布仁圖亞 斯欽圖

(1赤峰市蒙醫(yī)中醫(yī)醫(yī)院 內(nèi)蒙古赤峰 024000;2內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院 內(nèi)蒙古通遼 028000)

不同施灸方法對(duì)模型大鼠衰老脾臟和胸腺指數(shù)以及學(xué)習(xí)能力、記憶力的影響研究

布仁圖亞1斯欽圖2?

(1赤峰市蒙醫(yī)中醫(yī)醫(yī)院 內(nèi)蒙古赤峰 024000;2內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院 內(nèi)蒙古通遼 028000)

目的：通過以胃穴為切入點(diǎn)，探討不同施灸方法(正交實(shí)驗(yàn)L9(34))方法)對(duì)衰老大鼠模型篩選。方法：將110只SD大鼠隨機(jī)分空白對(duì)照組、模型對(duì)照組和治療組(1-9組)，采用D-半乳糖造模方法，觀察和檢測(cè)體重變化、脾臟和胸腺指數(shù)以及學(xué)習(xí)能力，記憶力等指標(biāo)。結(jié)果：脾臟和胸腺指數(shù)以及體力、記憶力等相關(guān)指標(biāo)的觀察發(fā)現(xiàn)，治療一、二、三、四、五、六、七、八、九之間的胸腺和脾臟指數(shù)、體力和記憶力等均無顯著差異。結(jié)論：1.D-半乳糖衰老模型適用于不同灸療法抗衰老篩選試驗(yàn)研究領(lǐng)域。2.闡明不同施灸方法抗衰老生物學(xué)方法的基礎(chǔ)。為下一步多因素，多水平研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

蒙醫(yī)灸療法;抗衰老;不同施灸方法

1.材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物：110只純種4月齡SD大鼠，體重為雄性(304±30)g、雄性(376±40)g、雌雄各半。

1.1.2 器材：755B紫外-可見分光光度機(jī)、固定熱水盒、電子分析天平、高速冷凍離心機(jī)、4-20 0C和-80 0C冰箱、水迷宮、游泳盒。

1.1.3 試劑及施灸器：AUY120型電子天平、MORRIS水迷宮視屏跟蹤分析機(jī)、D-半乳糖(上?？笊锛夹g(shù)有限公司，編號(hào)：T0047)、艾灸由北京中醫(yī)醫(yī)藥大學(xué)提供。

1.2 方法

1.2.1 分組：將110只SD大鼠按體重隨機(jī)分成11組。分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、治療組(用正交試驗(yàn)L9(34)設(shè)計(jì)組為：第一、二、三、四、五、六、七、八、九組)。造模前將大鼠雌雄分開、在干凈舒適環(huán)境中飼養(yǎng)。每天將更換顆粒資料飲水和窩墊。試驗(yàn)第六周開始分別對(duì)所進(jìn)資料和飲水量進(jìn)行記錄。

1.2.2 造模：成正常對(duì)照組外均用D-半乳糖按每周體重每日150mg/kg的比例頸皮下注射［1］，正常對(duì)照組注射同等劑量生理鹽水。在造模期間每周稱一次大鼠體重，并觀察大鼠運(yùn)動(dòng)舉止和皮毛的顏側(cè)色等外部特征。造模時(shí)間為6周。出現(xiàn)大鼠皮毛顏色變黃脫落，眼光變呆，動(dòng)作緩慢，出現(xiàn)無精打采、駝背、怕冷，體重增加不明顯等外部特征，與文獻(xiàn)報(bào)道一致［2-5］，即造模成功。

1.2.3 施灸：從7周開始施灸，其中對(duì)照組和模型對(duì)照組只給固定條件，不做任何處理。對(duì)灸療組參照文獻(xiàn)在大鼠胃穴(在大鼠第12脊椎下凹處)剪去穴位周圍鼠毛［6］，進(jìn)行施灸。時(shí)間為5min、10min、15min，直徑為0.1cm、0.2cm、0.3cm，灸墊為0.8cm、1.0cm、1.2cm，7天為一療程，隔一天灸一次，共灸三個(gè)療程。

1.2.4 水迷宮試驗(yàn)：灸療結(jié)束前一周進(jìn)行該試驗(yàn)用于大鼠記憶能力的檢驗(yàn)，試驗(yàn)前進(jìn)行培訓(xùn)。水深度37cm，水溫度為26±℃，電腦系統(tǒng)只能認(rèn)同紅色標(biāo)志，在大鼠的頭上標(biāo)紅色，采用環(huán)形水池，水池的1/4中放入低于1cm左右的逃避平臺(tái)。分A、B、C、D等四個(gè)區(qū)，每次不同的四個(gè)區(qū)開始放入水中開始訓(xùn)練，模型大鼠和空白對(duì)照組大鼠預(yù)先訓(xùn)練4天，然后開始正常試驗(yàn)，每支大鼠每天早晚各訓(xùn)練2次，每次120s或者當(dāng)大鼠逃到水中的逃避平臺(tái)時(shí)立即結(jié)束。檢測(cè)指標(biāo)：逃避時(shí)間每只大鼠從放入水中開始到逃到逃避平臺(tái)時(shí)的時(shí)間(電腦系統(tǒng)自動(dòng)記錄時(shí)間)。

1.3 標(biāo)本收集及檢測(cè)方法

采用斷頭取血方法，將取脾臟和胸腺，用生理鹽水洗干凈后進(jìn)行稱重。計(jì)算出脾(胸腺)指數(shù)公式為：脾(胸腺)=脾(胸腺)重量(mg)/體重(g)。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用正交設(shè)計(jì)助手v3.1軟件處理。

2.結(jié)果

2.1 造模狀況

正常對(duì)照組與模型對(duì)照組比較，體重有明顯的差異(P＜0.01)，表明造模后模型對(duì)照組體重增長變化緩慢，結(jié)果見表1。

造模后各灸療組與模型組大鼠體重比較，各灸療組大鼠體重增加比模型組快(P＜0.05)，說明造模成功后模型組大鼠體重增長受限，結(jié)果見表2。

表1 造模3周后正常對(duì)照組與模型對(duì)照組大鼠體重比較(X±S，n=10)

表2 造模后各灸療組和模型對(duì)照組大鼠體重比較(X±S，n=10)

除此之外，我們還觀察到，模型大鼠動(dòng)作比正常對(duì)照組拜年遲緩，毛色枯黃，精神萎靡不振等外部特征。

2.2 試驗(yàn)方法

按照L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)，并將測(cè)定結(jié)果填于表3中，結(jié)果見表3。

表3 胸腺和脾臟重量指數(shù)優(yōu)化L9(34)表及實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3 結(jié)果

從直觀分析及方差分析可知：胸腺和脾臟重量優(yōu)化。A、B、C各因素水平之間均無顯著性差異，最佳胸腺條件為A2B2C2即為：用10min時(shí)間0.2cm灸墊1.0的直徑。最佳脾臟條件為A2B1C1即為：用10min時(shí)間0.1cm灸墊0.8的直徑。結(jié)果見表4。

表4 胸腺和脾臟重量指數(shù)方差分析標(biāo)記n=2 F0.05(2.2)=19 F0.01(2.2)=99

2.4 試驗(yàn)方法

按照L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)，并將測(cè)定結(jié)果填于表5中，結(jié)果見表5。

表5 游泳和水迷宮試驗(yàn)的優(yōu)化L9(34)表及實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.5 結(jié)果

從直觀分析及方差分析可知：體力和記憶力的優(yōu)化，A、B、C各因素水平之間均無顯著性差異，最佳體力的條件為A2B2C2即為：用10min時(shí)間0.2cm灸墊1.0cm的直徑。最佳記憶力的條件為A1B2C3即為：用5min時(shí)間0.2cm灸墊1.2的直徑。結(jié)果見表6。

表6 游泳和水迷宮試驗(yàn)的方差分析標(biāo)記n=2 F0.05(2.2)=19 F0.01(2.2)=99

3.結(jié)論與討論

結(jié)論：根據(jù)上述試驗(yàn)，不同施救方法對(duì)胸腺的重量最佳時(shí)間為10min灸墊為0.2cm直徑為1.0cm，脾臟重量最佳時(shí)間為10min灸墊為0.1cm直徑為0.8cm，體力最佳時(shí)間為10min灸墊為0.2cm直徑為1.0cm，記憶力最佳時(shí)間為10min灸墊為0.2cm直徑為1.0cm。

討論：蒙醫(yī)不同的灸療法施灸后具有不同的提高免疫力功能。本實(shí)驗(yàn)通過正交設(shè)計(jì)對(duì)、胸腺和脾臟、游泳和水迷宮指數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化，并多個(gè)因素、多個(gè)水平研究提供了試驗(yàn)依據(jù)。

［1］斯欽圖，烏云格日樂."胃穴"，"火降穴"施灸對(duì)功能性消化不良大鼠的影響及其組穴原理［J］.針灸臨床雜志，2008，3，(24)：163 -165.

［2］徐智，吳國明，錢桂生.大鼠衰老模型的初步建立［J］.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，4(25)：9-11.

［3］博·阿古拉.蒙醫(yī)傳統(tǒng)療法大成［M］.赤峰：內(nèi)蒙古科學(xué)技術(shù)出版社，2000，3：172-174.

［4］朱亞診，朱虹光.D-半乳糖致衰老動(dòng)物模型的建立及其檢測(cè)方法［J］.針灸臨床雜志，2010，3，(14)：160-161.

［5］斯欽圖，博·阿古拉，于天源，等.蒙醫(yī)灸療法抗衰老二三穴組穴配伍規(guī)律試驗(yàn)研究［J］，2010，12(6)：48-49.

［6］烏云格日樂，斯欽圖.蒙醫(yī)灸療的保健作用及其機(jī)理［J］.中國民族醫(yī)藥雜志，2007，4(4)：122-124.

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1009-6019(2015)03-0016-02

布仁圖亞，碩士，赤峰市蒙醫(yī)中醫(yī)醫(yī)院蒙醫(yī)高血壓科住院醫(yī)師

斯欽圖，博士，內(nèi)蒙古民族大學(xué)教授、主任醫(yī)師