趙靈燕，吳赟竑，王杭花，周彩琴，張紅麗，張傳亮，吳雪軍，周 蕾，倪柏鋒，徐 輝*

(1.浙江省動物疫病預(yù)防控制中心，浙江杭州310018;2.永康市動物疫病預(yù)防控制中心)

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的以偶蹄動物為主要感染對象的急性、熱性、高度傳染性疫病，世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為必須通報(bào)疫病，我國農(nóng)業(yè)部將其列為一類動物疫?。?］。疫苗免疫是預(yù)防該病的重要措施之一，免疫抗體水平檢測作為疫苗免疫質(zhì)量評估手段在我國已廣泛使用。

正向間接血凝(IHA)、液相阻斷ELISA(LpB)和VP1 結(jié)構(gòu)蛋白ELISA(VP1)試驗(yàn)是目前最常用的口蹄疫O 型抗體檢測方法，但在實(shí)際應(yīng)用過程中仍存在某些問題，主要是不同檢測方法的檢測結(jié)果存在差異，造成結(jié)果解釋困難。

為更好分析檢測結(jié)果，科學(xué)理解和選擇檢測方法，本試驗(yàn)選擇了3 種檢測方法進(jìn)行比對試驗(yàn)，對口蹄疫O 型抗體不同檢測方法之間的一致性和差異性結(jié)果進(jìn)行了研究分析。

1 材料與方法

1.1 待檢血清豬、牛、羊血清共479份，其中豬血清100份，牛血清99份，羊血清100份和2 個規(guī)模豬場的日常檢測血清樣品180份。

1.2 檢測試劑

1.2.1 IHA 方法抗原、陽性血清、陰性血清 由中國農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，批號為20131129、20120526。

1.2.2 LpB 方法試劑盒 由中國農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，批號為2011103101，2012052901。

1.2.3 進(jìn)口阻斷ELISA(VDP)試劑盒 由韓國金諾公司生產(chǎn)，批號為1071601SD06，1071601HS387。

1.2.4 VP1 試劑盒 由上海某公司生產(chǎn)，批號為201012004。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn) 按照各試劑盒說明操作，其中IHA、LpB、VP1 抗體檢測結(jié)果按照農(nóng)業(yè)部監(jiān)測計(jì)劃確定。

正向間接血凝抗體效價≥25判定為免疫合格;

液相阻斷ELISA 抗體效價≥26判定為免疫合格;

VP1 結(jié)構(gòu)蛋白ELISA 抗體效價≥25判定為免疫合格;

進(jìn)口阻斷ELISA(VDP)抗體陽性即判定為免疫合格。

2 結(jié)果與分析

2.1 日常檢測樣品檢測結(jié)果

2.1.1 抗體合格率比較 詳見表1、表2。

表1 采用三種試劑盒檢測O 型口蹄疫抗體合格/陽性率比較

表2 采用三種試劑盒檢測不同動物種類的O 型口蹄疫抗體合格/陽性率比較

由表1可見，2 種方法3 種試劑盒檢測日常保存家畜血清樣品結(jié)果，采用IHA 方法檢測合格率最低，為65.89%;采用VDP 方法檢測合格率最高，為87.96%。

由表2可見，三種不同動物采用不同檢測方法的比較結(jié)果，豬血清樣品LpB 方法合格率和VDP 方法陽性率一致性較好(分別為85.00%和96.00%)，牛、羊IHA 方法和LpB 方法抗體合格率一致性較好(分別為84.00%和80.81%;65.00%和67.00%)。

2.1.2 不同方法抗體檢測結(jié)果的符合率比較 考慮到世界動物衛(wèi)生組織(OIE)標(biāo)準(zhǔn)診斷手冊中對O型口蹄疫抗體檢測方法規(guī)定，病毒中和試驗(yàn)、液相阻斷ELISA、間接ELSIA［2］，本研究以LpB 方法(國際貿(mào)易指定試驗(yàn))為金標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果LpB 和VDP 方法符合率為89%，IHA 和LpB 方法符合率為47%(詳見表3－1 和表3－2)。

表3－1 LpB 和VDP 方法檢測結(jié)果的一致性比較

表3－2 LpB 和IHA 方法檢測結(jié)果的一致性比較

2.2 不同種類疫苗免疫豬群后的O 型口蹄疫抗體檢測結(jié)果比較 目前，我國采用的O 型口蹄疫疫苗有滅活疫苗和合成肽疫苗兩類。

本試驗(yàn)研究分別選定采用O 型口蹄疫緬甸98株疫苗和O 型口蹄疫合成肽疫苗免疫的豬場各1家。每場選定30 頭豬作為試驗(yàn)豬，O 型口蹄疫緬甸98 株疫苗免疫豬場首免40日齡，二免70日齡;O型口蹄疫合成肽疫苗免疫豬場首免70日齡，二免100日齡。首免日、首免后30 d(二免日)、二免后20 d 采集血清樣品進(jìn)行檢測。

免疫O 型口蹄疫緬甸98 株疫苗的豬群具體檢測結(jié)果見表4，免疫O 型口蹄疫合成肽疫苗的豬群具體檢測結(jié)果見表5。

表4 不同免疫水平條件下二種試劑盒對O 型口蹄疫緬甸98 株滅活疫苗抗體合格/陽性率的結(jié)果比較

表5 不同免疫水平條件下四種試劑盒對O 型口蹄疫合成肽疫苗抗體合格/陽性率的結(jié)果比較

3 小結(jié)與討論

3.1 免疫疫苗的種類與抗體檢測方法的選擇 本次試驗(yàn)結(jié)果表明，IHA 方法不適用于豬群合成肽口蹄疫疫苗免疫效果評估;盡管目前各地在免疫效果監(jiān)測評估中常用的是VP1 抗體檢測方法，LpB 抗體和VDP 抗體同樣可以作為合成肽疫苗免疫效果評估的依據(jù)。

試驗(yàn)結(jié)果還發(fā)現(xiàn)部分地區(qū)豬群血清樣品免疫抗體效價低的原因，可能與部分豬場存在口蹄疫濃縮滅活苗與合成肽疫苗免疫交替使用有關(guān)。合成肽疫苗免疫的血清樣品如果采用IHA 檢測抗體，無法反映正常的免疫質(zhì)量;故在評估口蹄疫免疫質(zhì)量時，了解和掌握被采樣畜群的疫苗免疫種類和免疫次數(shù)，再選擇正確的抗體檢測方法免疫評估免疫質(zhì)量極其重要。

3.2 三種方法的應(yīng)用特點(diǎn)分析 根據(jù)本試驗(yàn)，采用IHA、LpP、VDP 方法檢測O 型口蹄疫抗體評估免疫質(zhì)量，各有利弊，各地可根據(jù)具體情況，科學(xué)選用。

IHA 方法成本較低，操作簡單，反應(yīng)時間短，既可定性又可定量，適用于基層免疫效果評估，但試劑生產(chǎn)供應(yīng)不穩(wěn)定，且稀釋液和抗原穩(wěn)定性較差。

LpB 成本較低，試劑盒穩(wěn)定性較好，既可定性又可定量，適用于免疫效果評估，但操作復(fù)雜，反應(yīng)時間較長。

VDP 則穩(wěn)定性較好，操作簡單，反應(yīng)時間短，可定性，但成本較高，不能用于定量檢測。

目前LpB 方法檢測口蹄疫抗體是國際上公認(rèn)的方法，也是我國國家標(biāo)準(zhǔn)中確定的方法，以LpB方法為金標(biāo)準(zhǔn)，LpB 和VDP 符合率為89%，Kappa值0.89，IHA 和LpB 符合率只有47%，Kappa 值0.43，說明兩種ELISA 方法一致性極強(qiáng)，而IHA 與ELISA 方法的一致性中等，不具有平行相關(guān)性，造成這種差異的原因可能與抗原的特異性、敏感性以及被檢測抗體的成份含量與抗原檢測類型等因素有關(guān)，值得進(jìn)一步研究探討［3］。

3.3 O型口蹄疫緬甸98 株疫苗免疫豬場抗體消長規(guī)律的一致性 通過對某豬場免疫豬群的連續(xù)檢測表明，IHA 方法與常規(guī)疫苗的免疫抗體消長規(guī)律更為符合，且操作簡單，適合基層使用。

其主要問題是判定結(jié)果時需要一定的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，帶有一定的主觀性［4］。

［1］吳清民.獸醫(yī)傳染病學(xué)［M］.北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2000.

［2］世界動物衛(wèi)生組織著，農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)局譯.哺乳動物、鳥、蜜蜂A 類和B 類疾病診斷試驗(yàn)和疫苗標(biāo)準(zhǔn)手冊［M］.北京:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社，2002.

［3］周家喜，鄧銓濤，余波，等.豬口蹄疫免疫抗體不同檢測方法的對比試驗(yàn)［J］.中國畜禽種業(yè)，2009，5(7):149－151.

［4］李潤成，羅衛(wèi)強(qiáng)，劉雪松，等.三種試劑盒檢測豬O 型口蹄疫抗體的比較［J］.湖南畜牧獸醫(yī)，2007(3):9－11.