袁 媛，甘 雨，王 菲，黃 赫，杜佳林，李顯華

（遼寧省中醫(yī)藥研究院，遼寧 沈陽(yáng) 110034）

腫瘤是威脅人類健康的重大疾病之一，目前放化療抑制腫瘤的同時(shí)對(duì)人體有很大的傷害。較多的研究報(bào)道表明人參的抗腫瘤作用明顯，紅參的抗腫瘤活性優(yōu)于人參。為探討黑參的抗腫瘤活性，筆者通過(guò)實(shí)體瘤S180生長(zhǎng)的抑制作用、HepA肝癌腹水瘤的生命延長(zhǎng)作用以及免疫功能調(diào)整作用，對(duì)黑參提取物、紅參提取物的抗腫瘤活性進(jìn)行了比較，確定了黑參的抗腫瘤療效。

1 實(shí)驗(yàn)材料

動(dòng)物與瘤株：昆明種小鼠270只，體質(zhì)量18～22g，雌雄各半，購(gòu)自遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)SCXK（遼）2010-0001。S180瘤株、HepA肝癌腹水瘤均購(gòu)于上海軒研生物科技有限公司。

儀器：超凈工作臺(tái)（型號(hào)class Ⅱ TYPE A2 BSC系列生物安全柜，北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司生產(chǎn)）。

藥品：消癌平（南京圣和藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)201304241），環(huán)磷酰胺（通化茂祥制藥有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)130201），黑參提取物（低、中、高劑量）自制得到[1，2]，紅參提取物（低、中、高劑量）自制得到。

2 實(shí)驗(yàn)方法[3，4]

2.1 實(shí)體瘤S180抑瘤作用

荷瘤小鼠造模。將S180瘤株用生理鹽水以1000r/min經(jīng)10min離心洗滌2次后，洗掉細(xì)胞中胰蛋白酶和培養(yǎng)液中血清等成分，用臺(tái)盼藍(lán)染色法計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)，用生理鹽水將腫瘤細(xì)胞稀釋成1×106～1×107濃度，進(jìn)行傳代。無(wú)菌條件下取S180腹水瘤小鼠，抽取傳代第8日的荷瘤小鼠的腹水置于盛有生理鹽水的帶塞試管中，按瘤株與生理鹽水1∶3稀釋，每個(gè)接種點(diǎn)以0.2mL，1×106～1×107個(gè)細(xì)胞數(shù)，用1mL的皮下注射器注射接種到右前肢腋窩處腋下部皮下，共90只，整個(gè)操作于30min內(nèi)完成。

給藥及計(jì)算抑瘤率。接種24h后將小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為9組，每組10只。環(huán)磷酰胺西藥對(duì)照組，給藥濃度為25mg/kg；消癌平中藥對(duì)照組，給藥濃度為25mg/kg；6個(gè)給藥組分別給予紅參、黑參提取物低、中、高劑量，折合生藥量分別為13.6mg/kg、27.2mg/kg和40.8mg/kg；模型對(duì)照組給予同體積的蒸餾水。以上各組均為灌胃給藥，0.8mL/20g，1日1次，連續(xù)給藥10日，荷瘤小鼠末次給藥24h后稱體質(zhì)量，脫臼處死，剝離取下腋下腫瘤并用濾紙吸干，立即稱取瘤重，計(jì)算抑瘤率，進(jìn)行療效評(píng)價(jià)。計(jì)算公式為腫瘤生長(zhǎng)抑制率（%）=（空白對(duì)照組平均瘤質(zhì)量－給藥組平均瘤質(zhì)量）/空白對(duì)照組平均瘤質(zhì)量×100%。

2.2 HepA肝癌腹水瘤生命延長(zhǎng)作用

荷瘤小鼠造模。無(wú)菌條件下抽取傳代第8日的荷瘤小鼠的腹水置于盛有生理鹽水的帶塞試管中，按瘤株與生理鹽水1∶3稀釋，作為HepA小鼠肝癌腹水瘤細(xì)胞懸液。用一次性注射器或經(jīng)高壓消毒的注射器吸取HepA小鼠肝癌腹水瘤細(xì)胞懸液0.2mL，于經(jīng)碘酊、乙醇消毒過(guò)的腹部皮膚作腹腔注射。共90只，整個(gè)操作于30min內(nèi)完成。

給藥及計(jì)算生命延長(zhǎng)率。接種24h后將小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為9組，每組10只。環(huán)磷酰胺西藥對(duì)照組，給藥濃度為25mg/kg；消癌平中藥對(duì)照組，給藥濃度為25mg/kg；6個(gè)給藥組分別給予紅參、黑參提取物低、中、高劑量，折合生藥量分別為13.6mg/kg、27.2mg/kg和40.8mg/kg；模型對(duì)照組給予同體積的蒸餾水。以上各組均為灌胃給藥，0.8mL/20g/次/日，連續(xù)給藥10日，荷瘤小鼠末次給藥24h后稱重，從第11天開始停止給藥，繼續(xù)飼養(yǎng)觀察，在觀察期間記錄小鼠的一般情況（飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物、中毒表現(xiàn)和死亡情況等）。計(jì)算存活時(shí)間及生命延長(zhǎng)率。計(jì)算公式為生命延長(zhǎng)率（%）=（給藥組平均生存時(shí)間－空白對(duì)照組平均生存時(shí)間）/空白對(duì)照組平均生存時(shí)間×100%。

2.3 免疫功能調(diào)整作用

將接種S180瘤株24h的小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為9組，每組10只。環(huán)磷酰胺西藥對(duì)照組，給藥濃度為25mg/kg；消癌平中藥對(duì)照組，給藥濃度為25mg/kg；6個(gè)給藥組分別給予紅參、黑參提取物低、中、高劑量，折合生藥量分別為13.6mg/kg、27.2mg/kg和40.8mg/kg；模型對(duì)照組給予同體積的蒸餾水。以上各組均為灌胃給藥0.8mL/20g，日1次，連續(xù)給藥10日，荷瘤小鼠末次給藥24h后稱重，斷尾取血，測(cè)白細(xì)胞數(shù)。之后處死小鼠，摘取胸腺、脾臟稱重，計(jì)算胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)。計(jì)算公式為胸腺指數(shù)=（胸腺質(zhì)量/小鼠質(zhì)量）×10，脾臟指數(shù)=（脾臟質(zhì)量/小鼠質(zhì)量）×10

2.4 統(tǒng)計(jì)分析

采用spss軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，數(shù)據(jù)以（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

各組對(duì)S180實(shí)體瘤抑制作用見表1。

表1 各組對(duì)S180實(shí)體抑瘤作用

各組對(duì)HepA肝癌腹水瘤的生命延長(zhǎng)作用見表2。

表2 各組對(duì)HepA肝癌腹水瘤生命延長(zhǎng)

各組免疫功能調(diào)整作用見表3。

表3 各組胸腺及脾臟指數(shù)比較

4 討 論

常規(guī)化療藥物多為細(xì)胞毒性藥物，在殺傷瘤細(xì)胞同時(shí)也損害機(jī)體的免疫系統(tǒng)，而免疫功能低下又可促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，因此腫瘤的發(fā)生與機(jī)體的免疫狀況密切相關(guān)。因此，通過(guò)用一些增強(qiáng)免疫功能的藥物可使腫瘤消退或延緩其發(fā)展。

人參（Panax ginseng C.A.Meyer）為五加科植物人參的干燥根，是亞洲常見藥材，具有很高的藥用和歷史文化價(jià)值，被譽(yù)為“草藥之王”，在科學(xué)研究領(lǐng)域和國(guó)際市場(chǎng)一直占有極其重要的地位，被廣泛應(yīng)用。其性平，味甘、微苦，微溫，用于大補(bǔ)元?dú)?、?fù)脈固脫、補(bǔ)脾益肺、生津止渴、安神益智。現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)和藥理學(xué)研究表明，人參具有提高機(jī)體免疫力、抗疲勞、抗腫瘤、降血糖以及抗炎等多種活性，在醫(yī)學(xué)及養(yǎng)生方面具有可觀的價(jià)值。近年來(lái)，各種各樣的人參炮制品作為功能食品用于飲食，其中包括白參、紅參、黑參等。黑參是利用傳統(tǒng)的九蒸九曝炮制方法將人參反復(fù)蒸制烘干而得到的一種人參深加工品，是繼紅參后的又一人參新產(chǎn)品[1]。黑參比白參和紅參有更強(qiáng)的抗腫瘤、抗炎、提高免疫力等生物活性。實(shí)驗(yàn)表明，黑參高劑量組可以抑制荷瘤小鼠S180實(shí)體瘤腫瘤生長(zhǎng)，延長(zhǎng)HepA肝癌腹水瘤小鼠的存活時(shí)間，改善免疫功能指標(biāo)。提示黑參在抗腫瘤以及腫瘤免疫調(diào)節(jié)方面具有進(jìn)一步研究和開發(fā)的價(jià)值。

[1] 袁媛，徐榮培.人參新炮制品—黑參的研究進(jìn)展[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2013，31（11）：2379-2381.

[2] 袁媛，于艷，徐榮培.HPLC法測(cè)定19個(gè)人參新炮制品—黑參樣品中的人參皂苷含量[J].遼寧中醫(yī)雜志，2013，40（10）：1993-1995.

[3] 徐淑云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：1766.

[4] 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：1006.