巫曉華

復(fù)方金貫口服液的提取、質(zhì)量控制及臨床應(yīng)用

巫曉華

目的 制備金貫口服液, 建立提取最佳方法、質(zhì)量控制方法并觀察臨床療效。方法 用薄層色譜法定性, 用高效液相色譜法測(cè)定金銀花中氯原酸的含量, 并與利巴韋林顆粒劑臨床對(duì)照應(yīng)用,觀察其療效。結(jié)果 水提醇沉法提取氯原酸含量高, 穩(wěn)定性好。治療3 d后各組的臨床癥狀都基本減輕而且痊愈率高, 對(duì)照組總有效率88.0%和治療組90.0%比較, 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療組無(wú)不良反應(yīng)出現(xiàn)；對(duì)照組出現(xiàn)嘔吐6例, 腹痛3例, 肝損害1例, 兩組比較, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 該制劑治療手足口病療效好、治愈率高、副作用小、質(zhì)量穩(wěn)定可控制。

金貫口服液；制備；質(zhì)量控制；療效

金貫口服液是本院針對(duì)當(dāng)下手足口病無(wú)疫苗和特效治療藥物, 以金銀花、貫眾、連翹等9味中藥材用傳統(tǒng)的水提醇沉工藝精制而成, 具有清熱、解毒、抑菌、抗病毒之功效,主治小兒手足口病等證［1］。經(jīng)過(guò)3年的課題研制, 解決了該制劑質(zhì)量控制和療效穩(wěn)定等問(wèn)題?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 儀器與試劑

LC-20A液相色譜儀, 日本島津公司產(chǎn)品；色譜柱(4.6 mm ×250 mm), 雙蒸水, 自制；綠原酸對(duì)照品, 中國(guó)藥品生物制品鑒定所提供。乙腈為色譜純, 磷酸為分析純。

2 處方與制備

2.1 處方為金銀花10 g, 貫眾6 g, 連翹6 g, 板藍(lán)根10 g, 蘆根10 g, 魚(yú)腥草10 g, 廣藿香5 g, 甘草3 g等中藥。

2.2 提取條工藝的選擇 用兩種傳統(tǒng)工藝進(jìn)行提取, 通過(guò)定性、定量及穩(wěn)定性研究來(lái)進(jìn)一步對(duì)比, 從而確定最佳提取工藝。

2.2.1 水提醇沉工藝 金銀花、連翹、貫眾等中藥, 加水煎煮3次, 1 h/次, 過(guò)濾合并濾液, 濃縮, 濃縮液加乙醇調(diào)制為60%~70%, 回收乙醇至提取液備用, 得供試品1。

2.2.2 滲漉法制備工藝 金銀花、連翹、貫眾等中草藥,粉碎, 加60%乙醇濕潤(rùn)攪拌混勻, 裝入滲漉器, 加60%乙醇浸泡12 h, 打開(kāi)滲漉器出口, 用6倍量乙醇滲漉24 h, 收集滲漉液, 過(guò)濾, 回收乙醇至提取液備用, 得供試品2。

2.2.3 口服液的制備流程 復(fù)方金貫口服液+蒸餾水適量,溶解, 加入適宜矯味劑, 過(guò)濾、灌封、滅菌。

3 對(duì)比工藝選擇

3.1 檢查兩種提取液外觀均澄清, 帶芳香氣味, 味苦。

3.2 用薄層色譜鑒別 分別取樣品20 ml, 甲醇超聲, 濾過(guò),水浴蒸發(fā)至干, 加甲醇溶解5 ml溶解, 濾過(guò), 濾液作為供試品溶液a和b。另取缺味配制模擬制劑, 按上述方法制備成金銀花陰性對(duì)照溶液。取綠原酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所)加甲醇制成1 mg/ml的溶液, 作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn), 吸取上述四種溶液各5 ml, 分別點(diǎn)于同一塊高效硅膠預(yù)制薄層(HPTlC-plate Nano-DURASIl-20, MN)上, 10 μl；條帶狀點(diǎn)樣, 條帶寬度為2 mm, 條帶間距4 mm, 原點(diǎn)距底邊8 mm以乙酸乙酯∶甲醇∶甲酸(8∶1∶1)的上層溶液為展開(kāi)劑, 預(yù)平衡5 min展開(kāi), 晾干, 紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中, 供試品溶液a、b在與氯原酸對(duì)比液在相同的位置上, 顯相同藍(lán)色斑點(diǎn), 供試品a的熒光較亮；陰性對(duì)照溶液在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置, 無(wú)相應(yīng)斑點(diǎn)。

3.3 用高效液相色譜儀測(cè)定 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取氯原酸對(duì)照品2.0 mg溶于2 ml甲醇, 移取0.5 ml置棕色量瓶中, 加50%甲醇制成50 μg/ml的溶液即得。

供試品溶液的制備：分別取兩種提取液100 ml量瓶中搖勻, 得樣品溶液。精密吸取10 ml甲醇溶解超聲5 min后,再用雙蒸水定容到刻度, 搖勻、過(guò)0.45 μg微孔濾膜, 取續(xù)濾液即得供試品1, 2。

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑, 以甲醇∶水∶磷酸(47∶53∶0.2)為流動(dòng)相, 檢測(cè)波長(zhǎng)為327 nm。分別精密吸取對(duì)照品與供試品溶液1和2各5 μl注入液相色譜儀測(cè)定結(jié)果：高效液相色譜圖中, 結(jié)果供試品1的出峰時(shí)間與對(duì)照品一致,而供試品2的出峰時(shí)間較晚。

3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

3.4.1 影響因數(shù)試驗(yàn) 將該藥除去包裝, 置開(kāi)放容器內(nèi), 分別在40℃、高溫(RH75%)暴露空氣條件下放置, 于1、5、10 d觀察, 水提醇沉法制得的提取液有效成分含量較高, 放置后較穩(wěn)定。見(jiàn)表1, 表2。

表1 水提醇沉法提取液(n, %)

表2 滲漉法提取液(n, %)

3.4.2 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 取水提醇沉的樣品5份, 用同樣的方法檢測(cè), 考察色譜峰相對(duì)保留時(shí)間和主峰的峰面積的比值,結(jié)果5份樣品的RSD均<2%。說(shuō)明該提取液的重現(xiàn)性良好。

4 臨床應(yīng)用

4.1 資料與方法

4.1.1 一般資料 100例患兒隨機(jī)分為對(duì)照組與治療組, 各50例, 對(duì)照組中男21例, 女29例。1歲以下13例, 1~3歲31例, 3~10歲6例；治療組中男28例, 女22例。1歲以下16例, 1~3歲30例, 3~10歲4例, 均符合中醫(yī)辨證“溫病”, 外感濕邪病毒, 手、足、口等有不同程度的皰疹潰瘍。兩組患者一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05), 具有可比性。

4.1.2 治療方法 治療組：口服金貫口服液(自制, 批號(hào)：140203), 1歲以下5 ml/次, 1~3歲兒童10 ml/次 , 3~10歲兒童15 ml/次, 3 d為1個(gè)療程。對(duì)照組：利巴韋林顆粒劑(四川百利藥業(yè)有限責(zé)任公司, 批號(hào)：140605), 1歲以下服用0.3袋/次, 2次/d, 1~3歲服用0.5袋/次, 2次/d, 3~10歲服用1袋/次, 2次/d。

4.1.3 療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn) 痊愈：各種臨床癥狀完全消失；顯效：各種臨床癥狀明顯減輕；有效：所有癥狀都有所改善；無(wú)效：用藥后主訴癥狀無(wú)明顯改善或者有所加重?？傆行?(痊愈+顯效+有效)/總例數(shù)×100%。

4.1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4.2 結(jié)果

4.2.1 兩組臨床療效比較 對(duì)照組和治療組總有效率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 兩組臨床療效比較(n, %)

4.2.2 兩組不良反應(yīng)比較 治療組無(wú)不良反應(yīng)出現(xiàn)；對(duì)照組出現(xiàn)嘔吐6例, 腹痛3例, 肝損害1例。兩組比較, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

4.3 討論

4.3.1 手足口病屬中醫(yī)“溫病”范疇, 多為外感濕邪病毒,內(nèi)有脾胃蘊(yùn)熱所致。中醫(yī)對(duì)“溫病”治療素有成效, 早期干預(yù), 可有效減少手足口病的并發(fā)癥和殘死率。目前, 常用的中藥注射劑不良反應(yīng)逐漸增多, 如2006年6月國(guó)家藥品不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)中心共接到魚(yú)腥草注射液不良反應(yīng)報(bào)告5488例,嚴(yán)重不良反應(yīng)228例, 死亡44例。復(fù)方金貫口服液具有清熱、解毒、抗病毒、抑菌、消炎等多重功能［2］。能為手足口病患者提供新的治療藥物。

4.3.2 中藥制劑常出現(xiàn)提取成分不高的問(wèn)題, 為了控制產(chǎn)品質(zhì)量, 提高臨床療效, 確立水提醇沉為最佳提取方法, 本試驗(yàn)是對(duì)比兩項(xiàng)傳統(tǒng)提取工藝, 用高效液相色譜儀測(cè)定復(fù)方金貫口服液有效成分含量和質(zhì)量可控性, 水提醇沉法和薄層色譜法簡(jiǎn)單方便可作為快速的定性方法。用高相液相法檢測(cè)顯示該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確, 重現(xiàn)性好, 能有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量［3］。

4.3.3 我國(guó)中草藥植物資源豐富, 金銀花、貫眾等中藥具有的抑菌抗炎、抗病毒等功效已被廣泛證實(shí), 除此之外發(fā)現(xiàn)有促進(jìn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率等作用, 而貫眾近年來(lái)用作流行性乙型腦炎、流行性腮腺炎等“時(shí)疫”性疾病療效確切, 而利巴韋林效果雖好, 但因其可抑制骨髓、引起白細(xì)胞減少和貧血等不良反應(yīng)限制了臨床應(yīng)用。本制劑與具有抗病毒作用的利巴韋林顆粒劑, 采用隨機(jī)雙盲平行對(duì)照的方法, 結(jié)果說(shuō)明復(fù)方金貫口服液治療手足口病療效確切、安全有效, 不良反應(yīng)輕。

［收稿日期：2015-04-01］

［1］ 肖崇厚.中藥化學(xué).上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社, 1991:125.

［2］ 劉圣, 陳禮明.清熱中藥現(xiàn)代藥理與臨床.合肥：安徽科學(xué)技術(shù)出版社, 1999:40-278.

［3］ 向智男, 寧正祥.金銀花中綠原酸的提取及純化方法比較.林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè), 2006, 26(1):116-120.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.13.183

512026 廣東省韶關(guān)市粵北第二人民醫(yī)院藥劑科