西電集團(tuán)醫(yī)院婦產(chǎn)科 (西安 710077)

曹 馨

PTEN、OPN在上皮性卵巢惡性腫瘤組織中的表達(dá)及意義

西電集團(tuán)醫(yī)院婦產(chǎn)科 (西安 710077)

曹 馨

目的：探討PTEN、OPN在上皮性卵巢惡性腫瘤中的表達(dá)及意義。方法：采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)12例正常卵巢組織、19例良性上皮性卵巢腫瘤組織、18例交界性卵巢腫瘤組織、60例上皮性卵巢惡性腫瘤組織中PTEN和OPN的表達(dá)，分析其表達(dá)的差異性。結(jié)果：PTEN、OPN在上皮性卵巢惡性腫瘤組織、交界性上皮性卵巢腫瘤組織、良性卵巢腫瘤組織、正常的卵巢組織中其陽(yáng)性表達(dá)率分別為25.00%、88.90%、94.70%、100.00%和76.66%、27.77%、15.78%、8.00%。PTEN在上皮性卵巢惡性腫瘤中的表達(dá)率隨臨床分期升高，隨病理分級(jí)的減低而降低；OPN的表達(dá)率隨臨床分期升高，隨病理分級(jí)的減低而升高;二者的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論：①PTEN、OPN的表達(dá)在上皮性卵巢惡性腫瘤、交界性卵巢上皮性腫瘤、良性卵巢腫瘤、正常卵巢組織均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且呈負(fù)相關(guān)。②二者聯(lián)合檢測(cè)可能對(duì)上皮性卵巢惡性腫瘤的輔助診斷有一定意義。

有研究表明PTEN與OPN在腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。卵巢上皮性惡性腫瘤按照國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)2000年制定的手術(shù)及病理分期標(biāo)準(zhǔn)[1],分為漿液性乳頭狀囊腺癌、粘液性乳頭狀囊腺癌、腺癌、透明細(xì)胞癌及未分化癌。本研究擬通過(guò)檢測(cè)上皮性卵巢惡性腫瘤組織交界性、良性上皮性卵巢腫瘤組織，正常卵巢組織中PTEN、OPN的表達(dá)情況及相關(guān)性分析，探討二者對(duì)上皮性卵巢惡性腫瘤早期診斷、預(yù)后評(píng)估的意義。

資料與方法

1 材料來(lái)源 隨機(jī)選取西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院2009年1月至2012年9月間手術(shù)切除的卵巢組織標(biāo)本109例，包括12例正常卵巢標(biāo)本，19例良性卵巢上皮性腫瘤標(biāo)本，18例交界性卵巢上皮性腫瘤標(biāo)本，60例上皮性卵巢惡性腫瘤標(biāo)本(其中均包括漿液性、粘液性、子宮內(nèi)膜樣3個(gè)組織類型)。

2 一般資料 109例患者年齡19～74歲，均為首次發(fā)病，術(shù)前2個(gè)月未行任何治療，未合并有其他各系統(tǒng)的惡性腫瘤，依據(jù)卵巢惡性腫瘤FIGO 2000標(biāo)準(zhǔn)及WHO標(biāo)準(zhǔn)，將60例上皮性卵巢惡性腫瘤分期為：Ⅳ期15例，Ⅲ期20例，Ⅱ期14例，Ⅰ期11例；組織學(xué)類型為：19例漿液性囊腺癌，23例粘液性囊腺癌，18例子宮內(nèi)膜樣癌；病理分級(jí)為：低分化(G3)組30例，中分化(G2)組14例，高分化(G1)組16例。

3 方 法

3.1 實(shí)驗(yàn)方法：所有標(biāo)本均在同一條件下采用免疫組化SP 法進(jìn)行染色。即用型鼠抗人PTEN單克隆抗體(克隆號(hào)：MAB847)、即用型鼠抗人OPN單克隆抗體(克隆號(hào)：28h6)，均購(gòu)自R&D Systems公司，即用型二抗檢測(cè)試劑盒購(gòu)自福建邁新生物公司，取PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，公司提供陽(yáng)性對(duì)照切片。

3.2 免疫組化結(jié)果判定：PTEN染色陽(yáng)性部位主要位于胞漿、胞核，OPN染色陽(yáng)性部位主要位于胞核中，陽(yáng)性表達(dá)均呈黃色或棕黃色顆粒。每例標(biāo)本用隨機(jī)方法選取10個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)每視野100個(gè)細(xì)胞。按照陽(yáng)性細(xì)胞百分率，著色程度進(jìn)行計(jì)算分析。陽(yáng)性細(xì)胞百分率評(píng)分法：陽(yáng)性細(xì)胞所占百分率≤10%：1分，11%～50%：2分，51%～75%：3分，≥75%：4分。陽(yáng)性細(xì)胞著色強(qiáng)度評(píng)分法：無(wú)色：0分，淡黃色：1分，棕黃色：2分，棕褐色：3分。結(jié)果為二者評(píng)分之乘積，大于3分判定為陽(yáng)性，0～3分判定為陰性。標(biāo)本由2名病理醫(yī)師盲法閱片作出判定。

3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，當(dāng)t<1，n<40應(yīng)用精確概率法求得P值，采用Spearman等級(jí)相關(guān)性對(duì)PTEN和OPN相關(guān)性進(jìn)行分析。當(dāng)P<0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著差異。

結(jié) 果

1 PTEN、OPN的表達(dá)：PTEN在正常卵巢組織、良性上皮性卵巢組織、交界性上皮性卵巢腫瘤組織、惡性上皮性卵巢腫瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為100%、94.70%、88.90%、25%。前三者與惡性上皮性卵巢腫瘤組織中表達(dá)率相比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(正常組-惡性組：P=0.000;良性組-惡性組：P=0.000;交界組-惡性組：P=0.000)。OPN在正常卵巢組織、良性上皮性卵巢組織、交界性上皮性卵巢腫瘤組織、惡性上皮性卵巢腫瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為8%、15.78%、27.77%、76.66%。前三者與惡性上皮性卵巢腫瘤組織中表達(dá)率相比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(正常組-惡性組：P=0.000;良性組-惡性組：P=0.000，交界組-惡性組：P=0.000)，見(jiàn)表1(圖1～8)。

表1 PTEN、OPN在不同卵巢組織中的表達(dá)

2 PTEN、OPN的表達(dá)與上皮性卵巢惡性腫瘤臨床病理之間的關(guān)系： PTEN在上皮性卵巢惡性腫瘤不同臨床分期、病理分級(jí)中的表達(dá)率存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(I-II期組-III-IV期組：P=0.001，G1組-G2組：P=0.009，G1組-G3組：P=0.000，G2組-G3組：P=0.027)。隨著上皮性卵巢惡性腫瘤的臨床分期升高、病理分級(jí)的減低，PTEN蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率降低；PTEN在漿液性囊腺癌、卵巢子宮內(nèi)膜樣癌、粘液性囊腺癌不同組織類型中的表達(dá)率，兩兩比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。OPN在上皮性卵巢惡性腫瘤不同臨床分期、病理分級(jí)中的表達(dá)率存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(I-II期組-III-IV期組：P=0.000，G1組-G2組：P=0.014，G1組-G3組：P=0.000，G2組-G3組：P=0.027)，隨著上皮性卵巢惡性腫瘤的臨床分期升高、病理分級(jí)的減低，OPN蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率升高；OPN在漿液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、卵巢子宮內(nèi)膜樣癌不同組織類型中的表達(dá)率，兩兩比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見(jiàn)表2。

3 PTEN、OPN表達(dá)的相關(guān)性： 在15例PTEN表達(dá)陽(yáng)性的標(biāo)本中，有9例OPN的陰性表達(dá)，在45例PTEN表達(dá)陰性的標(biāo)本中，有40例OPN的陽(yáng)性表達(dá)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)法，結(jié)果提示PTEN和OPN表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P<0.01)。

表2 PTEN、OPN的表達(dá)與上皮性卵巢惡性 腫瘤臨床病理之間的關(guān)系

討 論

1 PTEN在上皮性卵巢惡性腫瘤中的表達(dá)及意義：已有研究證實(shí)PTEN 在多種腫瘤組織中存在表達(dá)下調(diào)、缺失或突變，如膀胱癌[2]、乳腺癌[3]、子宮內(nèi)膜癌[4]等。關(guān)于PTEN與卵巢惡性腫瘤關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究大多數(shù)研究者所持觀點(diǎn)不進(jìn)相同：PTEN基因的低表達(dá)或缺失與上皮性卵巢惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。本研究結(jié)果顯示卵巢正常組織中PTEN陽(yáng)性表達(dá)率是惡性上皮性卵巢腫瘤組織中PTEN陽(yáng)性表達(dá)率的4倍?？梢?jiàn)PTEN是上皮性卵巢惡性腫瘤相關(guān)的抑癌基因，PTEN的低表達(dá)和(或)缺失參與了上皮性卵巢惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。Schondorf[5]對(duì)40例上皮性卵巢惡性腫瘤組織的PTEN分析結(jié)果顯示，隨著臨床分期的升高、病理分化的降低PTEN表達(dá)逐漸下降。與本研究所得結(jié)果基本相同。PTEN在腫瘤發(fā)生早期表達(dá)明顯減弱(早期上皮性卵巢惡性腫瘤組織的PTEN陽(yáng)性表達(dá)率為48.0%，明顯低于正常卵巢組織100%的表達(dá))，提示在腫瘤發(fā)生早期就存在PTEN的明顯低表達(dá)，有望成為卵巢惡性腫瘤高危人群的早期篩查指標(biāo)之一。

2 OPN在上皮性卵巢惡性腫瘤中的表達(dá)及意義：許多研究均發(fā)現(xiàn)OPN和上皮性卵巢惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移、侵襲密切相關(guān)，可彌補(bǔ)CA125在上皮性卵巢惡性腫瘤患者病情、治療反應(yīng)監(jiān)測(cè)中的不足。Kim[6]使用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行了類似研究與本研究應(yīng)用免疫組化方法所得結(jié)果基本相同?？梢?jiàn)OPN在上皮性卵巢惡性腫瘤中高表達(dá)，是上皮性卵巢惡性腫瘤相關(guān)的癌基因，與上皮性卵巢惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。但OPN蛋白在上皮性卵巢惡性腫瘤組織中的表達(dá)率為76.66%，其特異性中度，若將其和其它敏感基因在上皮性卵巢惡性腫瘤組織中的表達(dá)檢測(cè)聯(lián)合應(yīng)用，不但有易于上皮性卵巢惡性腫瘤的診斷及預(yù)后評(píng)估，更有利于上皮性卵巢惡性腫瘤的早期診斷。

3 PTEN、OPN在上皮性卵巢惡性腫瘤中的相關(guān)性達(dá)及意義：磷酸化及去磷酸化通常是調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖分化的主要機(jī)制。PTEN可通過(guò)PI3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑發(fā)揮其抑癌作用[7]，其通過(guò)抑制PIP3激酶的磷酸化，使PIP3保持在低水平，阻滯 Akt 及下游激酶的活性，使腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。OPN也可通過(guò)PI3K/AKT途徑抑制細(xì)胞凋亡，進(jìn)一步調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。共同的信號(hào)傳導(dǎo)通路形成了兩者之間的相關(guān)聯(lián)系。從而，推測(cè)正因?yàn)榇薖TEN對(duì)OPN信號(hào)傳導(dǎo)途徑抑制作用的減少或消失使得OPN在卵巢惡性腫瘤組織中的表達(dá)明顯增加。本研究結(jié)果顯示， PTEN 表達(dá)與OPN 的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。從本研究結(jié)果可以推測(cè) PTEN與OPN可以聯(lián)合作為判斷上皮性卵巢腫瘤惡性程度、評(píng)估患者預(yù)后的指標(biāo)。它提供了有關(guān)惡性卵巢上皮性腫瘤發(fā)生、發(fā)展分子生物學(xué)水平的一條新的研究思路。

[1] 邢蘭瑛，蔡?hào)|閣，劉 星.桂枝茯苓膠囊及生長(zhǎng)抑素類似物在30例卵巢癌化療中的作用研究[J]．陜西中醫(yī)，2006，27(10)：1169-1170.

[2] 葉木石，蘇 勁．PTEN、PCNA、CerbB-2在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)及意義[J]．實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志，2011，15 (24): 50-52．

[3] 陳 勇，郭 偉，李洪濤．抑癌基因PTEN和FHIT在乳腺癌中的表達(dá)及意義[J]．中華全科醫(yī)學(xué)，2013，11 (12): 1847-1848．

[4] 陳迎秀，王學(xué)芳．PTEN及P53蛋白在不同類型子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)及意義[J]．實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志，2009，13 (11): 91-92．

[5] Schondorf T, Cohing U J, Roth G. Time to progression is dependent on the expression of the tumour suppressor PTEN in ovarian cancer patients[J]. Euro Journal of Cli Inv Gomes, 2003, 33(1): 256-260.

[6] Kim J H, Skates S J, Uede T,etal. Osteopontin as a potential diagnostic biomarkerfor ovarian cancer[J]. J Am Med Assoc, 2002, 287(13): 167l-l679.

[7] Bouali S, Chretien A S, Ramacci C,etal. PTEN expression controls cellular response to cetuximab by mediating PI3K/AKT and RAS/RAF/MAPK downstream signaling in KRAS wild-type, hormone refractory prostate cancer cells[J]. Oncol Rep, 2009, 21(3): 731-735.

(收稿：2014-08-12)

Expression and significance of PTEN and OPN in epithelial ovarian cancer

Xi Dian Group Hospital

(Xi’an 710077) Cao Xin

Objective: To study the effect of PTEN and OPN in the occurrence and development of epithelial ovarian cancer. Methods : The expressions of PTEN and OPN protein were evaluated 60 in epithelial ovarian cancer, 18 borderline epithelial ovarian tumor, 19 epithelial ovarian tumor and 12 the normal ovary tissue by inununohistochemistry(SP method). Applied medical statistics methods to analysis of the difference of expression. Results: The positive rate of PTEN,OPN in epithelial ovarian cancer, borderline epithelial ovarian tumor , benign epithelial ovarian tumor , normal ovary tissue was 25.00%、88.90%、94.70%、100.00%；76.66%、27.77%、15.78%、8.00%，The expression level of PTEN decreased with the increase of clinical stage ,with the decrease of pathology level. The expression rate of OPN increased follow the increase of clinical stage ,follow the decrease of pathology level. PTEN lower expression and expression of OPN had negative relevance. Conclusion: ①The expression of PTEN、OPN Respectively have evident difference in epithelial ovarian cancer, borderline epithelial ovarian tumor , benign epithelial ovarian tumor, normal ovary tissue,both is negative correlation. ②Combined detection both may have some significance for early diagnosis of ovarian cancer.

Ovarian neoplasms/immunology @ PTEN genes Osteapontin/immunology Immunohistochemistry Genes,suppressor

卵巢腫瘤/免疫學(xué) @PTEN基因 骨橋蛋白/免疫學(xué) 免疫組織化學(xué) 基因，抑制

R392.3

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2015.03.008