楊健 逄宇 趙雁林 張?zhí)烊A 王西娣 陳美齡 李妍 王蕊

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·論著·

耐多藥結(jié)核分枝桿菌對(duì)環(huán)絲氨酸、對(duì)氨基水楊酸的耐藥性及其與基因型關(guān)系分析

楊健 逄宇 趙雁林 張?zhí)烊A 王西娣 陳美齡 李妍 王蕊

目的 評(píng)價(jià)耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株對(duì)環(huán)絲氨酸(Cs)和對(duì)氨基水楊酸(PAS)兩種二線(xiàn)抗結(jié)核藥物的耐藥性并分析耐藥表型與基因型之間的關(guān)聯(lián)，為我國(guó)耐多藥結(jié)核病的治療提供科學(xué)依據(jù)。方法 從2007年全國(guó)耐藥基線(xiàn)調(diào)查點(diǎn)收集的菌株中選取196株耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株，采用微孔板Alamar blue顯色法分別測(cè)定對(duì)Cs和PAS的最低抑菌濃度(MIC)，并采用間隔區(qū)寡核苷酸分型法(Spoligotyping)對(duì)其進(jìn)行基因分型。北京基因型與非北京基因型對(duì)Cs和PAS耐藥率比較采用卡方檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果 196株耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株中對(duì)Cs耐藥為44株，耐藥率為22.4%(44/196)；對(duì)PAS耐藥為34株，耐藥率為17.3%(34/196)。在耐Cs的耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株中北京基因型為34株，耐藥率為21.0%(34/162)；34株非北京基因型菌株中耐Cs為10株，耐藥率為29.4%(10/34)；兩者耐藥率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.15，P>0.05)。在耐PAS的耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株中北京基因型為26株，耐藥率為16.0%(26/162)；34株非北京基因型菌株中耐PAS為8株，耐藥率為23.5%(8/34)；兩者耐藥率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.10，P>0.05)。結(jié)論 我國(guó)耐多藥結(jié)核分枝桿菌對(duì)二線(xiàn)抗結(jié)核藥物Cs和PAS的耐藥率處于較高水平。北京基因型家族是我國(guó)耐多藥結(jié)核分枝桿菌中主要流行的菌株，北京基因型與非北京基因型的耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株對(duì)Cs和PAS兩種二線(xiàn)抗結(jié)核藥物耐藥率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)核分枝桿菌; 抗藥性,多種,細(xì)菌; 環(huán)絲氨酸； 氨基水楊酸； 基因型

耐藥結(jié)核分枝桿菌的出現(xiàn)，特別是耐多藥結(jié)核病 (至少對(duì)異煙肼和利福平同時(shí)耐藥的結(jié)核病)患者的出現(xiàn)是造成結(jié)核病疫情居高不下的重要原因之一。我國(guó)是全球22個(gè)結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家之一，也是全球27個(gè)耐藥結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家之一[1]。根據(jù)WHO《全球結(jié)核病控制2010年報(bào)》估算，我國(guó)結(jié)核病年發(fā)病患者例數(shù)僅次于印度，居世界第二位，而耐藥結(jié)核病患者例數(shù)居世界首位[2]。全國(guó)結(jié)核病耐藥性基線(xiàn)調(diào)查報(bào)告(2007—2008)顯示：涂陽(yáng)肺結(jié)核患者分離的結(jié)核分枝桿菌耐多藥率為8.32%，廣泛耐藥率為0.68%，尤以復(fù)治患者的耐藥性為嚴(yán)重(耐多藥率為25.64%，廣泛耐藥率為2.06%)[3]。隨著耐多藥結(jié)核病患者的日趨增多，異煙肼和利福平等一線(xiàn)抗結(jié)核藥物常不能滿(mǎn)足臨床治療的需要，在我國(guó)耐多藥結(jié)核病的治療主要依靠二線(xiàn)抗結(jié)核藥物，其中阿米卡星(Am)、卷曲霉素(Cm)、氧氟沙星(Ofx)等藥物在治療耐多藥結(jié)核病中起著非常重要的作用,而中國(guó)對(duì)以上二線(xiàn)抗結(jié)核藥物耐藥性研究較為普遍，但目前尚缺乏耐多藥結(jié)核病患者對(duì)環(huán)絲氨酸(Cs)的耐藥性的分析。近年來(lái)，“北京基因型家族”菌株在結(jié)核分枝桿菌的研究中受到廣泛關(guān)注。這些菌株傳播廣泛，有時(shí)可引起大范圍的結(jié)核病暴發(fā)，在某些情況下又與耐藥性有聯(lián)系。因此筆者選取2007年全國(guó)耐藥基線(xiàn)調(diào)查點(diǎn)收集分離的196株耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株，主要探討Cs及對(duì)氨基水楊酸(PAS)兩種二線(xiàn)抗結(jié)核藥物的耐藥性及耐藥表型與基因型之間的關(guān)系。

材料和方法

一、菌株來(lái)源

2007年全國(guó)耐藥基線(xiàn)調(diào)查點(diǎn)收集的部分菌株，經(jīng)羅氏培養(yǎng)、生化鑒定并進(jìn)行比例法藥敏試驗(yàn)鑒定為耐多藥結(jié)核分枝桿菌的菌株，共收集菌株196株。其來(lái)源分布見(jiàn)表1，標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv來(lái)源于國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室菌株庫(kù)保存標(biāo)準(zhǔn)株。

二、試劑和培養(yǎng)基來(lái)源

6種藥物敏感性試驗(yàn)(簡(jiǎn)稱(chēng)“藥敏試驗(yàn)”)培養(yǎng)基和對(duì)硝基苯甲酸(PNB)培養(yǎng)基、噻吩-2-羧酸肼(TCH)培養(yǎng)基、改良羅氏培養(yǎng)基(L-J)均購(gòu)自珠海貝索生物技術(shù)有限公司，藥粉購(gòu)自美國(guó)Sigma-Aldrich公司，7H9液體培養(yǎng)基(7H9粉、OADC)購(gòu)自美國(guó)BD公司，Alamar blue顯色液購(gòu)自美國(guó)BIO-RAD公司。

表1 196株耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株來(lái)源分布情況

三、方法

(一)藥敏試驗(yàn)及菌種鑒定

藥敏試驗(yàn)及分枝桿菌菌種鑒定按照文獻(xiàn)[4]操作，藥敏試驗(yàn)采用比例法，培養(yǎng)基內(nèi)藥物終濃度分別為異煙肼(INH)0.2 μg/ml、利福平(RFP)40 μg/ml、乙胺丁醇(EMB)2 μg/ml、鏈霉素(Sm)4 μg/ml、卡那霉素(Km)30 μg/ml、氧氟沙星(Ofx)2 μg/ml。采用PNB生長(zhǎng)試驗(yàn)和TCH生長(zhǎng)試驗(yàn)對(duì)分枝桿菌進(jìn)行菌種鑒定，培養(yǎng)基中PNB濃度為500 mg/ml、TCH濃度為5 mg/ml。

(二)Cs和PAS的最低抑菌濃度(MIC)測(cè)定

采用微孔板Alamar blue顯色法，操作方法參照文獻(xiàn)[5]，使用7H9液體培養(yǎng)基(7H9∶OADC=9∶1)，MIC測(cè)定的藥物濃度：Cs為0.5～512 μg/ml，PAS為0.25～256 μg/ml。藥物臨界值參照文獻(xiàn)[5]推薦的臨界濃度，Cs為2.5 μg/ml，PAS為2 μg/ml。取改良羅氏培養(yǎng)基中傳代3周后生長(zhǎng)良好的菌落進(jìn)行磨菌、比濁、制備1 mg/ml菌懸液，接種到稀釋成不同藥物濃度梯度的7H9液體培養(yǎng)基上，37 ℃孵育1周后加Alamar blue顯色液顯色。以標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv作為對(duì)照。

(三)采用間隔區(qū)寡核苷酸分型方法(Spoligotyping法)進(jìn)行檢測(cè)

1. DNA模板的制備：實(shí)驗(yàn)菌株采用羅氏培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)3～4周，用生理鹽水從L-J培養(yǎng)基斜面上洗脫菌體，吸取菌懸液1 ml于無(wú)菌1.5 ml離心管中，80 ℃ 30 min滅活， 12 000×g離心5 min后倒掉上清液，菌體沉淀用500 μl TE緩沖液充分懸浮，95 ℃水浴30 min，12 000×g離心3 min，取上清液即為DNA模板。

2. DR區(qū)(又稱(chēng)直接重復(fù)區(qū)，不同菌株間或同一株菌株內(nèi)的直接重復(fù)區(qū)序列高度保守，而間隔區(qū)的數(shù)量和序列存在多態(tài)性，通過(guò)比較間隔序列的多態(tài)性可以區(qū)分不同基因型的菌株)序列PCR擴(kuò)增：使用Spoligotyping法對(duì)菌株的DR區(qū)域進(jìn)行鑒定分型，操作流程按照試劑盒提供的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行(荷蘭，Isogn Bioscience BV公司)。引物的序列為DRa：5′-GGT TTT GGG TCT GAC GAC-3′，5′端用生物素標(biāo)記，用于雜交后發(fā)光檢測(cè)；DRb：5′-CCG AGA GGG GAC GGA AAC-3′，以耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株基因組DNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系采用50 μl反應(yīng)體系：PCR預(yù)混液25 μl(北京，Genstar公司)，DRa 4 μl， DRb 4 μl，DNA模板5 μl，無(wú)菌去離子水12 μl。反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性40 s，60 ℃退火40 s，72 ℃延伸30 s，35個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸10 min，擴(kuò)增整個(gè)直接重復(fù)(DR)區(qū)。同時(shí)擴(kuò)增標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv、卡介苗(BCG)作為對(duì)照。

3. DNA雜交：PCR產(chǎn)物用150 μl 2×SSPE(緩沖液)/0.1%十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulfate,SDS)稀釋?zhuān)?5 ℃變性10 min，立即置于冰水浴中。用250 ml 2×SSPE/0.1%SDS 60 ℃洗膜5 min，置于Miniblotter雜交板內(nèi)，探針?lè)较蚺c狹縫垂直，吸凈狹縫剩余液體，按標(biāo)本順序?qū)⑾♂尩腜CR產(chǎn)物加入到雜交板的狹縫中，同時(shí)加入標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv、BCG、空白作為對(duì)照組，在水平面60 ℃雜交1 h。

4.檢測(cè)：吸出狹縫中雜交液，用2×SSPE/0.5% SDS于60 ℃洗膜10 min，加入15 ml鏈霉親和素-過(guò)氧化物酶偶聯(lián)溶液(15 ml 2×SSPE/0.5%SDS加7.5 μl 500 U/ml鏈霉親和素-過(guò)氧化物酶偶聯(lián)物)，42 ℃孵育60 min，用2×SSPE/0.5% SDS 42 ℃洗膜2次，2×SSPE室溫洗膜2次，使用化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)對(duì)膜上的雜交信號(hào)進(jìn)行收集。

5.質(zhì)量控制：藥敏試驗(yàn)、MIC試驗(yàn)均設(shè)H37Rv標(biāo)準(zhǔn)菌株作為質(zhì)控株，菌種鑒定實(shí)驗(yàn)在高稀釋度菌液對(duì)照培養(yǎng)基上生長(zhǎng)菌落少于20株，均進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。間隔區(qū)寡核苷酸分型試驗(yàn)均以標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv、BCG作為質(zhì)控株，如與標(biāo)準(zhǔn)條帶不符合則進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。

(四)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有Spoligotyping數(shù)據(jù)提交至國(guó)際數(shù)據(jù)庫(kù)MIRU-VNTRplus和SpolDB 4.0進(jìn)行基因型比對(duì)。采用SAS 9.2統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，北京基因型與非北京基因型對(duì)Cs和PAS耐藥率比較使用卡方檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、196株耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株對(duì)Cs和PAS的MIC值分布

結(jié)果顯示196株耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株中Cs耐藥為44株，敏感為152株，耐藥率為22.4%；其中耐藥菌株主要分布在藥物濃度為2.50 μg/ml和8.00 μg/ml的培養(yǎng)基上，分別為22株(11.2%)和8株(4.1%)；敏感株分布在藥物濃度為0.50 μg/ml的培養(yǎng)基上50株(25.5%)，濃度為1.00 μg/ml者54株(27.6%)，濃度為1.25 μg/ml者48株(24.5%)(表2)。PAS耐藥為34株，敏感為162株，耐藥率為17.3%；耐藥株主要分布在藥物濃度為8.00 μg/ml、16.00 μg/ml、256.00 μg/ml的培養(yǎng)基上，分別為4株(2.0%)、4株(2.0%)、10株(5.1%)(表3)。

表2 不同Cs濃度在196株耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株中的分布

注 Cs的MIC臨界濃度為2.5 μg/ml

表3 不同PAS濃度在196株耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株中的分布

注 PAS的MIC臨界濃度為2.0 μg/ml

二、196株耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株在Spoligotyping法中的基因型分布

本研究共分離得到196株耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株，96.4%(189/196)菌株基因型為數(shù)據(jù)庫(kù)MIRU-VNTRplus和SpolDB 4.0內(nèi)所包含，7株沒(méi)有匹配到結(jié)果，為新發(fā)現(xiàn)基因型。其中北京基因型菌株162株，占82.7%(162/196)；北京基因型中非典型北京基因型2株，占1.0%(2/196)。非北京基因型菌株34株，占17.3%(34/196)。非北京基因型中T1基因型14株，占7.1%(14/196)，非北京基因型中T2基因型11株，占5.7%(11/196)，MANU2基因型1株，占0.5%(1/196)，S基因型1株，占0.5%(1/196)；新發(fā)現(xiàn)基因型為7株，共占3.6%(7/196)(表4)。

三、196株耐多藥結(jié)核分枝桿菌不同基因型的Cs和PAS耐藥情況比較

在耐Cs的耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株中，北京基因型為34株，耐藥率為21.0%(34/162)；34株非北京基因型菌株中耐Cs為10株，耐藥率為29.4%(10/34)；兩者耐藥率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.15，P>0.05)。在耐PAS的耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株中，北京基因型為26株，耐藥率為16.0%(26/162)；34株非北京基因型菌株中耐PAS為8株，耐藥率為23.5%(8/34)；兩者耐藥率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.10，P>0.05)(表5)。

表4 196株耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株在Spoligotyping法中的基因型分布

注a：數(shù)據(jù)庫(kù)MIRU-VNTRplus和SpolDB 4.0中的SIT[Spoligotyping international type(間隔區(qū)寡核苷酸分型法國(guó)際類(lèi)型)，是數(shù)據(jù)庫(kù)定義的一個(gè)編碼系統(tǒng)，便于索引和匹配]編號(hào)；“-”：數(shù)據(jù)庫(kù)中無(wú)匹配結(jié)果；序號(hào)1～7為北京基因型，共計(jì)162株；序號(hào)8～20為非北京基因型，共計(jì)34株

表5 不同基因型耐藥率的比較

討 論

耐藥結(jié)核病的發(fā)生及其流行已成為全球結(jié)核病控制的一大難題，為治療耐多藥結(jié)核病，二線(xiàn)抗結(jié)核藥物得到廣泛應(yīng)用，對(duì)其耐藥性也隨之增高。

一、196株耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株對(duì)Cs耐藥性分析

早在利福平問(wèn)世以前，Cs即已成為復(fù)治結(jié)核病化學(xué)治療方案中的主要藥物。近年來(lái)耐多藥結(jié)核病患者日趨增多，異煙肼和利福平等一線(xiàn)抗結(jié)核藥物常不能滿(mǎn)足臨床治療的需要，Cs對(duì)結(jié)核病的低耐藥率受到重視。Cs為D-丙氨酸類(lèi)似物，可抑制丙氨酸消旋酶、合成酶，抑制細(xì)胞壁黏肽產(chǎn)生，使結(jié)核分枝桿菌的細(xì)胞壁缺損和耐酸能力減弱，起到殺菌和抑菌作用[6]。Cs的耐藥率較低，與其他抗結(jié)核藥物不發(fā)生交叉耐藥，在用藥過(guò)程中不易產(chǎn)生耐藥性。

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，1993—2007年荷蘭的131例耐多藥結(jié)核病患者二線(xiàn)抗結(jié)核藥物藥敏試驗(yàn)中，只有1例對(duì)Cs耐藥，耐藥率為0.8%[7]，2005年俄羅斯耐多藥結(jié)核分枝桿菌的Cs耐藥率為7.4%，1995—2011年中國(guó)香港耐多藥結(jié)核分枝桿菌中的Cs耐藥率只有8.6%[8]。綜合以上研究資料來(lái)看，Cs較其他二線(xiàn)抗結(jié)核藥物耐藥率低，本研究結(jié)果:196株耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株中對(duì)Cs耐藥株為44株，耐藥率為22.4%，其主要分布在濃度為2.5 μg/ml和8 μg/ml，分別為22株和8株，屬于低濃度耐藥，與荷蘭、俄羅斯、中國(guó)香港地區(qū)相比耐藥率處于較高水平，可能與我國(guó)是全球結(jié)核病高負(fù)擔(dān)大國(guó)，地廣人多、經(jīng)濟(jì)發(fā)展不平衡，耐藥結(jié)核病情況差異較大[3]和在治療過(guò)程中藥物的不規(guī)范使用等多種因素有關(guān)，這有待于下一步的研究探討。

二、196株耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株對(duì)Cs耐藥性分析

PAS的作用機(jī)制尚未肯定，一般認(rèn)為對(duì)氨基水楊酸鈉化學(xué)結(jié)構(gòu)與對(duì)氨基苯甲酸(PABA)相似，可競(jìng)爭(zhēng)性抑制二氫葉酸合成酶，使二氫葉酸合成障礙，造成蛋白質(zhì)合成受阻，使細(xì)菌不能繁殖。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道：1993—2007年荷蘭的131株耐多藥結(jié)核分枝桿菌中PAS耐藥率為4.6%[7]；國(guó)內(nèi)對(duì)耐多藥結(jié)核分枝桿菌中PAS的耐藥率也有很多報(bào)道：2006—2007年北京43株耐多藥結(jié)核分枝桿菌中PAS耐藥率為9.3%[9]，2009年上海431株耐多藥結(jié)核分枝桿菌中PAS耐藥率為8.1%[10]，2008—2009年浙江25株耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株中對(duì)PAS的耐藥率為32.7%[11]，2008—2010年江西萍鄉(xiāng)22株耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株中對(duì)PAS的耐藥率為45.5%[12]，2010—2012年江蘇無(wú)錫77株耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株中對(duì)PAS的耐藥率為33.8%[13]，從以上數(shù)據(jù)來(lái)看，各地耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株對(duì)PAS耐藥率高低各不相同，存在明顯地區(qū)差異。本研究196株耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株中PAS耐藥為34株，耐藥率為17.3%，與以上國(guó)內(nèi)報(bào)道的數(shù)據(jù)相比處于平均水平，但較國(guó)外相比仍處于較高水平。

三、耐藥性與基因型相關(guān)性分析

北京基因型結(jié)核分枝桿菌在世界各地廣泛流行，并存在明顯的地域差別，在亞洲地區(qū)較為流行。北京基因型是中國(guó)結(jié)核分枝桿菌的主要基因型。本研究結(jié)果顯示，196株耐多藥結(jié)核分枝桿菌基因型分布具有明顯多態(tài)性，主要為北京基因型，共162株，占82.7%，表明北京基因型家族是我國(guó)耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株中主要流行的菌株。

由于耐多藥北京基因型菌株多次引起暴發(fā)流行，北京基因型菌株與耐藥性之間的關(guān)聯(lián)成為研究的熱點(diǎn)。北京基因型結(jié)核分枝桿菌與耐藥性密切相關(guān)，但不同國(guó)家和地區(qū)各有不同，有研究表明，俄羅斯、越南和伊朗等國(guó)耐藥結(jié)核病流行主要由北京基因型菌株引起；有些文獻(xiàn)報(bào)道，在越南胡志明市、愛(ài)沙尼亞、美國(guó)紐約等地區(qū)，北京基因型家族耐藥率高于非北京基因型家族；有些報(bào)道，在印度尼西亞、阿塞拜疆、哥倫比亞等地區(qū)，北京基因型家族與非北京基因型家族耐藥率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而中國(guó)香港北京基因型家族菌株異煙肼耐藥率低于非北京基因型家族菌株[14]。本研究結(jié)果表明：北京基因型與非北京基因型的耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株對(duì)Cs和PAS兩種二線(xiàn)抗結(jié)核藥物耐藥率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這在一定程度上表明北京基因型的耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株流行可能與Cs和PAS耐藥性無(wú)明顯相關(guān)性。

有研究表明[14]，北京基因型家族又分為古代型與現(xiàn)代型，古代型主要盛行在東南亞、印度等地區(qū)，與菌株的耐藥性密切相關(guān)，而現(xiàn)代型為我國(guó)主要流行菌株，與菌株流行傳播能力有關(guān)，與古代型相比，現(xiàn)代型具有高度的遺傳性和致病能力，為進(jìn)一步探討耐藥表型與基因型的關(guān)系，筆者后續(xù)會(huì)擴(kuò)大樣本量并對(duì)北京基因型中古代型和現(xiàn)代型進(jìn)行流行病學(xué)分析。

我國(guó)耐多藥結(jié)核分枝桿菌對(duì)二線(xiàn)抗結(jié)核藥物Cs和PAS的耐藥率處于較高水平。北京基因型家族是我國(guó)耐多藥結(jié)核分枝桿菌中主要流行的菌株，北京基因型與非北京基因型的耐多藥結(jié)核分枝桿菌菌株對(duì)Cs和PAS兩種二線(xiàn)抗結(jié)核藥物耐藥性無(wú)明顯相關(guān)性。

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(本文編輯：王然 薛愛(ài)華)

Analyses on resistance to cycloserine and p-aminosalicylic acid and genotypes in multidrug-resistant M. tuberculosis isolates

YANG Jian*，PANG Yu，ZHAO Yan-lin，ZHANG Tian-hua，WANG Xi-di，CHEN Mei-ling，LI Yan，WANG Rui.

*Tuberculosis Reference Laboratory, Shaanxi Provincial Institute for Tuberculosis Control and Prevention，Xi’an 710048，China

ZHANG Tian-hua，Email：zhthfzhk@126.com； ZHAO Yan-lin，Email：zhaoyanlin@chinatb.org

Objective To evaluate the resistance to cycloserine (Cs) and p-aminosalicylic acid (PAS) in multi-drug resistant (MDR)M.tuberculosisisolates, and analyze the relationship between the genotype and drug-resistant phenotype, which will provide the scientific evidence for MDR-tuberculosis treatment. Methods One hundred and ninety-six MDR-M.tuberculosisisolates were collected from the first tuberculosis drug resistance survey of China conducted in 2007, were detected their minimum inhibition concentrations (MICs) of Cs and PAS by microplate Alamar blue assay, and were analyzed the genotypes by Spoligotyping method. Cs and PAS resistant rates between Beijing genotype and non-Beijing genotype strains were compared using Chi square test,P<0.05 was considered as statistically significant difference. Results Of 196 MDR-M.tuberculosisisolates, 22.4%(44/196) were resistant to Cs, and 17.3%(34/196) were resistant to PAS. 82.7%(162/196)isolates belonged to Beijng geno-type, while 17.3%(34/196) strains belonged to non-Beijing genotypes. Of 162 Beijing genotype strains, 21.0% (34/162)strains were resistant to Cs, while 29.4%(10/34) of non-Beijing genotype strains were resistant to Cs. There were no statistical difference in Cs-resistant rates between Beijing and non-Beijing genotype strains(χ2=1.15，P>0.05). 16.0%(26/162)of Beijing genotype strains were resistant to PAS, while 23.5% (8/34) of non-Beijing genotype strains showed the resistance to PAS. They had no significant difference(χ2=1.10，P>0.05). Conclusion The Cs- and PAS-resistant rates in MDR-M.tuberculosisstrains were high in China. Beijing genotype was the predominant among MDR-M.tuberculosisisolates in China. The Cs- and PAS-resistant rates between Beijing and non-Beijing genotype strains had no significant difference.

Mycobacteriumtuberculosis; Drug resistance, multiple, bacterial; Cycloserine； Aminosalicylic acid； Genotype

10.3969/j.issn.1000-6621.2015.02.002

710048 西安，陜西省結(jié)核病防治研究所 結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室(楊健、王西娣、陳美齡、李妍、王蕊)，辦公室 (張?zhí)烊A)；中國(guó)疾病預(yù)防控制中心結(jié)核病預(yù)防控制中心(逄宇、趙雁林)

張?zhí)烊A，Email：zhthfzhk@126.com；趙雁林，Email：zhaoyanlin@chinatb.org

2014-05-30)