC法測定細(xì)胞OX42表達(dá)變化、熒光分光光度法測定細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量、ICP-AES測定細(xì)胞內(nèi)鐵含量以及采用相關(guān)試劑盒測定胞外H2O2和胞內(nèi)MDA、NO、NOS的含量。結(jié)果 魚藤酮染毒BV2細(xì)胞存活率降低，細(xì)胞標(biāo)記蛋白OX42、細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量、細(xì)胞內(nèi)鐵含量顯著增加(P<0.05)，造成細(xì)胞產(chǎn)生氧化損傷。黃芩苷可減少魚藤酮染毒BV2細(xì)胞OX42表達(dá)，增加細(xì)胞存活率、減少細(xì)胞內(nèi)鐵含量、減少細(xì)胞H2O2釋放，減少氧化損傷(P<0.05)。結(jié)論 黃芩苷抑制魚藤酮染毒所致BV2的激活和損傷，具有神經(jīng)保護作用；其保護作用機制與減少鐵進入細(xì)胞有關(guān)。

帕金森??；魚藤酮；黃芩苷；小膠質(zhì)細(xì)胞；神經(jīng)炎癥

帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是常見的神經(jīng)退行性疾病。發(fā)病機制研究涉及線粒體功能障礙、氧化應(yīng)激、神經(jīng)興奮性毒性、神經(jīng)炎性反應(yīng)和異常蛋白集聚等諸多學(xué)說[1-4]，神經(jīng)炎性反應(yīng)與PD發(fā)生發(fā)展的關(guān)系已成為重要的關(guān)注熱點之一[5-6]。小膠質(zhì)細(xì)胞作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)的免疫細(xì)胞，其活化在神經(jīng)炎性反應(yīng)中扮演著重要角色，激活的小膠質(zhì)細(xì)胞[7]通過釋放一系列潛在的神經(jīng)毒性物質(zhì)和炎性因子如·OH、NO、O2-、IL-1β和TNF-α等發(fā)揮細(xì)胞毒性效應(yīng)[8]，導(dǎo)致繼發(fā)性腦損害[9]。PD患者的病理尸檢發(fā)現(xiàn)變性的神經(jīng)元周圍聚集著大量激活的小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞[10]；在原發(fā)性和家族性PD患者均出現(xiàn)大量反應(yīng)性小膠質(zhì)細(xì)胞[11]。而PD患者黑質(zhì)(substantia nigra，SN)中鐵含量顯著增加也是一個公認(rèn)的事實[12-13]，主要病理腦區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞的激活，特別是鐵積聚的原因尚未認(rèn)識清楚。本課題組前期的研究發(fā)現(xiàn)魚藤酮PD大鼠不僅黑質(zhì)致密部，在海馬齒狀回顆粒細(xì)胞層、紋狀體蒼白球、小腦齒狀-間位核及面神經(jīng)核區(qū)域都有鐵的顯著積聚[14]，而常用中藥黃芩中的有效成分黃芩苷在改善PD動物神經(jīng)行為學(xué)癥狀的同時，可減少上述區(qū)域鐵積聚。研究還見這些區(qū)域內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞、星型膠質(zhì)細(xì)胞均呈激活狀態(tài)[15-16]。這些發(fā)現(xiàn)提示小膠質(zhì)細(xì)胞激活與鐵積聚可能存在著的某種關(guān)系，本研究旨在：①觀察魚藤酮染毒小膠質(zhì)細(xì)胞所造成的激活和損傷及是否能引起鐵攝入增加，探討小膠質(zhì)細(xì)胞激活和損傷與鐵攝入的關(guān)系。②黃芩苷是否能減輕魚藤酮染毒BV2細(xì)胞激活及所造成的損傷；能否減少損傷時鐵的攝入，從而探討黃芩苷保護神經(jīng)細(xì)胞的作用機理。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞：BV2小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞(國家實驗細(xì)胞資源共享平臺)。

1.1.2 藥品與試劑：魚藤酮(ROT，上海阿拉丁，批號：H1206031)，檸檬酸鐵胺(FAC，國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號：F20091029)，阿司匹林(AS，國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)資源中心，批號：CDCT-C10024000)、黃芩苷(BI，中國藥品生物制品檢定所，批號：A0016)，小鼠CD11b/c(OX42)單克隆抗體(Abcam?公司，批號：GR67204-1)，鈣熒光測定試劑盒(CFA，Immuno Way公司，批號：C38T121)。

1.1.3 儀器：AP250D型電子天平(美國奧豪斯)；電熱恒溫水浴鍋(北京市長風(fēng)儀器儀表公司)；CO2恒溫培養(yǎng)箱(Heraeus Hear cell 150 Thermo)；層流超凈臺(Taisite)；倒置顯微鏡(Leica DMIL)；680型酶標(biāo)儀(Bio-Rad)；Biofuge15R型低溫生物離心機(Heraeus Instrument)；MIR-162型恒溫培養(yǎng)箱(日本三洋公司)；RF-5301PC熒光分光光度計(Shimadiu, 日本)；ICPS-7000型高頻電感耦合等離子發(fā)射光譜儀(ICE-AES)(日本Shimadzu公司)；ECLIPSE80i型顯微鏡(日本Nikon公司)；OLYMPUS IX71熒光倒置顯微鏡(日本)；低溫高速離心機(德國EPPENDORF公司)；pH計(英國JENWAY)。

1.2 方法

1.2.1 魚藤酮對BV2細(xì)胞的損傷濃度和時間的確定:采用96孔板，1×104個/mL接種BV2細(xì)胞，每孔加入100 μL細(xì)胞懸液，培養(yǎng)約24 h，細(xì)胞生長至匯合度約在60%～70%時，加入不含血清的DMEM配制的ROT梯度(0.0001、0.0005、0.001、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5 μmol/L)，分別作用6、12、24 h，每板設(shè)正常對照組。時間結(jié)束時每孔加20 μL的MTT(濃度為0.5 mg/mL)，4 h后吸棄上清液，每孔加入150 μL的DMSO，設(shè)空白對照組，測定細(xì)胞存活率。

1.2.2 BV2細(xì)胞損傷后的形態(tài)觀察 用24孔板培養(yǎng)BV2細(xì)胞，分設(shè)正常對照組、黃芩苷組、模型組。待細(xì)胞長至匯合度約在60%～70%時，模型組加0.01 μmol/LROT孵育24 h，黃芩苷組先加0.01 μmol/LROT，后加入20 μg/mL的黃芩苷，共同孵育24 h。在相差顯微鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)，并拍片記錄，其中模型組在6 h、12 h、24 h時分別觀察記錄。

1.2.3 黃芩苷對魚藤酮染毒BV2細(xì)胞存活率的影響:正常傳代培養(yǎng)的BV2細(xì)胞，分為正常對照組、ROT模型組、ROT+BI組(BI組)、ROT+AS組(AS組)。接種細(xì)胞匯合至60%～70%時，BI組(BI1、BI2、BI3)和AS組(AS1、AS2、AS3)分別用無血清的梯度BI(10、20、50 μg/mL)、AS(0.1、1、10 mmol/L)先孵育1h，正常對照組和ROT模型組則加無血清DMEM培養(yǎng)液。后各組除正常對照組均加ROT(終濃度為0.01 μmol/L)孵育24 h。MTT法測各組細(xì)胞存活率。

1.2.4 黃芩苷對魚藤酮染毒BV2細(xì)胞激活的影響:將BV2細(xì)胞懸液(1×104個/mL)2 mL接種于放置涂有多聚賴氨酸的蓋玻片的24孔板里培養(yǎng)24 h，分為4組。BI組和AS組分別用無血清的BI(20 μg/mL)、AS(1 mmol/L)先孵育1 h，正常對照組和ROT模型組則加無血清DMEM培養(yǎng)液，后除正常組外其余各組加ROT(終濃度為0.01 μmol/L)孵育24 h制成細(xì)胞涂片。行OX42染色：細(xì)胞涂片、4%多聚甲醛固定、3%H2O2清除內(nèi)源性過氧化物酶、羊血清封閉液、滴加OX42(1:100)抗體、4 ℃過夜、按順序滴加二抗、DAB顯色、梯度乙醇脫水、二甲苯脫水、封片。每組6復(fù)孔。

1.2.5 黃芩苷對魚藤酮染毒BV2細(xì)胞內(nèi)鈣離子的影響：細(xì)胞培養(yǎng)及分組同1.2.4。收集細(xì)胞，參照Grynkiewiez等[17]的方法測定各組細(xì)胞Ca2+濃度。

1.2.6 黃芩苷對魚藤酮染毒BV2細(xì)胞自由基代謝的影響：細(xì)胞培養(yǎng)及分組同1.2.4。吸出上清液，4000 r/min，離心5 min，吸出上清于2 mL的離心管中，4 ℃放置，待測。按南京建成生物工程研究所試劑盒提供的方法進行檢測。每組6復(fù)孔。

1.2.7 黃芩苷對魚藤酮染毒BV2細(xì)胞胞內(nèi)鐵濃度的影響：將密度為1×104個/mL的BV2細(xì)胞2 mL/孔鋪到6孔板中，分為5個組：正常對照組、檸檬酸鐵胺組(FAC)、ROT模型組(FAC+ROT)、BI組(FAC+ROT+BI)、DFO組(FAC+ROT+DFO)。待細(xì)胞匯集度為60%～70%時，吸棄培養(yǎng)液，ROT組、BI組、DFO組均加用無血清的DMEM配置的含F(xiàn)AC的ROT，F(xiàn)AC、ROT的終濃度分別為10、0.01 μmol/L，F(xiàn)AC組只加用無血清的DMEM配制的終濃度為10 μg/mL的FAC，正常對照組加相應(yīng)量的無血清的DMEM培養(yǎng)液；培養(yǎng)24 h后，BI組和DFO組分別加終濃度為20、50 μg/mL的BI和DFO，其余各組組加無血清DMEM培養(yǎng)液，2 mL/孔，共同孵育3 h。收集細(xì)胞、計數(shù)，每組復(fù)9孔。高頻電感耦合等離子發(fā)射光譜儀檢測細(xì)胞內(nèi)鐵含量[18]。

1.2.8 圖像分析：每組取6張細(xì)胞爬片，40倍鏡采集圖像，用NIS-Elements病理圖像分析系統(tǒng)(Ver.2.1)分析積分光密度(IOD)。

2 結(jié)果

2.1 黃芩苷對魚藤酮染毒所致BV2細(xì)胞損傷的保護作用

2.1.1 魚藤酮對BV2細(xì)胞的損傷呈現(xiàn)出劑量依賴性：結(jié)果顯示：ROT分別染毒BV2細(xì)胞6、12、24 h，ROT分別在0.05～0.5、0.01～0.5、0.005～0.5 μmol/L濃度區(qū)間，顯著地抑制細(xì)胞增殖。魚藤酮染毒12 h與染毒6 h相比，染毒細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化，但細(xì)胞數(shù)量增加；染毒至24 h與染毒12 h相比，不但細(xì)胞形態(tài)發(fā)生了變化，細(xì)胞數(shù)目也明顯減少。在染毒24 h的ROT濃度梯度中，0.01 μmol/L染毒組即可造成BV2細(xì)胞與正常對照組差異有統(tǒng)計學(xué)意義，因此本實驗其他指標(biāo)中染毒組即采用此濃度。見表1。

表1 魚藤酮梯度濃度及不同作用時間對BV2細(xì)胞存活率的影響±s，n=6)Tab.1 Influence of Rotenone gradient concentration and different duration for BV2 cells survival ±s，n=6)

*P<0.05，**P<0.01，與正常組比較，compared with control group；#P<0.05，##P<0.01，與6 h比較，compared with 6 h

2.1.2 ROT染毒BV2細(xì)胞后其形態(tài)的變化:正常組細(xì)胞絕大部分為圓形或橢圓形；模型組作用BV2細(xì)胞，前6 h內(nèi)無顯著性變化，6～12 h內(nèi)大部分細(xì)胞可產(chǎn)生樹突，24 h時，樹突大量減少，大部分細(xì)胞呈現(xiàn)不規(guī)則圓形，較正常組細(xì)胞胞體變大，細(xì)胞邊緣透明化程度增高；黃芩苷組樹突較少，細(xì)胞形態(tài)接近正常對照組。見圖1。

圖1 BV2細(xì)胞受到ROT影響時的細(xì)胞形態(tài)(×20)Fig.1 BV2 cell morphology by ROT influence(×20)

2.1.3 黃芩苷對魚藤酮染毒的BV2細(xì)胞具有劑量依賴性的保護作用:黃芩苷在10～50 μg/mL濃度范圍，可減少魚藤酮(0.01 μmol/L，24 h)染毒BV2細(xì)胞的死亡率，對BV2細(xì)胞的保護呈現(xiàn)出劑量依賴性，而AS過低濃度保護作用不強，過高濃度則會引進新的損傷。見表2。

表2 黃芩苷對魚藤酮染毒BV2細(xì)胞死亡率的影響±s，n=6)Tab.3 Effect of baicalin on rotenone exposure BV2 cells ±s，n=6)

**P<0.01，與正常組比較，compared with control group；#P<0.05，##P<0.01，與模型組比較，compared with model group

2.2 黃芩苷減少魚藤酮染毒所致BV2細(xì)胞的激活 實驗結(jié)果顯示：魚藤酮模型組較正常組BV2細(xì)胞OX42的表達(dá)顯著增加，BI組與AS組較模型組OX42的表達(dá)減少，提示ROT激活BV2細(xì)胞，而BI和AS可以減少魚藤酮導(dǎo)致的BV2激活，且BI優(yōu)于AS。見表3、圖2。

表3 魚藤酮染毒BV2細(xì)胞OX42的表達(dá)Tab.

**P<0.01，與正常組比較，compared with control group；#P<0.05，##P<0.01，與模型組比較，compared with model group

圖2 魚藤酮染毒BV2細(xì)胞OX42的表達(dá)(×100)Fig.2 Rotenone exposure BV2 cells express OX42(×100)

2.3 黃芩苷減少魚藤酮染毒BV2細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度 結(jié)果顯示，ROT模型組細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量顯著增加(P<0.01)。而BI、AS能夠明顯抑制魚藤酮染毒引起的細(xì)胞外液中Ca2+的進入。見表4。

表4 魚藤酮染毒BV2細(xì)胞Ca2+含量變化Tab.4 Ca2+ content changes of rotenone infected BV2 ±s，n=6)

*P<0.05，**P<0.01，與正常組比較，compared with control group；#P<0.05，與模型組比較，compared with model group

2.4 黃芩苷抑制魚藤酮染毒BV2細(xì)胞氧自由基產(chǎn)生及氧化損傷 BV2細(xì)胞在0.01 μmol/L的ROT干預(yù)24 h后，ROT模型組細(xì)胞培養(yǎng)液中H2O2含量、BV2細(xì)胞MDA、NO、NOS含量均明顯高于對照組(P<0.01)，而BI組和AS組均能降低ROT染毒所造成的BV2細(xì)胞的氧化損傷，降低細(xì)胞培養(yǎng)液中H2O2的含量(P<0.01)，降低細(xì)胞內(nèi)MDA、NO、NOS的量(P<0.05)。見表5。

組別H2O2(mmol/L)MDA(nmol/mgprot)NO(μmol/L)NOS(U/mgprot)正常對照組7.24±1.456.35±1.438.52±1.4111.52±2.07ROT模型組36.60±6.05**18.99±3.23**77.54±8.32**65.51±6.72**BI組27.06±4.70##9.72±1.63##28.46±7.28##33.46±5.26##AS組30.50±4.91#12.88±1.69#30.60±6.73##31.36±5.68##

**P<0.01，與正常組比較，compared with control group；#P<0.05，##P<0.01，與模型組比較，compared with model group

2.5 黃芩苷減少魚藤酮染毒BV2細(xì)胞內(nèi)鐵含量 結(jié)果顯示，F(xiàn)AC組和ROT組細(xì)胞內(nèi)鐵含量較正常組有顯著差異(P<0.01)，提示鐵的擴散受濃度梯度驅(qū)使，很容易進入細(xì)胞。黃芩苷組和去鐵胺組細(xì)胞內(nèi)的鐵較模型組顯著減少(P<0.05)，表明黃芩苷、去鐵胺都能減少鐵進入BV2細(xì)胞內(nèi)。而魚藤酮染毒并沒有使BV2細(xì)胞內(nèi)鐵含量增加。見表6。

表6 電感耦合等離子發(fā)射光譜法測定魚藤酮染毒BV2細(xì)胞內(nèi)鐵含量Tab.6 Inductively coupled plasma emission spectrometry determination of rotenone infected BV2 iron content in the ±s，n=6).

*P<0.05，**P<0.01，與正常組比較，compared with control group；#P<0.05，##P<0.01，與模型組比較，compared with model group

3 討論

1988年，McGeer等[19]在PD患者中腦黑質(zhì)致密帶中發(fā)現(xiàn)了激活的Mi。激活的小膠質(zhì)細(xì)胞膜表面分子也呈現(xiàn)上調(diào)改變[20]，能夠產(chǎn)生和分泌一系列炎癥介質(zhì)，這些炎癥介質(zhì)不僅調(diào)節(jié)免疫活性，而且作用于神經(jīng)元，發(fā)揮細(xì)胞毒性作用，損傷多巴胺神經(jīng)元[21-22]。本研究在小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞株BV2細(xì)胞上，以魚藤酮誘導(dǎo)BV2細(xì)胞激活，建立了穩(wěn)定的PD小膠質(zhì)細(xì)胞模型。

PD神經(jīng)病理學(xué)機制的氧化應(yīng)激學(xué)說已獲共識，氧化應(yīng)激學(xué)說與炎性反應(yīng)、線粒體功能障礙等其他學(xué)說之間密切關(guān)聯(lián)[23]，氧應(yīng)激損傷處于各種學(xué)說關(guān)聯(lián)的樞紐位置，而鐵參與Fenton反應(yīng)，是促進氧應(yīng)激反應(yīng)的重要金屬離子。魚藤酮是線粒體復(fù)合酶Ⅰ抑制劑，對神經(jīng)細(xì)胞的損傷除了能量代謝障礙機制外也有氧應(yīng)激的參與，復(fù)合物Ⅰ抑制誘導(dǎo)產(chǎn)生大量活性氧可引起復(fù)合物Ⅰ活性持續(xù)下降，形成惡性循環(huán)[24]。

本項研究顯示，魚藤酮0.005～0.5 μmoL/L范圍內(nèi)均可造成BV2細(xì)胞不同程度的損傷，且損傷呈現(xiàn)出劑量的依賴性；魚藤酮染毒后的BV2細(xì)胞先會看到樹突明顯增加，而后細(xì)胞呈現(xiàn)出胞體變大、樹突減少的阿米巴樣的激活狀態(tài)，同時標(biāo)志蛋白OX42表達(dá)顯著增加，呈現(xiàn)顯著的激活狀態(tài)；激活意味著炎性釋放增加，意味著后繼的炎性級聯(lián)反應(yīng)啟動。本研究結(jié)果顯示魚藤酮顯著抑制了BV2增殖、使細(xì)胞內(nèi)Ca2+增加，釋放H2O2增加、細(xì)胞氧化損傷加?。贿€首次觀察到黃芩苷具有抑制魚藤酮染毒BV2細(xì)胞激活的作用；魚藤酮能夠減少染毒細(xì)胞的死亡率；抑制細(xì)胞內(nèi)Ca2+增加；減少釋放H2O2；抑制細(xì)胞氧化損傷，從而對神經(jīng)細(xì)胞產(chǎn)生保護作用。這為闡釋黃芩苷在PD動物模型上呈現(xiàn)的神經(jīng)保護作用機制提供了更多的證據(jù)。

一直以來被臨床研究[25]和實驗研究[26-31]不斷證明，PD患者或動物腦內(nèi)存在鐵積聚，鐵積聚與PD發(fā)生發(fā)展的關(guān)系是亟待認(rèn)識的問題，也正在引起臨床研究的關(guān)注。Kirsch[32]在對輕度認(rèn)知功能損害患者近2年隨訪研究中發(fā)現(xiàn)：認(rèn)知功能下降與腦內(nèi)鐵含量的異常沉積增多密切相關(guān)。有研究將鐵鰲合劑去鐵胺維持治療可減緩AD患者的癡呆發(fā)展速度[33]。從鐵代謝紊亂入手，用鐵螯合劑治療AD、PD正在形成一種新思路。

本研究在BV2細(xì)胞上探索了魚藤酮、小膠質(zhì)細(xì)胞激活、細(xì)胞鐵攝入增加之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)在有少量鐵負(fù)載情況下，魚藤酮染毒并沒有顯著增加細(xì)胞內(nèi)鐵的含量；這提示魚藤酮并不能直接導(dǎo)致鐵更多地進入細(xì)胞，也即指出環(huán)境毒素可能不直接引起鐵在腦區(qū)積聚；而鐵負(fù)載對照組的結(jié)果指出：鐵在細(xì)胞內(nèi)外濃度梯度存在下能夠進入細(xì)胞；這提示在整體情況下發(fā)生的可能是：環(huán)境因素造成神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)損傷的腦區(qū)，有某種因素驅(qū)動著鐵的集聚，在集聚所形成的濃度梯度下鐵更多地進入損傷后正在修復(fù)的細(xì)胞和幸存的細(xì)胞，通過加劇Fenton反應(yīng)，造成進一步損傷，致使損傷的發(fā)展，可能存在著惡性循環(huán)。本課題組[15]前期研究發(fā)現(xiàn)鐵的積聚是逐漸發(fā)展的，顯著積聚是發(fā)生在小膠質(zhì)細(xì)胞激活之后、造模成功后8周，將魚藤酮PD大鼠造模成功后繼續(xù)喂養(yǎng)2年，見其黑質(zhì)鐵積聚的程度已是造模成功時的數(shù)倍，這些研究支持上述推測。認(rèn)識驅(qū)動鐵集聚的因素可能是進一步需要深入工作的方向，多種神經(jīng)退行性疾病都存在腦鐵異常積聚，搞清鐵積聚的驅(qū)動因素可能對認(rèn)識疾病的發(fā)展、尋找新思路的藥物意義重大。本項研究還觀察到減少鐵離子進入細(xì)胞內(nèi)可能是黃芩苷產(chǎn)生神經(jīng)保護作用的主要機制之一。藥理研究早已證實黃芩苷有抗炎、抗氧化、抗癌、抗病原體、抗心律失常、調(diào)節(jié)血脂、調(diào)節(jié)免疫、解熱、鎮(zhèn)靜、激活血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)等多種活性，黃芩苷分子具有黃酮類母核結(jié)構(gòu)，它的結(jié)構(gòu)決定了它有很好的金屬離子螯合性[34-35]，課題組前期在C6細(xì)胞證實了黃芩苷可通過螯合鐵離子調(diào)節(jié)膜轉(zhuǎn)鐵蛋白DMT1、FP1的表達(dá)，減少鐵離子的攝入，抑制了鐵誘導(dǎo)的氧應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化水平，抑制細(xì)胞凋亡，對神經(jīng)細(xì)胞起到保護作用[36]。本研究的結(jié)果進一步提示黃芩苷作為金屬離子螯合劑可能在治療與鐵積聚有關(guān)的神經(jīng)退行性疾病中具有重要意義。

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(編校：譚玲)

Effect of baicalin on BV2 cell activation damage caused by rotenone

MA Bao-cang, CHEN XinΔ, ZHANG Nan

(School of Traditional Chinese Medicine, Capital Medical University, Beijing 100069)

ObjectiveTo observe Effect of baicalin on BV2 cell activation damage caused by rotenone.MethodsRotenone infected BV2 cell viability were detected by MTT assay, and OX42expression by ICC method assay, the inner cell Ca2+content by fluorescence spectrophotometry, intracellular iron content by ICP-AES when low concentrations iron of load without damage in cells and extracellular H2O2and intracellular content of MDA, NO, NOS with related kits.ResultsRotenone exposure BV2 cell reduced cell viability, the expression of cell marker protein OX42and intracellular Ca2+content and intracellular iron content were all significantly increased(P<0.05), resulting in oxidative damage to cells. Baicalin reduced OX42expression of rotenone exposure BV2 cell, increased cells survival, reduced intracellular iron content and H2O2release and oxidative damage of BV2(P<0.05).ConclusionBaicalin inhibits BV2 activation and damage by rotenone-induced, and it has neuroprotective effects. The protection mechanism may relate to reduce iron into cells.

Parkinson’s disease; rotenone; baicalin; microglial cells; nerve inflammation

2011年北京市教委科技發(fā)展計劃項目(KM201110025010)

馬寶倉，男，碩士，助教，研究方向：中藥防治帕金森病的基礎(chǔ)研究，E-mail：mbcbeijing20081125@163.com；陳忻，通訊作者，女，本科，教授，研究方向：中藥防治帕金森病的基礎(chǔ)研究、中藥藥理的教學(xué)與科研， E-mail：chenxin4283@126.com。

R3

A

1005-1678(2015)08-0001-05