竇曉壇 李 麗 謝 穎 鄒曉平

胃癌是常見的消化道惡性腫瘤之一。近年來，雖然胃癌的發(fā)病率有所下降，但病死率仍較高［1］。目前晚期胃癌的治療以化學(xué)治療為主，用于胃癌的靶向治療藥物還較少［2］。由于胃癌是一種異質(zhì)性很強(qiáng)的疾病，尋找與胃癌發(fā)病及預(yù)后相關(guān)的分子標(biāo)志物顯得尤為重要［3］。

染色質(zhì)重塑因子AT豐富結(jié)合域1 A（ARID1A）是SWI／SNF染色質(zhì)復(fù)合物家族的重要成員，ARID1 A失活導(dǎo)致的染色質(zhì)重塑可促進(jìn)多種腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展，提示ARID1 A起到抑癌基因的作用［4］。目前有研究發(fā)現(xiàn)，ARID1 A在胃癌中存在高頻突變，并與PIK3CA和TP53突變相關(guān)，提示ARID1 A在胃癌中起到重要作用［5］。

本研究旨在通過免疫組織化學(xué)檢測ARID1 A在胃癌中的表達(dá)情況，并分析其與臨床病理特征的關(guān)系，探討其在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用，為將其作為胃癌早期診斷、判斷預(yù)后的指標(biāo)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 資料

組織芯片購自上海卓立生物科技公司，包括2008年行手術(shù)切除的胃癌標(biāo)本103例以及癌旁組織41例。其中男43例，女60例，年齡32～78歲，平均年齡58.6歲。所有患者術(shù)前均未進(jìn)行任何化學(xué)治療和放射治療。根據(jù)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期，Ⅰ～Ⅱ期59例，Ⅲ～Ⅳ期44例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者56例，無轉(zhuǎn)移者47例。

1.2 免疫組織化學(xué)方法

標(biāo)本作4μm厚度的連續(xù)切片，經(jīng)脫蠟、水化處理后，檸檬酸鹽高溫高壓修復(fù)3 min，雙氧水30 min以阻斷外源性過氧化物酶，山羊血清37℃封閉20 min，兔抗人ARID1 A多克隆抗體（Abcam公司，1∶200稀釋，一抗）4℃過夜，山羊抗兔二抗（北京中杉金橋公司）37℃ 孵育40 min，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水透明封片。

1.3 結(jié)果判定

顯微鏡下計(jì)數(shù)ARID1 A陽性細(xì)胞，計(jì)算陽性表達(dá)的百分?jǐn)?shù)。根據(jù)細(xì)胞染色百分率分別計(jì)分：無陽性細(xì)胞計(jì)0分，陽性細(xì)胞＜25%計(jì)1分，25%～50%計(jì)2分，50%～75%計(jì)3分，＞75%計(jì)4分。根據(jù)染色強(qiáng)度分別計(jì)分：未染色計(jì)0分，弱染色計(jì)1分，中等染色計(jì)2分，強(qiáng)染色計(jì)3分。采用染色強(qiáng)度與細(xì)胞染色百分率評分相乘的計(jì)分方法，≤3分為陰性，＞3分為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。應(yīng)用χ2檢驗(yàn)分析與臨床病理特征的相關(guān)性，Kaplan－Meier單因素分析和Cox多因素分析來分析與預(yù)后的關(guān)系。

2 結(jié)果

2.1 ARID1 A在胃癌中的表達(dá)

在103例胃癌組織中，36例表達(dá)陽性，陽性率35.0%。而在41例癌旁組織中，23例表達(dá)陽性，陽性率56.1%。ARID1 A在胃癌組織中的陽性表達(dá)顯著低于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖1、圖2。

圖1 ARID1 A在胃癌中的表達(dá)

圖2 ARID1 A在癌旁組織中的表達(dá)

2.2 ARID1 A表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

ARID1 A的表達(dá)與腫瘤大小、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和 TNM 分期呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），即ARID1 A在腫瘤體積大、低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Ⅲ～Ⅳ期的胃癌組織中表達(dá)較低，而其與性別、年齡、Lauren分型、腫瘤浸潤深度無關(guān)（P＞0.05）。見表1。

表1 ARID1A蛋白在胃癌中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

2.3 ARID1A表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

Kaplan－Meier單因素分析顯示ARID1 A表達(dá)、腫瘤大小、腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分期與患者預(yù)后相關(guān)（P＜0.05），見圖3。Cox多因素分析結(jié)果顯示，ARID1 A表達(dá)是影響胃癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素（P＜0.05），見表2。

3 討論

胃癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)涉及多種基因、多個(gè)步驟的復(fù)雜過程［6］。目前認(rèn)為，腫瘤的發(fā)生不僅包括遺傳學(xué)的改變（即基因改變），如堿基插入或缺失，同時(shí)也包括表觀遺傳學(xué)改變。表觀遺傳學(xué)改變是指在基因核苷酸序列不發(fā)生改變的情況下，基因表達(dá)的可遺傳改變，其主要包括染色質(zhì)重塑、DNA甲基化和非編碼RNA［7］。染色質(zhì)重塑過程需要兩類復(fù)合物參與，一類是ATP依賴的染色質(zhì)重塑復(fù)合物，另一類是蛋白質(zhì)共價(jià)修飾復(fù)合物，如組蛋白乙?；取TP依賴的染色質(zhì)重塑復(fù)合物由多種亞基組成，通過影響局部染色質(zhì)結(jié)構(gòu)而激活或抑制基因轉(zhuǎn)錄［8］，其中ARID1 A是重要的亞基之一。

圖3 胃癌患者預(yù)后分析

表2 胃癌患者多因素預(yù)后分析

ARID1 A屬于SWI／SNF重塑復(fù)合物成員，人ARID1 A基因定位于第1號染色體1p35.3，包含20個(gè)外顯子，編碼一個(gè)由2 285個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成，相對分子質(zhì)量約240 000的蛋白質(zhì)［9］。近年來研究發(fā)現(xiàn)，ARID1 A在許多腫瘤中有特異性的突變，如在卵巢透明細(xì)胞癌中有50%的突變，在33%的子宮內(nèi)膜癌中也有突變［4，10］。研究表明 ARID1 A可能起到抑癌基因的作用。Katagiri等［11］運(yùn)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測ARID1 A在60例卵巢透明細(xì)胞癌中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)ARID1 A在腫瘤中出現(xiàn)表達(dá)缺失，與FIGO分期和CA125水平相關(guān)。預(yù)后分析提示ARID1 A表達(dá)是卵巢癌的獨(dú)立預(yù)后因素。

目前有研究發(fā)現(xiàn)，在胃癌中也存在ARID1 A的高頻突變，且這種突變在EB病毒感染和存在微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的胃癌亞型中頻率更高［5，12］。ARID1 A在胃癌中也起到抑癌基因的作用。Wang等［13］采用免疫組織化學(xué)和real－ti me技術(shù)檢測ARID1 A在胃癌中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)與非腫瘤組織相比較，ARID1 A在胃癌中的表達(dá)降低，并與T分期和分級相關(guān)，且預(yù)后分析提示ARID1 A是胃癌的獨(dú)立預(yù)后因素，Yan等［14］的研究也得出類似結(jié)論。但是 Wiegand等［15］的研究并未發(fā)現(xiàn)ARID1A是胃癌的獨(dú)立預(yù)后因素。本研究發(fā)現(xiàn)，與癌旁組織相比，ARID1 A在胃癌中的表達(dá)降低，且與腫瘤大小、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期呈負(fù)相關(guān)，預(yù)后分析也發(fā)現(xiàn)ARID1 A是胃癌的獨(dú)立預(yù)后因子。以上研究提示ARID1 A可能參與胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移。

目前對于ARID1 A對胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的機(jī)制研究還較少。Yan等［14］發(fā)現(xiàn)沉默ARID1 A后 E－鈣黏蛋白（E－cadherin）的表達(dá)也降低，熒光素酶報(bào)告基因和染色質(zhì)免疫共沉淀（CHIP）顯示ARID1 A與CDH1（編碼E－cadherin）啟動子區(qū)結(jié)合，調(diào)控其轉(zhuǎn)錄。降低ARID1 A表達(dá)后，可促進(jìn)胃癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT），從而促進(jìn)其侵襲和轉(zhuǎn)移。ARID1 A是否對胃癌細(xì)胞的其他生物學(xué)行為有影響，如增殖、凋亡、血管形成等，尚需進(jìn)一步研究。

綜上所述，ARID1A是胃癌發(fā)生發(fā)展中的重要因子，與胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)，這可為研究胃癌的發(fā)生機(jī)制和尋找靶向治療靶點(diǎn)提供依據(jù)。

1 Jemal A，Bray F，Center MM，et al.Global cancer statistics.CA Cancer J Clin，2011，61：69－90.

2 Lee JH，Ki m K M，Cheong JH，et al.Current management and f ut ure strategies of gastric cancer.Yonsei Med J，2012，53：248－257.

3 Hol brook JD，Par ker JS，Gallagher KT，et al.Deep sequencing of gastric carcino ma reveals so matic mutations relevant to personalized medicine.J Transl Med，2011，9：119.

4 Jones S，Wang TL，Shih Ie M，et al.Frequent mutations of chr o matin remodeling gene ARID1 A in ovarian clear cell carcino ma.Science，2010，330：228－231.

5 Zang ZJ，Cutcutache I，Poon SL，et al.Exo me sequencing of gastric adenocarcino ma identifies recurrent so matic mutations in cell adhesion and chro matin remodeling genes.Nat Genet，2012，44：570－574.

6 Zheng L，Wang L，Ajani J，et al.Molecular basis of gastric cancer develop ment and pr ogression.Gastric Cancer，2004，7：61－77.

7 Yasui W，Sentani K，Sakamoto N，et al.Molecular pat hology of gastric cancer：research and practice.Pathol Res Pract，2011，207：608－612.

8 Hargreaves DC，Crabtree GR.ATP－dependent chro matin remodeling：genetics，genomics and mechanisms.Cell Res，2011，21：396－420.

9 Guo XQ，Zhang QX，Huang WR，et al.Tu mor suppressor role of chromatin－remodeling factor ARID1A.Yi Chuan，2013，35：255－261.

10 W iegand KC，Shah SP，Al－Agha O M，et al.A RID1 A mutations in endometriosis－associated ovarian carcinomas.N Engl J Med，2010，363：1532－1543.

11 Katagiri A，Nakaya ma K，Rah man MT，et al.Loss of ARID1 A expression is related to shorter progression－free survival and chemoresistance in ovarian clear cell carcinoma.Mod Pathol，2012，25：282－288.

12 Wang K，Kan J，Yuen ST，et al.Exome sequencing identifies frequent mutation of ARID1 A in molecular subtypes of gastric cancer.Nat Genet，2011，43：1219－1223.

13 Wang DD，Chen YB，Pan K，et al.Decreased expression of the ARID1 A gene is associated with poor prognosis in pri mary gastric cancer.PLoS One，2012，7：e40364.

14 Yan HB，Wang XF，Zhang Q，et al.Reduced expression of t he chr o matin remodeling gene ARID1 A enhances gastric cancer cell migration and invasion via downregulation of E－cadherin transcription.Carcinogenesis，2014，35：867－876.

15 Wiegand KC，Sy K，Kalloger SE，et al.ARID1 A／BAF250a as a prognostic mar ker f or gastric carcino ma：a st udy of 2 cohorts.Hu m Pat hol，2014，45：1258－1268.