魏 群，何 峰，李煥明

（天津醫(yī)科大學(xué)第四中心臨床學(xué)院，天津300140）

螺內(nèi)酯對心梗后心衰大鼠血流動力學(xué)及甲狀腺素水平的影響

魏 群，何 峰，李煥明＊

（天津醫(yī)科大學(xué)第四中心臨床學(xué)院，天津300140）

心衰終末階段常伴低T3綜合征，血清T3低下程度與心衰的嚴(yán)重性相關(guān)［1］，T3成為預(yù)示心衰病人死亡的風(fēng)險及判斷預(yù)后的又一新指標(biāo)［2］。甲狀腺激素受體（thyroid hormone receptors，TRs）屬于類固醇類核受體超家族，主要與T3結(jié)合，稱核T3受體。核T3受體分為：TRα及TRβ，心臟以表達(dá)TRα1為主［3，4］，TRα2是無配體結(jié)合的負(fù)性調(diào)控受體。心衰后腎素－血管緊張素－醛固酮系統(tǒng)（renin－angiotensinaldosterone system，RASS）激活，醛固酮（Ald）分泌明顯增多，螺內(nèi)酯是Ald受體拮抗劑，本研究通過建立急性心肌梗死（AMI）后心衰大鼠模型，觀察螺內(nèi)酯對血流動力學(xué)、甲狀腺素水平、非梗死區(qū)心肌TRα1及TRα2表達(dá)影響。

1 材料與方法

1.1 動物 Wistar大鼠，65只，體重180－200g，雌性，由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。

1.2 藥品和試劑 螺內(nèi)酯由杭州民生藥業(yè)提供，批號：T14H12，溶于0.5%羧甲基纖維素鈉（CMC）中；甲狀腺素水平測定試劑盒均由南京建成提供。

1.3 動物模型 大鼠心梗后心衰模型制備方法參照文獻(xiàn)［5］，整個過程無菌操作，模型組（51只）于左冠狀動脈前降支，假手術(shù)組（14只）僅穿線不結(jié)扎。術(shù)后常規(guī)給予腹腔注射青霉素20萬U／kg抗炎7天。冠脈結(jié)扎術(shù)后48小時死亡12只大鼠，一周內(nèi)死亡3只大鼠。從術(shù)后第二周至實(shí)驗(yàn)結(jié)束無大鼠死亡。假手術(shù)組2只大鼠死于麻醉意外。

1.4 分組及給藥 將4周后存活的48只Wistar大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、螺內(nèi)酯小劑量組（4 mg／kg group）、螺內(nèi)酯大劑量組（12mg／kg group），每組12只。假手術(shù)組及模型組均灌胃給予0.5%CMC。各組分別于術(shù)后第7周開始給藥，連續(xù)給藥4周，每日一次，灌胃容積均為10ml／kg。

1.5 指標(biāo)測定 血流動力學(xué)參數(shù)測定方法參照文獻(xiàn)［6］：各組分別于術(shù)后4周末、6周末、8周末及10周末，測量LVSP、LVEDP、±dp／dtmax指標(biāo)；血流動力學(xué)參數(shù)測定后，腹主動脈取血2ml，離心10 min，取血清，置于－70℃，ELISA法檢測血清FT3、FT4、TSH水平；取非梗死區(qū)心肌組織置于－70℃，待提取RNA，RT－PCR法檢測非梗死區(qū)心肌組織TRα1及TRα2mRNA的表達(dá)。

1.6 mRNA表達(dá)水平的測定 提取總RNA及逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：取50mg心肌標(biāo)本，加入0.5ml Trizol，經(jīng)氯仿，異丙醇提取總RNA。紫外分光光度計分析RNA的量和純度。取2μg總RNA逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，－20℃保存。所有引物均由上海生物工程技術(shù)有限公司合成，引物具體序列及PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件參考文獻(xiàn)［7］。取5μl PCR反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行1.5%瓊脂糖電泳，光密度掃描后圖片經(jīng)Image J軟件分析。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x—±s表示，采用SPSS11.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。應(yīng)用one－way ANO－VA方差分析，多組間的相關(guān)性比較采用t檢驗(yàn)，多組間的兩兩比較采用費(fèi)希爾LSD法。

2 結(jié)果

2.1 螺內(nèi)酯對心衰大鼠血流動力學(xué)的影響 與假手術(shù)組比較，模型組分別于4周、6周、8周及12周LVSP、±dp／dtmax均明顯下降（P＜0.05～0.01），而LVEDP則明顯增加（P＜0.01），表明大鼠急性心肌梗死后心衰時血流動力學(xué)明顯異常。與模型組比較，螺內(nèi)酯小劑量及大劑量組均能明顯升高LVSP、＋dp／dtmax及－dp／dtmax，降低LVEDP（P＜0.05～0.01）。螺內(nèi)酯小劑量組與大劑量組之間比較，無明顯差異。結(jié)果表明螺內(nèi)酯能明顯改善心肌梗死后心衰大鼠血流動力學(xué)狀況。見表1。

表1 螺內(nèi)酯對心梗后心衰大鼠血流動力學(xué)的影響

表1 螺內(nèi)酯對心梗后心衰大鼠血流動力學(xué)的影響

與假手術(shù)組比較△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組比較＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；

項(xiàng)目組別n 4周6周8周12周LVSP假手術(shù)組3 254±9.0 247±6.9 246±7.3 251±4.3（mmHg）模型組3 189±6.3△175±4.3△167±5.2△164±3.2△△螺內(nèi)酯小劑量組3 201±21.5＊211±27.9＊ 223±23.6＊＊230±25.1＊＊螺內(nèi)酯大劑量組3 207±34.5＊211±24.1＊228±45.3＊245±44.1＊＊LVEDP假手術(shù)組3 34±5.7 35±2.5 33±4.1 33±5.8（mmHg）模型組3 67±7.3△△ 69±8.9△△ 72±10.1△△75±9.8△△螺內(nèi)酯小劑量組3 65±5.1＊62±2.1＊60±8.1＊59±8.3＊螺內(nèi)酯大劑量組3 62±9.4＊61±4.8＊57±8.3＊56±4.1＊＋dp／dtmax假手術(shù)組3 5330±667 5327±528 5311±446 5319±834（mmHg）模型組3 3448±691△△3318±446△△3078±771△△2981±852△△螺內(nèi)酯小劑量組3 4001±540＊3991±720＊3906±553＊3610±512＊螺內(nèi)酯大劑量組3 4569±949＊4529±424＊4623±635＊4521±402＊－dp／dtmax假手術(shù)組3 5427±627 5432±637 5421±718 5435±612（mmHg）模型組3 3103±652△△2921±367△△2867±627△△2738±789△△螺內(nèi)酯小劑量組3 3419±551＊3417±478＊3438±545＊3456±668＊螺內(nèi)酯大劑量組3 3549±563＊3598±739＊3610±572＊3688±663＊

2.2 螺內(nèi)酯對心衰大鼠甲狀腺素水平的影響 與假手術(shù)比較，模型組大鼠分別于4周、6周時FT3水平無明顯降低（P＞0.05），于8周開始FT3水平明顯降低，12周始FT3水平降低更加顯著（P＜0.05～0.01），而FT4及TSH水平4周、6周、8周及12周時無明顯變化（P＞0.05）；與模型組比較，螺內(nèi)酯小劑量組及大劑量組分別于8周及12周時能夠明顯升高FT3水平，差異顯著（P＜0.05），而對FT4、TSH水平無明顯影響（P＞0.05）；與螺內(nèi)酯小劑量組比較，螺內(nèi)酯大劑量組分別于8周及12周時升高FT3水平更加明顯，差異顯著（P＜0.05）。見表2。

表2 螺內(nèi)酯對心梗后心衰大鼠FT3、FT4及TSH水平的影響

表2 螺內(nèi)酯對心梗后心衰大鼠FT3、FT4及TSH水平的影響

與假手術(shù)組比較△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組比較＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；

項(xiàng)目組別n 4周6周8周12周3 76.1±1.9 75.6±3.3 74.4±2.1 74.8±3.1模型組3 74.2±3.2 73.2±4.2 60.3±2.4△54.4±61.2△△螺內(nèi)酯小劑量組3 75.3±5.1 73.9±3.2 64.4±2.0＊60.5±53.1＊螺內(nèi)酯大劑量組3 75.9±4.2＊74.3±4.3 67.1±2.5＊66.4±3.2＊FT4（ng／ml）假手術(shù)組3 26.1±5.2 27.3±4.2 28.0±4.2 25.1±6.8模型組3 27.4±2.2 26.5±5.6 27.6±4.1 28.4±3.9螺內(nèi)酯小劑量組3 26.9±3.5 27.3±6.2 28.2±2.4 27.5±5.3螺內(nèi)酯大劑量組3 25.8±6.3 28.4±5.4 27.5±5.9 28.8±6.3 TSH（mIU／L）假手術(shù)組3 2.81±0.9 2.76±0.4 2.67±0.4 2.63±0.7模型組3 2.77±0.7 2.86±0.8 2.83±0.8 2.78±0.5螺內(nèi)酯小劑量組3 2.78±0.5 2.81±0.6 2.79±0.9 2.75±0.7螺內(nèi)酯大劑量組FT3（pg／ml）假手術(shù)組3 2.87±0.9 2.84±0.6 2.81±0.8 2.85±0.7

2.3 螺內(nèi)酯對心衰大鼠非梗死區(qū)心肌TRα1及TRα2mRNA表達(dá)水平的影響 與假手術(shù)組相比，模型組大鼠分別于4周、6周時TRα1及TRα2mRNA表達(dá)無明顯變化，于8周開始TRα1mRNA表達(dá)上調(diào)，12周TRα1mRNA表達(dá)上調(diào)更加顯著。而TRα2mRNA表達(dá)水平無明顯變化；與模型組相比，于8周始螺內(nèi)酯小劑量組及大劑量組均能明顯下調(diào)TRα1mRNA表達(dá)，12周時螺內(nèi)酯大劑量組下調(diào)TRα1mRNA表達(dá)更加明顯，而對TRα2mRNA表達(dá)水平無明顯影響，見圖1。

圖1 各組非梗死區(qū)心肌組織12周末TR1及TR2 mRNA的表達(dá)

3 討論

心衰終末階段常伴低T3綜合征，特點(diǎn)為血清T3水平低，而血清T4和TSH水平正常，且其心衰表現(xiàn)與甲低的心臟病表現(xiàn)極為相似。血清T3低下程度與心衰的嚴(yán)重性相關(guān)［1］，并與判斷心衰嚴(yán)重程度的指標(biāo)腦鈉肽（BNP）緊密相連［8］。T3成為預(yù)示心衰病人死亡的風(fēng)險及判斷預(yù)后的又一新指標(biāo)［2］。T3是甲狀腺激素的主要活性形式，以結(jié)合型T3及游離型T3（FT3）兩種形式存在，外源性予以甲狀腺激素能明顯改善心功能。甲狀腺激素受體（thyroid hormone receptors，TRs）屬于類固醇類核受體超家族，主要定位于核染色質(zhì)上，主要與T3結(jié)合，稱核T3受體。核T3受體分為：TRα及TRβ，其中TRα有TRα1及TRα2兩種亞型，TRα1是對TH有高度親和力的受體，發(fā)揮主要的生理作用，而TRα2是無配體結(jié)合的負(fù)性調(diào)控受體。心臟亦表達(dá)TRα1及TRα2。醛固酮（Ald）是類固醇類激素中具有代表性的鹽皮質(zhì)激素，心臟能合成和分泌Ald［9］。心衰后腎素－血管緊張素－醛固酮系統(tǒng)（renin－angiotensin－aldosterone system，RASS）激活，Ald分泌明顯增多，且ALd水平與慢性心力衰竭的嚴(yán)重程度成正例［10］。螺內(nèi)酯是Ald受體拮抗劑，通過干預(yù)心肌細(xì)胞基質(zhì)膠原沉積及凋亡等途徑改善心衰。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)扎大鼠左冠脈造成心梗后心衰動物模型，于不同時間點(diǎn)觀察各項(xiàng)指標(biāo)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型組大鼠于8周開始FT3水平及血流動力學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)明顯降低，同時非梗死區(qū)心肌TRα1mRNA表達(dá)上調(diào)，而TRα2mRNA表達(dá)、FT4及TSH水平始終無明顯變化（P＞0.05），8周始呈現(xiàn)低T3綜合征狀態(tài)，12周始更加顯著。說明心衰后FT3水平具有明顯時相性，同時與血流動力學(xué)變化關(guān)系密切。分析其原因考慮心衰時甲狀腺激素受體上調(diào)，故而結(jié)合了大量的T3，以維持機(jī)體的代謝水平，使游離T3水平降低。此外，本研究觀察到低T3綜合征狀態(tài)時心肌細(xì)胞TRα1mRNA表達(dá)上調(diào)，而TRα2作為負(fù)性調(diào)控因素?zé)o明顯變化，推測TRα1mRNA表達(dá)與TRα2 mRNA表達(dá)失衡。進(jìn)一步研究表明螺內(nèi)酯可下調(diào)心肌TRα1mRNA表達(dá)，升高FT3水平，進(jìn)而改善心衰后大鼠的左心收縮和舒張功能，這可能是其改善心衰后血流動力學(xué)的原因之一。因此在心衰發(fā)展階段，注重甲狀腺素水平的檢測越來越重要，改善低T3狀態(tài)是改善心衰的又一新的治療靶點(diǎn)。

［1］Consorti F，Leventi A，Loponte M，et al.FT3value is a possible risk indicator for patients undergoing vascular surgery［J］.Clin Ter，2009，160（3）：e35.

［2］Giorgio I，Alessandro P，Patrizia L，et al.Low－T3syndrome is a strong predictor of death in cardiac patients and might be directly implicated in the poor prognosis of cardiac patients［J］.Circulation，2003，107（5）：708.

［3］Zhang J，Lazar M A.The mechanism of action of thyroid hormones［J］.Ann Rev Physiol，2000，62：439.

［4］Yen P M.Physiological and molecular basis of thyroid hormone action［J］.Physiol Rev，2001，81（3）：1097.

［5］Campbell DJ，Kladis A，Valentijn AJ.Effect s of losartan on angiotensin and bradykinin peptides and converting enzyme［J］.J Cardiovasc Pharmacol，1997，80：158A.

［6］趙東明，楊 萍，孫 昕，等，阿托伐他汀聯(lián)合輔酶Q10對心肌梗死后心力衰竭大鼠解偶聯(lián)蛋白2基因表達(dá)的影響［J］.中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2011，15（2），205.

［7］劉春蓉，石 峰，李蘭英，等，甲亢大鼠心肌甲狀腺激素受體mRNA的表達(dá)［J］.武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2008，17（6）：473.

［8］Pfister R，Strack N，Wielckens K，et al.The relationship and prognostic impact of low－T3syndrome and NT－pro－BNP in cardiovascular patients［J］.Int J Cardiol，2010，144（2）：187.

［9］Roch R，Willams GH.Rationale for the use of aldosterone antagonists in congestive heart failure［J］.Drugs，2002，62（5）：723.

［10］Mizuno Y，Yoshimura M，Yasue H，et al.Aldosterone production is activated in failing ventricle in humans［J］.Circulation，2001，103（1）：72.

2014－09－25）

1007－4287（2015）10－1629－03

天津市第四中心醫(yī)院博碩士基金

＊通訊作者