方 毅，趙付菊， 張景皓，趙 虎

(復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院檢驗科，上海200040)

水生拉恩菌(Rahnella aquatilis)屬于腸桿菌科拉恩菌屬中的一個種［1］，為條件致病菌，較少引起臨床致病，從深部咳痰標(biāo)本中分離出此菌極少見。復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院檢驗科從1例患者痰標(biāo)本中分離出1株水生拉恩菌。

一、病例資料

1.一般情況 患者女，60歲。入院前1周患者自覺全身乏力加重，有咳痰，痰量不多，于復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院住院治療。入院檢查顯示，血常規(guī):白細(xì)胞12.4×109/L，中性粒細(xì)胞88%，淋巴細(xì)胞10%，單核細(xì)胞2%，血紅蛋白104 g/L，血小板208×109/L，C反應(yīng)蛋白17.0 mg/L;神智清楚，體溫36.8℃，雙肺叩診呈清音，呼吸音清晰，未聞及干、濕性啰音。入院后取患者深部咳出的痰標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，分離到水生拉恩菌，且從其在血瓊脂平板上的菌落生長情況來看，此菌落較純，基本抑制了痰中的正常菌群(如草綠色鏈球菌和卡他布拉漢菌等)和其它雜菌的生長。經(jīng)左氧氟沙星抗感染治療，患者1周后治愈出院。

2.培養(yǎng)與分離 收到痰標(biāo)本后，立即對痰標(biāo)本質(zhì)量進(jìn)行檢查，涂片染色結(jié)果為合格痰標(biāo)本(白細(xì)胞＞25/低倍視野，上皮細(xì)胞＜10/低倍視野)。隨即接種血平板、中國藍(lán)平板和巧克力瓊脂平板(上?？片敿喂?，5%～10%CO2環(huán)境中培養(yǎng)24h后，血瓊脂平板上可見中等大小、灰白色、圓形稍凸起、光滑濕潤、邊緣整齊、不溶血的菌落。將第2天血瓊脂平板上的純培養(yǎng)菌落進(jìn)行涂片和革蘭染色鏡檢，為革蘭陰性桿菌，氧化酶試驗為陰性。

3.細(xì)菌的鑒定 (1)采用VITEK 2 Compact全自動微生物分析系統(tǒng)及其配套的鑒定卡(GN卡，法國生物梅里埃公司)進(jìn)行鑒定，根據(jù)其生化反應(yīng)結(jié)果的編碼4601530513560010，鑒定為水生拉恩菌，鑒定率為90%;(2)采用質(zhì)譜儀(VITEKMS)(法國生物梅里埃公司)進(jìn)行鑒定，鑒定為水生拉恩菌，鑒定率為99.9%;(3)采用分子生物學(xué)方法進(jìn)行鑒定(測序)，由上海桑尼生物工程有限公司合成細(xì)菌的通用引物，27F:5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'，1492R:5'-CTACGGCTACCTTGTTACGA-3'。試驗方法:利用 16SrDNA兩端的引物聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)擴(kuò)增未知菌株的16SrRNA基因，并進(jìn)行DNA測序，與NCBI GenBank中的已知序列進(jìn)行同源性比較后，判定細(xì)菌種類，將細(xì)菌劃分到屬或種。鑒定結(jié)果:水生拉恩菌，鑒定率為99%。

4.藥物敏感性試驗 采用紙片擴(kuò)散法進(jìn)行體外藥物敏感性試驗［2］?？咕幬锛埰蒓xoid公司提供，水解酪蛋白胨平板由科瑪嘉公司提供。試驗結(jié)果提示該菌對頭孢噻肟、頭孢曲松、頭孢他啶、頭孢美唑、頭孢西丁、美羅培南、亞胺培南、氨芐西林-舒巴坦、左氧氟沙星、哌拉西林-他唑巴坦、復(fù)方磺胺甲噁唑均敏感，而對一、二代頭孢菌素類(頭孢唑啉和頭孢呋新)均耐藥，對青霉素類單藥(氨芐西林)耐藥。

二、討論

拉恩菌屬為腸桿菌科中的一個菌屬，其較為重要的一個種即為水生拉恩菌。有報道從同一患者的血液中2次分離培養(yǎng)出同一株水生拉恩菌，此患者出現(xiàn)了持續(xù)1周的高熱，并伴隨右上腹疼痛［3］;還有報道從一位老年患者腦脊液中分離出1株水生拉恩菌，此患者有頭痛、發(fā)熱伴嘔吐的癥狀［4］。華東醫(yī)院的這例患者在2014年3月診斷為抗中性粒細(xì)胞抗體相關(guān)性血管炎，給予甲潑尼龍進(jìn)行治療，并在4、5、6月進(jìn)行了3次環(huán)磷酰胺沖擊治療，因為該藥物為免疫抑制劑，可導(dǎo)致患者抵抗力下降，容易引起條件致病菌繼發(fā)感染。該患者在7月下旬入院時有咳嗽、咳痰，肺部CT未見明顯炎癥，考慮急性支氣管炎，使用左氧氟沙星抗感染治療后，在住院期間咳嗽、咳痰的癥狀有所好轉(zhuǎn)。

人體內(nèi)及外界環(huán)境中存在很多種類的細(xì)菌，人類和細(xì)菌是共存的，有些細(xì)菌為正常菌群，有些則是條件致病菌。細(xì)菌檢出的部位不同，其臨床意義也不同。如草綠色鏈球菌在痰標(biāo)本中檢出是正常菌群，但在血標(biāo)本中檢出則為致病菌，可能是亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎的病原菌。此次討論的這個病例就可能是由于機(jī)體接受免疫抑制劑治療后機(jī)體抵抗力下降，導(dǎo)致條件致病菌引發(fā)機(jī)體感染。對于這個病例，我們的體會是微生物工作人員在對患者的標(biāo)本做細(xì)菌鑒定和藥物敏感性試驗時，需要全面考慮，不放過任何一個有可能引起感染的細(xì)菌(包括一些定植菌和條件致病菌)，對所檢出的細(xì)菌做全面的藥物敏感性試驗，讓醫(yī)生及時選用合適的抗菌藥物進(jìn)行有針對性的治療，有利于患者盡早康復(fù)。

［1］葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程［M］.3版.南京:東南大學(xué)出版社，2006:801-821.

［2］Clinical and Laboratory Standards Institute.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing;twenty-second Informational Supplement［S］.M100-S23，CLSI，2013.

［3］張春花，謝國艷，倪語星，等.血液培養(yǎng)分離出水生拉恩菌1例［J］.檢驗醫(yī)學(xué)，2004，19(2):162.

［4］鄧書杰，張京文.水生拉恩菌致腦膜炎1例［J］.臨床檢驗雜志，2002，20(2):97.