張亞南+黃柳桓+曹碩+張國軍+康熙雄

[摘 要] 目的：為基層醫(yī)院和社區(qū)提供簡單、快速細菌初篩鑒定方法。方法：采用麥康凱瓊脂、chromID ? ESBL產(chǎn)色培養(yǎng)基和科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基及常規(guī)尿培養(yǎng)方法，隨機檢驗北京天壇醫(yī)院泌尿系感染患者的尿標本。結(jié)果：隨機檢測尿培養(yǎng)標本20份，“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基細菌初篩鑒定與微生物室細菌鑒定報告一致（Pearson c2=0.000，P=1.000）。該檢驗方法比常規(guī)細菌檢驗方法提前一天或兩天報告，加快了檢驗周期。結(jié)論：“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基分離、鑒定同時進行，具有快速、簡單、易操作的優(yōu)點，是一種適合在基層醫(yī)院和社區(qū)開展、推廣、普及應(yīng)用的細菌鑒定方法。

[關(guān)鍵詞] 培養(yǎng)基；細菌培養(yǎng)；泌尿系感染；檢驗周期

中圖分類號：R446 文獻標識碼： B 文章編號：2095-5200（2015）03-088-03

目前，我國三級醫(yī)院臨床微生物實驗室普遍使用全自動細菌培養(yǎng)和鑒定儀，節(jié)省人力，顯著提速細菌標本檢驗周期。但是，仍有許多基層醫(yī)院依然使用傳統(tǒng)的手工操作進行細菌鑒定工作。傳統(tǒng)手工操作鑒定繁瑣、速度緩慢、需要專業(yè)技術(shù)培養(yǎng)。如果基層醫(yī)院開展細菌快速初篩鑒定培養(yǎng)，可及時發(fā)現(xiàn)耐藥菌株、盡早隔離、早期合理選擇抗菌藥診治患者，減少醫(yī)院/社區(qū)感染，同時也可以緩解三級醫(yī)院患者就診量，提高患者生命質(zhì)量，減少衛(wèi)生醫(yī)療支出。依據(jù)我國尿培養(yǎng)細菌譜及耐藥特點，創(chuàng)新設(shè)計“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基，即麥康凱瓊脂、chromID ? ESBL產(chǎn)色培養(yǎng)基和科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基于一塊平皿，國內(nèi)外尚未見類似報道。本研究探討“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基的實用性，為基層醫(yī)院和社區(qū)的提供簡單、快速的細菌初篩鑒定方法。

1 對象與方法

1.1 一般資料

嚴格遵守?zé)o菌操作，收集2014年3月至4月在首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院尿路感染患者尿標本20份。

1.2 方法和設(shè)備

“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基，即麥康凱瓊脂、chromID ? ESBL產(chǎn)色培養(yǎng)基和科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基。麥康凱瓊脂（BD公司）、chromID ? ESBL產(chǎn)色培養(yǎng)基（生物梅里埃）和科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基（博賽科瑪嘉公司）配制參考《臨床微生物檢驗標準化操作》[1]、實驗室標準化操作（SOP）及試劑說明書，澆注90mm平皿備用。取中段尿，用定量接種環(huán)取尿液10μL分別接種于各瓊脂平板上，5%～10%CO2、35℃培養(yǎng)18～24h，觀察有無細菌生長，并進行血瓊脂平板菌落計數(shù)。血瓊脂平板生長菌落數(shù)乘以100即每毫升尿液的菌落數(shù)。根據(jù)菌落特征和涂片染色等報告結(jié)果。

20份標本分別采用“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基菌株鑒定及常規(guī)細菌培養(yǎng)、BD PhoenixTM細菌鑒定藥敏儀檢測兩種方法進行檢測。

1.3 判定標準

“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基通過血平板判定患者有無細菌感染。具體為何種細菌感染根據(jù)培養(yǎng)基表面的菌落形態(tài)及顏色等進行判定。培養(yǎng)48h血平板無菌落生長報告“無細菌生長”；血平板生長、麥康凱瓊脂不生長、革蘭染色報告革蘭陽性細菌，菌落數(shù)XX CFU/mL；血平板生長、麥康凱瓊脂生長，科瑪嘉ESBL顯色培養(yǎng)基生長直接鑒定報告：大腸桿菌呈紅色；克雷伯氏菌屬、腸桿菌屬、檸檬酸菌屬呈金屬藍；其他革蘭陰性菌有褐色暈環(huán)；血平板生長、科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基生長直接鑒定報告：白色念珠菌菌落呈綠色、翠綠色；熱帶念珠菌呈藍灰色、鐵藍色；克柔假絲酵母菌呈現(xiàn)粉紅色、模糊有微毛、菌落較大；光滑念珠菌呈現(xiàn)紫色；其他念珠菌呈現(xiàn)白色。

1.4 觀察指標

觀察并對比兩種培養(yǎng)方法的報告生成時間及診斷符合率。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS17.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)使用百分比（%）進行表示，計數(shù)資料采用c2檢驗。P<0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 鑒定結(jié)果比較

“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基檢測尿培養(yǎng)細菌初篩鑒定結(jié)果與常規(guī)細菌報告結(jié)果一致（表1）?；颊?、2、4和5尿標本分離菌株均為產(chǎn)超光譜β-內(nèi)酰胺酶的耐藥株。兩種方法比較，無統(tǒng)計學(xué)意義（Pearson c2=0.000，P=1.000），說明“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基與常規(guī)細菌培養(yǎng)鑒定方法具有相同準確度。

2.2 兩種方法檢驗周期比較

“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基方法比常規(guī)細菌培養(yǎng)方法提前一天或兩天報告結(jié)果（表2）。

3 討論

泌尿系感染（urinary tract infection，UTI）是臨床常見感染性疾病之一。美國每年有700萬人因泌尿系感染就診，100萬就診急診，10萬人住院治療[3-4]。住院患者泌尿系感染占35%[5]。約25%～50%健康女性曾患單純性泌尿系感染[6]。泌尿系感染也是小兒常見病[7]，且臨床表現(xiàn)不典型，美國每年新確診的泌尿系感染患兒占兒童總數(shù)2.4%～2.8%[8]。泌尿系感染已成為常見病、多發(fā)病，且發(fā)病率高、發(fā)病人群廣。

我國泌尿系感染病原菌以腸桿菌科細菌為主，占38.1%～77.3%，大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、糞腸球菌是感染的主要病原菌[9-14]。尿培養(yǎng)是診斷泌尿系感染的金標準[15]，但是耗時長（初次分離菌株需18～24h，再次鑒定需18～24h），縮短菌培養(yǎng)及藥敏試驗時間是研究關(guān)注重點之一。

2012年，衛(wèi)生部實施《抗菌藥物臨床應(yīng)用管理辦法》（衛(wèi)生部令第84號），加強醫(yī)療機構(gòu)抗菌藥物臨床應(yīng)用管理，規(guī)范抗菌藥物臨床應(yīng)用行為，促進臨床合理應(yīng)用抗菌藥物，控制細菌耐藥，保障醫(yī)療質(zhì)量和醫(yī)療安全。該條例指出二級以上醫(yī)院應(yīng)當(dāng)根據(jù)實際需要，建立符合實驗室生物安全要求的臨床微生物室，開展微生物培養(yǎng)、分離、鑒定和藥敏試驗等工作，提供病原學(xué)診斷和細菌耐藥技術(shù)支持，參與抗菌藥物臨床應(yīng)用管理[16]。因技術(shù)水平、經(jīng)濟條件和人力資源限制，基層單位自動化檢測儀器和快速檢測鑒定系統(tǒng)應(yīng)用受到限制。因此，細菌實驗診斷方法發(fā)展應(yīng)該強調(diào)應(yīng)用和滿足患者需求，本研究“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基涵蓋大部分細菌和真菌，分離和鑒定同時檢驗，18～24h可早期篩查耐藥菌株，提高檢驗報告周期。

本研究設(shè)計“三合一”快速初篩鑒定培養(yǎng)基，即麥康凱瓊脂、chromID ? ESBL產(chǎn)色培養(yǎng)基和科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基，是一種適合在基層醫(yī)院和社區(qū)開展、推廣、普及應(yīng)用的方法，具有快速、簡單、易操作優(yōu)點。該培養(yǎng)基也可用于痰、無菌體液等標本的快速初篩鑒定。

參 考 文 獻

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