祝 輝 羅自力 張國慶 何德云 杜建紅

成都軍區(qū)藥品儀器檢驗所，四川 成都 610017

HPLC法測定中藥成分溶度參數(shù)的實驗研究

祝 輝 羅自力 張國慶 何德云 杜建紅

成都軍區(qū)藥品儀器檢驗所，四川 成都 610017

目的：探討高效液相色譜法用于測定中藥成分溶度參數(shù)的可行性。方法：運用色譜理論及Hildebrand-Scatchard溶解度理論創(chuàng)立HPLC法測定化合物的溶度參數(shù)的數(shù)學表達式，利用咖啡因驗證該理論并對大黃類成分進行測定。結果：咖啡因驗證該法可信度高，曲線擬合所得蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素和大黃素甲醚溶度參數(shù)分別為39.65 J1/2/cm3/2、39.10 J1/2/cm3/2、38.41 J1/2/cm3/2和36.50 J1/2/cm3/2。結論：高效液相色譜指紋圖譜構建數(shù)學模型方法能夠同時對中藥多個組分進行分析、測定，能夠為單味中藥藥劑的制造工藝提供一定的理論基礎與測定技術方面的支持。

高效液相色譜法；中藥；溶度參數(shù)

中藥及復方有效多成分群的溶解規(guī)律預測是從事中藥制劑研究的前提和基礎[1]。目前，溶解度或總浸出物的方法來衡量中藥及復方中多成分在某一溶劑中的溶解行為并不能從理論上揭示化合物溶解的本質規(guī)律，制約了單味調配中藥的劑型改革和中藥配伍規(guī)律的藥劑學理論的闡明[2]。本文基于HPLC中的指紋圖譜分析方法及原理，對中藥成分溶度參數(shù)進行分析，以期為中藥制劑的現(xiàn)代化提供理論和實驗依據(jù)。

1 HPLC指紋圖譜

中藥指紋圖譜是指某種中藥材或中成藥經過適當處理后，采用一定的分析手段，提取其化學信息并加以描述，能夠標志該中藥材或中成藥特性的共有峰的圖譜[3]。HPLC色譜條件的選擇、穩(wěn)定性試驗和精密度試驗是構建HPLC指紋圖譜的主要部分。

1.1 色譜條件的選擇 應該使中藥成分盡可能多的在HPLC中顯示出來，保持各個峰較好的分離度和峰型。此外色譜條件還要保證主要指標成分以及活性成分能夠非常有效地進行分離。一般將分析時間控制在4h內。DAD檢測器的出現(xiàn)讓我們可疑選擇更多的檢測波長，實現(xiàn)多波長的同時檢測，所獲得的HPLC指紋圖譜能展示中藥多波長指紋圖譜的豐富信息，用其定性和定量分析更準確。進樣量應保持最小成分的特征峰峰面積在4位數(shù)以上。在保證以上條件的前提下，應保持色譜條件的簡單、實用。

1.2 穩(wěn)定性試驗 選擇特定的時間點，如24h、36h及48h，對所制備的供試品溶液的穩(wěn)定性進行考察，計算本時段之內的特征色譜峰的相對保留時間與峰面積的比值的離散程度，相對標準偏差(RSD)應<5%。

1.3 精密度試驗 對儀器的精密度進行考察，可通過兩種方法實現(xiàn)。①制備6～9份供試品溶液，對不同時間段內的特征峰保留時間及峰面積進行分析，RSD<5%為合格。②同一供試品溶液在同一個色譜條件之下，以及在同一個時間段之內進行6～9次的連續(xù)進樣，對特征峰保留時間及峰面積進行分析，RSD<3%為合格。

2 基本原理

2.1 中藥單成分保留時間與溶度參數(shù)的關系Hildebrand-Scatchard正規(guī)溶液溶解度方程與HPLC色譜原理結合的公式為：

①

②

最終計算得到

③

2.2 總量參數(shù)AT,BT,CT與指紋圖譜總量幾何平均保留時間、單成分保留時間，a，b，c的關系

④

3 材料與方法

3.1 儀器與材料 Agilent 1200高效液相色譜儀，配備DAD檢測器；梅特勒XPE型電子天平；咖啡因(批號：050605)上海試劑二廠生產；蘆薈大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素和大黃素甲醚均購自中國藥品生物制品鑒定所；乙腈為色譜純；水為Milliq水。

3.2 方法

3.2.1 供試品的制備 分別精密稱取咖啡因和大黃類藥物成分的標準品各5mg置于25 ml容量瓶中，乙腈定容至刻度，為標準液。分別量取上述大黃類藥物成分標準液1ml，混合后制成混合對照品溶液。均過膜備用。

3.2.2 色譜條件 色譜柱：安捷倫ZOBAX PLUS色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；柱溫：30℃；進樣量：10μl；流動相：乙腈和水梯度洗脫，咖啡因運行50min，乙腈體積比由30%～100%運行，25%～100%、15%～100%、10%～100%、5%～100%和0%～100%6個程序。大黃類藥物運行100min，乙腈體積比由50%～100%運行，40%～100%、30%～100%、20%～100%、10%～100%和0%～100%6個程序。

4 結果與分析

4.1 咖啡因單成分溶度參數(shù) 指紋圖譜幾何平均保留時間與總量表觀溶度參數(shù)關聯(lián)的函數(shù)表達式或數(shù)學模型，根據(jù)數(shù)學表達式計算出咖啡因在不同洗脫條件下的溶度參數(shù)值大小值分別為38.02 J1/2/cm3/2、38.34 J1/2/cm3/2、38.96 J1/2/cm3/2、39.23 J1/2/cm3/2、39.96 J1/2/cm3/2和40.25 J1/2/cm3/2。進行求導線性法處理，δR得見表1。

表1 咖啡因導數(shù)線性回歸法所得溶度參數(shù)

4.2 大黃類成分溶度參數(shù) 根據(jù)數(shù)學表達式計算出蘆薈大黃素在不同洗脫條件下的溶度參數(shù)值分別為42.02 J1/2/cm3/2、43.34 J1/2/cm3/2、44.92 J1/2/cm3/2、46.27 J1/2/cm3/2、43.35 J1/2/cm3/2和45.49 J1/2/cm3/2。大黃酸在不同洗脫條件下的溶度參數(shù)值分別為42.02 J1/2/cm3/2、43.34 J1/2/cm3/2、44.92 J1/2/cm3/2、46.27 J1/2/cm3/2、43.35 J1/2/cm3/2和45.49 J1/2/cm3/2。大黃素在不同洗脫條件下的溶度參數(shù)值分別為41.49 J1/2/cm3/2、42.43 J1/2/cm3/2、44.22 J1/2/cm3/2、44.69 J1/2/cm3/2、45.39 J1/2/cm3/2和45.99 J1/2/cm3/2。大黃素甲醚在不同洗脫條件下的溶度參數(shù)值分別為38.12 J1/2/cm3/2、39.54 J1/2/cm3/2、40.92 J1/2/cm3/2、41.47 J1/2/cm3/2、42.55 J1/2/cm3/2和43.59 J1/2/cm3/2。大黃類成分進行求導線性法處理，得見表2。曲線擬合所得蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素和大黃素甲醚溶度參數(shù)分別為39.65 J1/2/cm3/2、39.10 J1/2/cm3/2、38.41 J1/2/cm3/2和36.50 J1/2/cm3/2。見表2。

表2 大黃類成分導數(shù)線性回歸法所得溶度參數(shù)

5 結論

本文為中藥復方藥劑學配伍規(guī)律研究搭建理論與技術平臺，該法運用統(tǒng)計學原理，求算指紋圖譜曲線的總量零、一、二階矩。其中總量一階矩為總量保留時間對峰面積的算術平均值，而總量幾何平均保留為總量保留時間對峰面積的幾何平均值，因此可以反映整張圖譜眾多指紋峰的集中趨勢[4]。本文所測得咖啡因和大黃類成分的溶度參數(shù)與文獻報道[5]基本一致，說明本方法可信。因此，高效液相色譜指紋圖譜構建數(shù)學模型方法，能夠同時對中藥多個組分進行分析、測定，能夠為單味中藥藥劑的制造工藝提供一定的理論基礎與測定技術方面的支持。

[1] 賀福元，周宏灝，羅杰英，等．HPLC測定中藥成分溶度參數(shù)的理論與實驗研究[J]．中國中藥雜志，2008，33(6)：642-647．

[2] 賀福元，劉文龍，扶瑾，等．HPLC測定中藥多成分總量溶度參數(shù)的理論及實驗研究[J]．中國中藥雜志，2010，35(8)：977-983．

[3] 李鳳麗，李進，吳嬌．指紋圖譜技術在中藥領域研究中應用現(xiàn)狀[J]．天津藥學，2014，26(3)：52-57．

[4] 張聰，金德莊．中藥山茱萸HPLC色譜指紋特征研究[J]．中成藥，2008，30(12)：1726-1731．

[5] 趙成．高效液相色譜法(HPLC)用于測定中藥成分溶度參數(shù)的研究[J]．亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2012，8(10)：15-16．

祝輝(1979-)，男 ，四川雙流人，漢族，博士，主管藥師，主要從事臨床藥學的研究。

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1007-8517(2015)08-0012-03

2015.01.27)