張 俐，錢桂英

(常熟市中醫(yī)院，江蘇 常熟 215500)

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HPLC法測定婦安寧洗劑中苦參堿含量

張 俐，錢桂英

(常熟市中醫(yī)院，江蘇 常熟 215500)

目的：對婦安寧洗劑中苦參堿的含量進行測定，為藥品質(zhì)量標準的評價和臨床用藥提供藥理依據(jù)和參考。方法：采用HPLC法測定婦安寧洗劑中苦參堿的含量，色譜柱：Prominenece UFLC XDB-C18(4.6mm×250.0mm，5μm)；流動相：乙腈-水-0.1%乙胺(65∶35∶0.2)；流速：1.0mL/min；紫外線檢測波長：220nm；柱溫：30℃。結(jié)果：苦參堿在0.16～1.28μg質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，與峰面積線性關(guān)系良好,色譜峰面積結(jié)果RSD=2.9%(n=6)，表明方法重復性良好；供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定；使用乙腈-水-乙胺(65∶35∶0.2)，結(jié)果顯示回收率較高，分離效果好，精密度高，準確可靠。結(jié)論：HPLC法能夠完整、全面地反映婦安寧洗劑的質(zhì)量，結(jié)果可靠，且操作簡便，重現(xiàn)性好，可用于婦安寧洗劑的質(zhì)量控制，為苦參的臨床使用提供了理論依據(jù)，可為其他藥品的檢測方法提供參考。

苦參堿；婦安寧洗劑；HPLC法；含量測定

婦安寧洗劑為我院根據(jù)臨床驗方研制的中藥外用制劑，主要由苦參、野菊花、黃柏、蛇床子、土茯苓等十五味中藥組成，具有清利下焦?jié)駸?、消炎止癢、除穢殺菌的功效，臨床常用于細菌性、霉菌性、滴蟲性陰道炎等婦科疾病以及淋病、尖銳濕疣等性傳播疾病和多種皮膚瘙癢癥的防治[1]。為深入了解藥品的成分及功效，控制藥品的質(zhì)量，本研究采用HPLC法對制劑進行定性鑒別，以苦參有效成分為指標測定其中苦參堿的含量。HPLC法測定苦參堿方法簡便、準確且重復性好[3]，可為婦安寧洗劑質(zhì)量標準的評價提供藥理依據(jù)?？鄥A是豆科植物苦參的干燥根、植株、果實經(jīng)乙醇等有機溶劑提取的主要成分，具有利尿、抗病原體、抗過敏、抗炎等作用[2]。

1 儀器與方法

1.1 儀器

島津液相色譜儀Prominenece UFLC，包括列可變波長檢測器、四元泵、化學T作站(日本島津公司生產(chǎn))；AUW220D萬分之一電子天平(日本島津公司生產(chǎn))；數(shù)控超聲波清洗機PS-30A、微孔濾膜、真空泵抽濾裝置(東莞市潔康超聲波設(shè)備有限公司生產(chǎn))；苦參堿對照品(供含量測定用，中國食品藥品檢定研究院提供，批號：110805．201008)；婦安寧洗劑(本院劑室自制，批號分別為：20140610-20080613)，乙腈(色譜純)，甲醇、無水乙醇、三乙胺均為分析純，水為重蒸餾水。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱：Prominenece UFLC XDB-C18(4.6mm×250.0mm，5μm)；流動相：乙腈-水-0.1%乙胺(65∶35∶0.2)；流速：1.0mL/min；紫外線檢測波長：220nm；柱溫：30℃，進樣量：10μL。

1.2.2 對照品溶液制備 精密稱取干燥至恒重的苦參堿對照品10.88mg，置于50mL容量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻得對照品溶液。

1.2.3 供試品溶液制備 取婦安寧洗劑10mL，置具塞棕色量瓶中，加濃氨溶液2mL，搖勻加20mL三氯甲烷，分液漏斗過濾，按上述步驟提取3次，提取液蒸干，殘渣加40%甲醇溶解并定容于25mL量瓶中，用微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

1.2.4 系統(tǒng)適用性試驗 分別吸取兩組溶液各10μL，注入液相色譜儀，按苦參堿峰計算，理論塔板數(shù)為3 000以上測定。根據(jù)以上制備條件分別進行專屬性試驗、線性關(guān)系考察、精密度實驗、重現(xiàn)性實驗、穩(wěn)定性實驗、加樣回收率試驗和樣品含量測定。

2 結(jié)果

2.1 專屬性試驗

對照品溶液、供試品溶液色譜結(jié)果見圖1，供試品溶液主峰的保留時間與對照品溶液主峰的保留時間一致，陰性對照溶液在對照品溶液色譜峰相應(yīng)的保留時間處沒有出峰，表明其他成分對供試品溶液中苦參堿的測定無干擾，專屬性較好。

圖1 對照品與供試品溶液色譜

2.2 線性關(guān)系考察

精密吸取上述對照品溶液(0.218g·L-1)1.25、2.5、5.0、7.5、10.0mL分別置于10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，使制成含苦參堿為27.25、54.50、109.00、163.50、218.00mg·L-1的對照品溶液。從中分別精密吸取10μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積。以進樣質(zhì)量濃度(mg·L-1)為橫坐標，峰面積為縱坐標進行回歸，得標準曲線方程為A=9 556C+23 490(r=0.999 8),結(jié)果表明，苦參堿在27.25～218.00mg·L-1質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.3 精密度試驗

取同一批研究組溶液(批號20140610)制得供試品溶液，按照上述色譜條件連續(xù)重復進樣6次，記錄峰面積，結(jié)果苦參堿色譜峰面積的RSD為0.79%，表明儀器精密度良好。

2.4 重復性試驗

取同一批研究組溶液，平行制備6份供試品溶液，色譜峰面積結(jié)果RSD=2.9%(n=6)，表明該方法重復性良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗

精密量取同一供試品溶液分別于0、2、4、8、10、12h進樣10μL，RSD=1.5%，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 含量測定

4批樣品含量測定結(jié)果詳見表1。

表1 婦安寧洗劑中苦參堿含量 (n=3，mg·mL-1)

2.7 回收率試驗

采用加樣回收法，精密量取已知含量的婦安寧洗劑共4組，每組分別精密加入80μg/mL的苦參堿對照組貯備液2.0、4.0、6.0mL，制備供試品。色譜測定苦參堿回收率結(jié)果，詳見表2。

表2 苦參堿回收率試驗結(jié)果

3 討論

婦安寧洗劑是由多種中藥配制而成的中藥復方外用制劑?？鄥⑹菋D安寧洗劑的主要成分，苦參堿系苦參中含量較高的生物堿，具有抑制金黃色葡萄球菌、變形桿菌、大腸桿菌等作用[4]，本研究采用HPLC法測定苦參堿的含量作為婦安寧洗劑質(zhì)量控制的主要指標。在制備供試品溶液時，將苦參堿萃取完全，通過氧化鋁柱洗脫，可除去許多其他組分的干擾，保護了色譜柱，并使峰形更單一。有研究表明，選用乙腈-無水乙醇-3%磷酸溶液、甲醇-水-三乙胺等方法分離效果均不理想，本研究使用乙腈-水-乙胺(65∶35∶0.2)作為流動相，結(jié)果顯示回收率較高，分離效果好，精密度高，結(jié)果準確可靠，是測定婦安寧洗劑中苦參堿含量的有效方法。在選擇波長方面，對苦參堿標準溶液進行全波長掃描，結(jié)果表明最大吸收值位于標準溶液200nm處[5-6]。但考慮紫外吸收末端的干擾較大，故本研究選擇檢測波長為220nm。研究結(jié)果表明，本方法能夠完整、全面地反映婦安寧洗劑的質(zhì)量，結(jié)果可靠，且操作簡便，重現(xiàn)性好，可用于婦安寧洗劑的質(zhì)量控制，為苦參的臨床使用提供了理論依據(jù)，可為其他藥品的檢測方法提供參考。

[1] 馬玲娣，朱志超，盧緒章，等.苦參堿對K562細胞NKG2D配體表達的影響及其機制研究[J].中華血液學雜志，2014，35(5)：438-442.

[2] 侯杰榮，柯發(fā)敏，侯思奎.HPLC法同時測定苦參中3種生物堿的含量[J].中藥材，2014，37(2)：273-275.

[3] 張廣求，王樹平，劉文.高效液相色譜法測定參菊洗劑中苦參堿的含量[J].中國醫(yī)院用藥評價與分析，2014，14(3)：232-234 .

[4] 羅德啟.高效液相色譜法測定癢葏洗劑中苦參堿和氧化苦參堿的含量[J].醫(yī)藥導報，2011，30(1)：103-104.

[5] 鄭堰心，張麗，鄧虹珠.槐定堿、苦參堿和苦豆堿對LPS誘發(fā)結(jié)腸上皮細胞炎癥模型中細胞因子IL-6和TNF-α水平的影響[J].中國實驗方劑學雜志，2014，20(8)：133-136.

[6] 秦學玲，康紹建，周磊.RP-HPLC法同時測定清肺抑火片中苦參2種成分的含量[J].云南中醫(yī)中藥雜志，2014，35(10)：67-68.

(責任編輯：魏 曉)

Determination of Matrine in Fu anning lotion by HPLC Method

Zhang Li，Qian Guiying

(Changshu Municipal Hospital of TCM，Changshu 215500，China)

Objective:Determinate the content of matrine in Fu Anning lotion, as the drug quality standard of evaluation and pharmacological basis and reference for the clinical medication. Methods:Fu Anning lotion were determined by HPLC method, the content of matrine in，Chromatographic column: Prominenece UFLC XDB-C18(4.6mm×250.0mm，5μm)；Mobile phase：acetonitrile-water-0.1% ethylamine(65∶35∶0.2)；The velocity：1.0 mL/min；UV detection wavelength ：220nm；Column temperature：30℃. Results:Matrine in 27.25～218.00mg·L-1mass concentration range, and good linear relationship between peak area, Chromatographic peak area results 2.9% RSD (n = 6), showed that method repeatability is good ；Within 12h of test sample solution stability; Using acetonitrile-water-ethyl amine (65∶35∶0.2), the results show that the recovery rate is higher, the separation effect is good, high precision, accurate and reliable. Conclusion:HPLC method to complete, the quality of the overall reaction Fu Anning lotion, the result is reliable, and easy operation, good reproducibility, and can be used in the quality control of Fu Anning lotion, provides a theoretical basis for the clinical use of sophora, can provide reference for other drug detection method.

Matrine；Fu anning lotion；HPLC；Content Determination

2015-01-30

張俐(1961-),女，江蘇省常熟市中醫(yī)院副主任藥師，研究方向為醫(yī)院藥學。

R284

A

1673-2197(2015)13-0027-02

10.11954/ytctyy.201513011