劉敏　常紀(jì)　付寶慶

【摘要】探討尿絨毛膜促性腺激素檢查方法及臨床意義。免疫學(xué)方法簡(jiǎn)便、快速、靈敏、特異性強(qiáng)。人絨毛膜促性腺激素（hCG）可用于早孕診斷。正常育齡婦女hCG升高提示早孕。作為絨毛膜上皮細(xì)胞癌、葡萄胎的早期診斷指標(biāo)。可用于對(duì)絨毛膜上皮細(xì)胞癌、葡萄胎手術(shù)后化療效果觀察，是有效隨訪(fǎng)監(jiān)測(cè)的手段。

【關(guān)鍵詞】尿絨毛膜促性腺激素； 檢查；臨床意義

血液和尿液hCG檢測(cè)方法非常多，如酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、電化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)、放射免疫試驗(yàn)、乳膠凝集抑制試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)等。而目前臨床上應(yīng)用最為普遍的是尿液的單克隆抗體膠體金試驗(yàn)[1]。對(duì)2012年～2013年檢測(cè)100例尿絨毛膜促性腺激素臨床檢查及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 對(duì)2012年1月～2013年12月尿絨毛膜促性腺激素檢測(cè)100例。均為女性，年齡22～46歲，平均28歲。尿液以1500～2000r/min離心10min。晨尿hCG水平最高，接近血清水平，通常收集晨尿送檢。

1.2 方法 酶聯(lián)免疫吸附法，包被固相載體用的β-hCG基McAb。根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的β-hCG基的McAb。在HRP反應(yīng)體系中作底物（供氫體）的四甲基聯(lián)苯胺（TMB，目測(cè)呈蘭色或鄰苯二胺（OPD，呈現(xiàn)黃色）。在已包被抗β-hCG亞基McAb的聚乙烯反應(yīng)板微孔中加最適濃度（說(shuō)明書(shū)指定）酶標(biāo)記抗β-hCG亞基McAb 0.1ml，立即加尿或血清0.1ml。輕輕抖動(dòng)反應(yīng)板，或于混勻器上混勻30s，再置37℃20min。甩去孔內(nèi)反應(yīng)物，以蒸餾水沖洗6次，晾干。加底物溶液0.1ml，室溫放置5min，觀察。藍(lán)色（底物為T(mén)MB-H2O2時(shí)）或黃色（底物為OPD-H2O2時(shí)）為陽(yáng)性，無(wú)色為陰性。如需定量，可同時(shí)做一標(biāo)準(zhǔn)系列濃度，結(jié)果以IgC對(duì)吸光度值作圖，待測(cè)樣本濃度可從曲線(xiàn)中查出。

2 結(jié)果

HCG<5mIu/mL18例，HCG 5.1～2000mIu/ml58例，HCG2001～5000 mIu/ml23例，5001～1000 mIu/mL1例。

3 討論

HCG檢測(cè)的方法早期應(yīng)用生物學(xué)檢測(cè)，目前正被簡(jiǎn)便、快速、靈敏、特異性強(qiáng)的免疫學(xué)方法代替。膠乳凝集抑制試驗(yàn)（LAT）以HCG作為抗原注入兔子體內(nèi)，使其產(chǎn)生相應(yīng)抗體，當(dāng)這種抗體與HCG抗原相遇時(shí)發(fā)生免疫反應(yīng)，但此反應(yīng)不能為肉眼所見(jiàn)。利用化學(xué)方法將HCG抗原交聯(lián)在聚苯乙烯膠乳顆粒上，制成HCG膠乳抗原，此膠乳抗原與HCG抗體結(jié)合，產(chǎn)生肉眼可見(jiàn)的膠乳顆粒狀凝集。本法操作簡(jiǎn)便、價(jià)格便宜、快速（5min）、試劑易得[2]。但因靈敏度低（100～500IU/L）、特異性不高而趨淘汰。單克隆雙抗體酶免疫法首先將β-HCG單抗包被聚乙烯酶標(biāo)板小孔底部，加入被檢尿液（或HCG的標(biāo)準(zhǔn)品），被檢樣品中HCG抗原與包被在小孔底部的抗體結(jié)合，再加入特異性的酶標(biāo)β-HCG抗體，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。洗去過(guò)量的未結(jié)合酶標(biāo)抗體，加入酶作用底物及顯色劑顯色，顏色的深淺與被檢尿液中HCG含量成正比。此法靈敏度（20～50IU/L）高，可定量，臨床常用，適合批量檢測(cè)。不足是操作較復(fù)雜，所需時(shí)間較長(zhǎng)。單克隆抗體膠體金標(biāo)記免疫層析法，在試帶（纖維素膜）的特定位置，分別包被羊抗鼠IgG抗體、羊抗人HCG抗體，呈上下兩條線(xiàn)排列；另外試帶上還含有均勻分布的膠體金標(biāo)記人β-HCG單抗、膠體金標(biāo)記的鼠IgG抗原。檢測(cè)時(shí)將試帶浸入被測(cè)尿液后迅速取出，由于層吸作用，尿中的HCG抗原先與膠體金標(biāo)記的人β-HCG單抗結(jié)合，移行至特定位置即羊抗人HCG抗體檢測(cè)線(xiàn)時(shí)，形成金標(biāo)記β-HCG單抗-β-HCG抗原—羊抗人HCG抗體的雙抗體夾心式復(fù)合物，試帶即顯1條紫紅色線(xiàn)為陽(yáng)性；同時(shí)金標(biāo)記鼠IgG抗原隨尿上行至羊抗鼠IgG抗體時(shí)，形成金標(biāo)記鼠IgG抗原與羊抗鼠IgG抗體復(fù)合物，試帶也顯1條紫紅色線(xiàn)，為陰性對(duì)照即質(zhì)控線(xiàn)。本法簡(jiǎn)便快速（1～15min）、特異性強(qiáng)、靈敏度高（10～25 IU/L），可半定量，在受精后7～10d即可作出診斷，故臨床應(yīng)用廣泛。試帶顯紅色是由于膠體金的作用，膠體金是氯化金與還原劑反應(yīng)形成的一種膠體顆粒，其表面帶有負(fù)電荷，能吸附帶正電荷蛋白質(zhì)，被吸附在膠體金顆粒表面的蛋白質(zhì)（抗體）活性不會(huì)改變，它的顏色隨顆粒大小呈紅色到紫色變化[3]。放射免疫用閃爍計(jì)數(shù)器測(cè)定，靈敏度可達(dá)<21U/L，如果用于血清中HCG含量的測(cè)定，其結(jié)果比尿液標(biāo)本更準(zhǔn)確、更穩(wěn)定。由于放射免疫測(cè)定需放射性核素標(biāo)記，且放射性核素易污染環(huán)境，所需時(shí)間長(zhǎng)（2h），本法只適用于研究工作，臨床不常用。

妊娠后尿液hCG濃度增高，一般妊娠后35～40天時(shí)，hCG濃度可達(dá)到200ng/L以上，常用的尿hCG檢查即可得到陽(yáng)性結(jié)果。滋養(yǎng)層細(xì)胞腫瘤如葡萄胎、惡性葡萄胎、絨毛膜上皮細(xì)胞癌患者尿中hCG含量明顯高于正常孕婦；滋養(yǎng)層細(xì)胞腫瘤治療后，尿內(nèi)hCG含量明顯下降。流產(chǎn)診斷和監(jiān)察，自然或非自然原因終止妊娠后，檢測(cè)結(jié)果仍然提示弱陽(yáng)性，先兆流產(chǎn)和不全流產(chǎn)呈陽(yáng)性。完全流產(chǎn)呈陰性。診斷異位妊娠和宮外孕：hCG多為陽(yáng)性，宮外孕破裂后大部分患者轉(zhuǎn)為陰性。非滋養(yǎng)層腫瘤如畸胎瘤、睪丸間質(zhì)細(xì)胞癌、卵巢癌、子宮頸癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、肺癌同樣會(huì)引起hCG濃度增高，因此檢測(cè)結(jié)果必須由醫(yī)生綜合其他臨床癥狀及其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)后方可進(jìn)行綜合分析鑒別。

采集hCG陽(yáng)性且尿蛋白定性為陰性的尿液3～4份，混合后存放在4℃冰箱內(nèi)保存過(guò)夜。取出后離心，取上清液以化學(xué)交聯(lián)抗原和配套的抗血清做稀釋試驗(yàn)，測(cè)定hCG的效價(jià)。按所測(cè)定效價(jià)低1倍的稀釋度為準(zhǔn)，以生理鹽水稀釋尿液到此濃度，作為陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)控物。每批試驗(yàn)應(yīng)該設(shè)定陽(yáng)性和陰性對(duì)照，對(duì)照試驗(yàn)達(dá)到預(yù)期的結(jié)果時(shí)才能使用該批號(hào)尿試帶，進(jìn)行檢測(cè)和簽發(fā)報(bào)告。陽(yáng)性對(duì)照也可采用質(zhì)控液。每份尿液最好做雙份檢查，即以原濃度尿液和倍量稀釋后的尿液同時(shí)檢查，兩者同為陽(yáng)性時(shí)為真陽(yáng)性，可發(fā)結(jié)果；原濃度陽(yáng)性，稀釋尿液為陰性時(shí)，可能為弱陽(yáng)性反應(yīng)或促黃體生成激素（LH）增高等引的假陽(yáng)性反應(yīng)。

【參考文獻(xiàn)】

[1] 郎江明.臨床免疫診斷學(xué).廣州：廣東科學(xué)技術(shù)出版社，2003，497-498.

[2] 張迎春，賈翠英，王娟.血清β-HCG檢測(cè)異位妊娠的診斷意義.放射免疫學(xué)雜志，2001，14（6）：167.

[3] 林敏.人絨毛膜促性腺激素檢測(cè)及臨床應(yīng)用.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2009，6：281-282.