張小紅，梁 潔，肖 雪,*，史慶龍

(1.廣東省食品藥品職業(yè)技術學校，廣東 廣州 510663；2.廣東藥學院，廣東 廣州 510006；3.中山大學 南沙研究院，廣東 廣州 511458)

?

HPLC法測定林芝地區(qū)丹參中丹參酮IIA含量研究

張小紅1，梁 潔2，肖 雪2,3*，史慶龍3

(1.廣東省食品藥品職業(yè)技術學校，廣東 廣州 510663；2.廣東藥學院，廣東 廣州 510006；3.中山大學 南沙研究院，廣東 廣州 511458)

目的：采用高效液相色譜(HPLC)法測定不同采收期丹參不同部位丹參酮IIA的含量。方法：采用HPLC法測定，色譜柱為Phenomenex C18柱(4.60mm×250mm，5μm)；流動相為水(A)—甲醇(B)(75∶25)等度洗脫，流速為1mL/min；檢測波長為270nm，柱溫25°C。結果：丹參酮IIA含量測定線性范圍為3.24～97.2μg/mL，R2=0.999 9，平均加樣回收率為99.1%。結論：不同采收期丹參不同部位丹參酮IIA含量有差異。

丹參；丹參酮IIA；含量測定

丹參為唇形科植物(SalviamiltiorrhizaBge.)的干燥根和根莖，具有活血祛瘀、通經(jīng)止痛、清心除煩、涼血消癰等功效，廣泛用于各種痹證、痛證的臨床治療[1]。丹參是目前國內用量極大的一味中藥材，諸多治療心腦血管疾病中成藥制劑均以丹參為主藥[2-4]。丹參主要成分為：一類是脂溶性成分，以丹參酮類成分為主[5-8]；一類是水溶性成分，以丹參酚酸類成分為主[9-12]。本文主要研究不同產(chǎn)收期丹參原植物不同部位中丹參酮類主要指標丹參酮IIA的含量變化，現(xiàn)具體報道如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 1260 Series LC液相色譜系統(tǒng)(美國安捷倫科技有限公司，包括二元梯度泵、二極管陣列檢測器、柱溫箱、Chemstation化學工作站等)；XS105型電子天平(d=0.01 mg，梅特勒—托利多國際貿易(上海)有限公司)；SL300N型電子天平(上海精密科學儀器有限公司)；XJD250B型微型高速粉碎機(姜堰市銀河儀器廠)；Milli-Q超純水儀(默克密理博公司)。

1.2 材料

丹參酮IIA(批號110766-200619)對照品，購于中國食品藥品檢定研究院；甲醇(色譜純，德國默克集團公司)；其他試劑為分析純(北京現(xiàn)代東方精細化工有限公司)。

丹參全草于2014年9月和10月采自西藏自治區(qū)林芝地區(qū)，經(jīng)鑒定為唇形科植物丹參(SalviamiltiorrhizaBge.)。按炮制方法，分別得到含水量≤13%的丹參藥材(根莖)[1]、丹參莖、丹參葉，其中莖、葉為丹參根莖剩余部分的混合樣品。

2 方法與結果

2.1 色譜條件[1]

色譜柱：Phenomenex C18柱(4.60mm×250mm，5μm)；流動相條件：水(A)-甲醇(B)(75∶25)；洗脫時間：25min；流速：1.0mL/min；檢測波長270nm，柱溫25°C，進樣量為5μL。

2.2 丹參酮IIA對照品溶液制備

精密稱取丹參酮IIA對照品1.62mg，置于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為標準品母液。各取標準品溶液適量置于10mL量瓶中，加入甲醇溶液至刻度，搖勻配制一系列不同濃度的混合標準品溶液。

2.3 供試品溶液制備

精密稱取丹參粉末(過3號篩)0.3g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，加熱回流1h，放冷，用甲醇補足缺失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 空白干擾試驗

取供試品溶液、丹參酮IIA對照品溶液和缺丹參空白液，各進樣5μL，結果表明丹參酮IIA對照品溶液和供試品溶液均呈現(xiàn)吸收峰，而缺丹參空白液在與對照品相應位置無色譜峰出現(xiàn)，表明該測定無干擾。見圖1。

圖1 丹參色譜

2.5 線性關系考察

精密吸取丹參酮IIA對照品溶液，分別進樣5μL，注入高效液相色譜儀，測定峰面積積分值。以丹參酮IIA對照品濃度(μg/mL)為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得到回歸方程為：Y=31.501X-16.653，R2=0.999 9。結果表明，丹參酮IIA在3.24～97.2μg/mL范圍內線性關系良好。

2.6 精密度試驗

取同一批對照品，連續(xù)進樣6次，結果顯示丹參酮IIA含量的RSD(%)為0.4，說明該方法精密度良好。

2.7 重復性試驗

取丹參藥材(根)按供試品制備方法平行制備供試品6份，結果丹參酮IIA含量RSD(%)為0.5，說明該方法重復性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗

按供試品溶液制備方法制備供試品，分別于0、2、4、6、8、12、24h進樣，結果顯示丹參酮IIA含量RSD(%)為0.4，說明供試品溶液在24h內穩(wěn)定性良好。

2.9 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的同一組丹參藥材，加入各成分對照品適量，按“2.3”項方法制備供試品溶液，按“2.1”項色譜條件進行分析。結果顯示，丹參酮IIA平均加樣回收率分別為99.0%、99.4%、98.7%。見表1。

表1 加樣回收率考察結果 (%)

2.10 樣品測定

按供試品溶液制備方法制備丹參根、莖葉樣品，按“2.1”項色譜條件測定，計算含量。見表2。

表2 丹參不同部位丹參酮IIA含量 (%)

3 討論

本試驗按藥典方法提取丹參藥材、丹參莖、丹參葉中丹參酮IIA成分，按藥典方法對丹參酮IIA進行色譜分析，所選方法經(jīng)典。由表2可知，同處于林芝地區(qū)所采集的丹參藥材(丹參根)中丹參酮IIA差別較大，兩次采集含量差異較大，其RSD(%)高達54.3和10.3；不同采收期丹參酮IIA的含量并不相同，可能由于10月份丹參葉落，丹參酮IIA得以蓄積，含量上升。9月份采集的丹參莖和丹參葉中也含有少量丹參酮IIA，但其含量較低；10月份由于葉落，未能采集理想狀態(tài)的丹參葉，故僅檢測丹參莖。本試驗結果表明丹參莖葉存在一定的開發(fā)價值。

本試驗檢測林芝地區(qū)處于采收期的丹參多個部位，為后期丹參的深入研究，如不同生長期丹參不同部位(花、葉、莖、根、種子)中丹參酮IIA含量測定，提供研究基礎，也為丹參植物資源的綜合開發(fā)提供數(shù)據(jù)支持。

[1] 國家藥典委員會.中國人民共和國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：71-72.

[2] 邰明輝，劉蘭梅，馬仁強，等.丹紅注射液一般藥理學實驗研究[J].第一軍醫(yī)大學學報，2005，25(3)：335-338.

[3] 范雪梅.中藥復方雙龍方作用機理的系統(tǒng)生物學研究[D].上海：華東理工大學，2010.

[4] 李翔，吳磊宏，范驍輝，等.復方丹參方主要活性成分網(wǎng)絡藥理學研究[J].中國中藥雜志，2011，36(21)：2911-2915.

[5] 梁勇，羊裔明，袁淑蘭.丹參酮藥理作用及臨床應用研究進展[J].中草藥，2000，31(4)：304-306.

[6] 藍天鳳，王曉，王岱杰，等.一測多評法測定丹參4種丹參酮類成分[J].中草藥，2012，43(12)：2420-2423.

[7] 沈建芳，汪紅，王強，等.丹參中丹參酮成分的HPLC-MS(n)研究[J].中國現(xiàn)代應用藥學，2010，27(10)：944-947.

[8] 董蕊.白花丹參中丹參酮成分的提取分離與含量測定[D].長春：吉林農業(yè)大學，2004.

[9] 杜冠華，張鈞田.丹參水溶性有效成分-丹酚酸研究進展[J].基礎醫(yī)學與臨床，2010，20(5)：10-14.

[10] 薛靜，葉正良，李德坤，等.HPLC同時測定丹參多酚酸中丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的含量[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19(3)：70-73.

[11] 盧君蓉，傅超美，劉芳，等.星點設計—效應面法優(yōu)選丹參中丹參總酚酸的提取工藝[J].中成藥，2012，34(7)：1373-1376.

[12] 林徐劍，沈瑩，施曉萍.丹參原藥材和飲片與不同溫度的水接觸后丹酚酸B的含量變化[J].中國藥學雜志，2014，49(17)：1506-1507.

(責任編輯：李嵐春)

Determination of Tanshinone IIA ofSalviaMiltiorrhizaBge.Collected from Nyingchi Prefecture by HPLC

Zhang Xiaohong1,Liang Jie2,Xiao Xue2,3,Shi Qinglong3

(1.Guangdong Food and Drug Vocational-Technical School,Guangzhou 510663,China;2.Guangdong Pharmaceutical University,Guangzhou 510006,China;3.Nansha Research Institute,Sun Yat-sen University,Guangzhou 511458,China)

Objective:To establish a method for Tanshinone IIA for Salvia miltiorrhiza Bge.Methods:The Phenomenex C18analytical column (4.60mm×250mm,5μm) was used.The mobile phases comsisted of H2O and MeOH with isocratic elution.The flow rate was 1 mL/min,the detection wavelength was at 270 nm and the column temperature was at 25°C.Results:The method had good linear relationship within the range 3.24～97.2μg/mL of Tanshinone IIA,with the correlation coefficent higher as 0.999 9.The average recovery was 99.1% of Tanshinone IIA.Conclusion:There were certain concentrations of Tanshinone IIA in different parts of Salvia miltiorrhiza Bge in different harvest.

SalviamiltiorrhizaBge.;Tanshinone IIA;Content Determination

2015-02-15

張小紅(1979-)，女，廣東省食品藥品職業(yè)技術學校講師，研究方向為中藥質量控制。E-mail：57388664@qq.com

肖雪(1985-)，男，博士，研究方向為中藥質量控制。E-mail：erxiaohappy@163.com

R284

A

1673-2197(2015)12-0017-02

10.11954/ytctyy.201512007