陳愛蓮，馬小宏

（如皋市人民醫(yī)院檢驗科，江蘇 如皋 226500）

乙二胺四乙酸依賴性假性血小板減少癥檢測方法探討

陳愛蓮，馬小宏

（如皋市人民醫(yī)院檢驗科，江蘇 如皋 226500）

目的探討乙二胺四乙酸依賴性假性血小板減少癥(EDTA-PTCP)幾種檢測方法的可靠性。方法對5例EDTA-PTCP患者和20位健康體檢者同時用經(jīng)乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)、枸櫞酸鈉和肝素鋰三種抗凝管及末梢血稀釋的方式采集標本，分別用血液分析儀在三種抗凝管采集標本后5min、30min、60min測定血小板計數(shù)，采集末梢血用顯微鏡手工計數(shù)血小板，對所有標本涂片染色觀察血小板形態(tài)。結(jié)果5例EDTA-PTCP患者EDTA-K2采血管采血后30min和60min血小板計數(shù)(PLT)比5min時測定結(jié)果顯著偏低，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。DTA-PTCP患者EDTA-K2采血后30min和60min抗凝血涂片染色均見明顯的血小板聚集現(xiàn)象，而健康體檢者EDTA-K2抗凝血涂片及未抗凝血直接涂片染色見血小板散在分布。在采血30min后測定，EDTA-K2采血管PLT明顯低于枸櫞酸鈉、肝素鋰及手工計數(shù)結(jié)果，差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；20例健康體檢者在采血后5min、30min、60min時EDTA-K2采血管PLT與枸櫞酸鈉、肝素鋰、手工計數(shù)的結(jié)果比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。結(jié)論對疑似EDTA-PTCP患者可以用EDTA-K2采血管重新采血立即測定，或不使用抗凝劑直接抽血立即測定，也可以使用枸櫞酸鈉或肝素鋰抗凝管初步確認，同時涂片染色并手工計數(shù)得到正確的結(jié)果。

乙二胺四乙酸；枸櫞酸鈉；肝素鋰；假性血小板減少癥；血小板計數(shù)

血小板在機體止血、凝血過程中具有重要作用，血小板計數(shù)(Platelets，PLT)是止血、凝血檢查最常用的篩檢試驗之一。血液分析儀的廣泛應(yīng)用提高了檢測的準確度和效率，減輕了檢驗工作人員的勞動強度。乙二胺四乙酸(Ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA)鹽對紅細胞、白細胞的形態(tài)影響較小，尤其對血小板計數(shù)影響較小，最適合作為血細胞計數(shù)的抗凝劑。1993年國際血液學標準化委員會(ICSH)建議將EDTA鹽作為血常規(guī)檢驗的抗凝劑在臨床得到廣泛使用。但EDTA能誘導少數(shù)患者血小板聚集，血液分析儀無法對其正確識別，從而造成檢測值大大低于真實值。這種由EDTA引起的血小板假性減少的現(xiàn)象被稱為EDTA依賴性假性血小板減少癥(Ethylenediaminetetraacetic acid-dependent pseudothrombocytopenia，EDTA-PTCP)[1]。如不能及時鑒別EDTA-PTCP，可能導致誤診，可發(fā)生過度治療或者引起不必要的其他檢查。

本實驗對5例血小板假性減少的患者和20位健康體檢者進行采血，采用不同的抗凝劑及末梢血稀釋的方式采集標本，并涂片染色，分別用血液分析儀在標本采集后不同時間測定血小板，同時用顯微鏡人工計數(shù)、觀察涂片血小板形態(tài)。以驗證EDTA-PTCP的幾種檢測方法的可靠性，為檢驗工作人員提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2014年5～11月在本院就診，經(jīng)乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝靜脈血標本血小板檢測結(jié)果明顯減低，但均無臨床出血傾向，白細胞、血紅蛋白、凝血指標均正常，經(jīng)即刻采血及外周血涂片檢查明確診斷為EDTA-PTCP患者5例，其中男性2例，女性3例。隨機選擇20例健康體檢者作為本實驗參照組，其中男性10例，女性10例。

1.2 儀器和試劑 美國Beckman Coulter LH750血液分析儀及配套試劑，Olympus CX31顯微鏡，改良牛鮑氏計數(shù)盤，草酸銨稀釋液(自配，用于手工計數(shù)血小板)，BASO瑞姬氏染色液。EDTA-K2，枸櫞酸鈉和肝素鋰三種真空采血管均使用奧地利非可替公司產(chǎn)品。

1.3 方法 對EDTA-PTCP患者和健康體檢者，按要求用EDTA-K2、枸櫞酸鈉和肝素鋰三種真空采血管采集靜脈血，顛倒混勻8次，分別于采血后5min、30min、60min用LH750血液分析儀測定血小板計數(shù)(PLT)；采集末梢血按照全國臨床檢驗操作規(guī)程[2]要求手工計數(shù)血小板。每個標本測定兩次取平均值。將上述標本涂片染色，顯微鏡下觀察血小板形態(tài)。

1.4 統(tǒng)計學方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均值或均數(shù)±標準差(±s)表示。5例EDTA-PTCP患者EDTA-K2采血管采血后3個時間段PLT比較、三種抗凝劑采血后30min時的PLT及手工計數(shù)PLT比較采用單因素方差分析；20例健康體檢者EDTA-K2采血管采血后不同時間段PLT與枸櫞酸鈉、肝素鋰、手工計數(shù)相應(yīng)觀察時間段之間PLT差異采用t檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 EDTA-K2不同時間PLT檢測結(jié)果 5例EDTA-PTCP患者經(jīng)EDTA-K2采血管采血后3個時間段的PLT檢測結(jié)果見表1。EDTA-K2采血管采血后30min時和60min時的PLT分別與5min時PLT檢測結(jié)果比較明顯減少，差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

表15 例EDTA-PTCP患者EDTA-K2采血管不同時間PLT檢測結(jié)果(×109/L)

2.2 不同抗凝劑PLT及手工計數(shù)PLT比較 5例 EDTA-PTCP患者經(jīng)三種采血管采血后30min的PLT及血小板手工計數(shù)結(jié)果表明：5例患者的EDTA-K2采血管PLT分別為34×109/L、37×109/L、26×109/L、32× 109/L、24×109/L，均明顯低于枸櫞酸鈉采血管PLT(分別為203×109/L、136×109/L、107×109/L、162×109/L、131×109/L)、肝素鋰采血管PLT(分別為237×109/L、143×109/L、124×109/L、191×109/L、139×109/L)及手工計數(shù)(分別為141×109/L、146×109/L、122×109/L、175× 109/L、145×109/L)的PLT結(jié)果，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見圖1。

圖1 三種抗凝劑30min時PLT及手工計數(shù)血小板結(jié)果(×109/L)

2.3 健康體檢者3種抗凝劑PLT及手工計數(shù)比較 20例健康體檢者經(jīng)三種采血管采血后5min、30min和60min的PLT及相應(yīng)時間的手工計數(shù)PLT結(jié)果見表2，結(jié)果表明EDTA-K2采血管采血后各觀察時間段的PLT與枸櫞酸鈉采血管、肝素鋰采血管、手工計數(shù)之間PLT差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

2.4 血涂片鏡檢結(jié)果 5例EDTA-PTCP患者EDTA-K2采血管采血后30min和60min時抗凝血涂片染色均見明顯的聚集和衛(wèi)星現(xiàn)象；未抗凝直接涂片染色見血小板散在分布(圖2)。20例健康體檢者EDTA-K2抗凝血涂片及未抗凝血直接涂片染色見血小板散在分布，未見明顯的聚集和衛(wèi)星現(xiàn)象。

表2 20例健康體檢者不同時間段EDTA-K2采血管PLT與枸櫞酸鈉、肝素鋰、手工計數(shù)之間PLT比較(±s，×109)

表2 20例健康體檢者不同時間段EDTA-K2采血管PLT與枸櫞酸鈉、肝素鋰、手工計數(shù)之間PLT比較(±s，×109)

注：表中t值和P值為枸櫞酸鈉、肝素鋰、手工計數(shù)PLT分別與EDTA-K2采血管PLT進行比較。

測定時間5min 30min 60minP值0.89 0.88 0.94例數(shù)20 20 20 EDTA-K2222±42 223±44 218±41枸櫞酸鈉198±47 196±45 191±47t值1.70 1.91 1.93P值0.09 0.06 0.06肝素鋰211±49 206±46 209±51t值0.76 1.19 0.68P值0.45 0.24 0.49手工計數(shù)224±39 221±40 220±40t值0.13 0.15 0.08

圖2 聚集衛(wèi)星現(xiàn)象（A）和正常血小板（B）

3 討 論

隨著血液分析儀的普及和真空采血管的廣泛應(yīng)用，由EDTA-K2引起的假性血小板減少的報道也逐年增多[3-6]，據(jù)文獻報道EDTA-PTCP發(fā)病率為0.07%～0.21%[7]。由于血液分析儀常將凝集的血小板誤認為白細胞，如過度依賴血液分析儀，容易引起對EDTA-PTCP患者的誤診。在血液分析儀的散點圖中，白細胞閾值線左下方出現(xiàn)明顯的顆粒團，儀器常將一些與白細胞大小相似的血小板聚集體誤認為白細胞，使得血小板結(jié)果偏低，而白細胞偏高。血液分析儀有血小板聚集(Platelet clumps)報警提示，所以當血液分析儀出現(xiàn)報警信息時一定要查看散點圖，并根據(jù)復片規(guī)則涂片染色，觀察血小板大小、形態(tài)以及有無聚集。

本研究歷時7個月，觀察到的EDTA依賴性假性血小板減少癥患者為5例。用EDTA-K2真空采血管采集患者靜脈血，分別于采血后5min，30min，60min用LH750血液分析儀測定PLT。檢測結(jié)果表明，EDTA-K2采血后30min和60min的PLT與5min時的檢測結(jié)果相比明顯減少。而5例EDTA-PTCP患者EDTA-K2采血后30min和60min抗凝血涂片染色均見明顯的聚集和衛(wèi)星現(xiàn)象；同時觀察到EDTA-PTCP患者的未抗凝直接涂片染色與健康體檢者EDTA-K2抗凝血涂片及健康體檢者未抗凝血直接涂片染色一樣，未見明顯的聚集和衛(wèi)星現(xiàn)象，血小板呈散在分布。EDTA-PTCP患者EDTA-K2采血管采血后30min時的PLT明顯低于相應(yīng)時間段枸櫞酸鈉采血管、肝素鋰采血管及手工計數(shù)PLT，而健康體檢者EDTA-K2采血管采血后不同時間段的PLT與相應(yīng)時間段枸櫞酸鈉、肝素鋰、手工計數(shù)PLT之間結(jié)果差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。因此，作者認為對疑似EDTA-PTCP患者可以用EDTA-K2采血管重新采血立即測定，或不使用抗凝劑直接抽血立即測定。也可使用枸櫞酸鈉或肝素鋰抗凝管初步確認，但要警惕多種抗凝劑引起血小板假性減少[8-10]。在更換抗凝劑的同時涂片染色并手工計數(shù)PLT得到正確的結(jié)果。

近年來，由抗凝劑引起的血小板假性減少得到高度關(guān)注，由于這種假性血小板減少常導致給患者增加許多不必要的檢查，甚至創(chuàng)傷性骨髓穿刺涂片、輸注血小板等治療，給患者帶來身心痛苦和不必要的經(jīng)濟負擔，甚至引起醫(yī)療糾紛。因此，建議臨床醫(yī)生和檢驗科醫(yī)生都應(yīng)該對EDTA-PTCP要有足夠的警惕，工作中遇到首次出現(xiàn)血小板嚴重減少的患者，特別是無明顯出血癥狀的患者要認真查找原因，及時溝通，排除檢測方面的影響因素，為臨床提供正確的結(jié)果，避免臨床誤診誤治。

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[2]葉應(yīng)嫵,王毓三.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].3版,南京：東南大學出版社,2006：136-137.

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Investigation on the detection method for EDTA-dependent pseudothrombocytopenia.

CHEN Ai-lian,MA Xiao-hong.Department of Clinical Laboratory,Rugao People'Hospital,Rugao 226500,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo investigate the reliability of the methods for detecting EDTA-dependent pseudothrombocytopenia(EDTA-PTCP).MethodsBlood samples were collected from 5 patients of EDTA-PTCP and 20 healthy subjects by three anticoagulant tubes(EDTA-K2,sodium citrate and heparin lithium)and peripheral blood dilution.Platelets were determined by haematology analyzer 5min,30min,60min after the samples were collected by anticoagulant tubes,as well as determined manually under the microscope for peripheral blood samples collected.Smear staining was performed to observe platelet morphology.ResultsIn the five DTA-PTCP patients,the platelet count of EDTA-K2anticoagulant tube was significantly lower at 30min and 60min after sample collection than at 5min (P＜0.05).Platelet of EDTA-K2anticoagulant tube from the 5 patients showed significant aggregation during smear staining,while the platelet of EDTA-K2anticoagulant tube from the 20 healthy subjects and the peripheral blood(manual counting)showed scattered distribution.30min after blood collection,the platelet count of EDTA-K2anticoagulant tube was significantly lower than that of sodium citrate anticoagulant tube,heparin lithium anticoagulant tube, manual counting(P＜0.05).In 20 healthy subjects,no significant difference exist in the results between EDTA-K2anticoagulant tube and sodium citrate anticoagulant tube,heparin lithium anticoagulant tube,manual counting(P＞0.05).ConclusionFor suspected patients of EDTA-PTCP,blood samples can be collected by EDTA-K2anticoagulant tube or draw directly without anticoagulant for immediate platelet determination.Samples can also be collected by using sodium citrate or lithium heparin anticoagulant tube for initial identification.Smear staining and manual counting should be performed to obtain correct results.

Ethylene diamine tetraacetic acid(EDTA);Sodium citrate;Heparin lithium;Pseudothrombocytopenia;Platelet count

R558+.2

A

1003—6350（2015）21—3170—03

2015-06-29)

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.21.1153

馬小宏。E-mail：1974277014@qq.com