何 佳，何進(jìn)宇，宋曉征，張麗雅，黃 睿

(1.成都363醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，四川 成都 610041；2.四川省人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，四川 成都 610041)

復(fù)發(fā)緩解型多發(fā)性硬化患者腦脊液及血清中非髓鞘神經(jīng)相關(guān)蛋白的檢測(cè)及臨床意義

何 佳1，何進(jìn)宇1，宋曉征1，張麗雅1，黃 睿2

(1.成都363醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，四川 成都 610041；2.四川省人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，四川 成都 610041)

目的探討復(fù)發(fā)緩解型多發(fā)性硬化(RRMS)患者腦脊液及血清中非髓鞘神經(jīng)相關(guān)蛋白的水平及其臨床意義。方法選擇2010年1月至2014年12月我院收治的70例RRMS患者作為觀察組，同期來(lái)我院體檢的70例健康體檢者作為對(duì)照組，分別比較兩組受試者的腦脊液與血清中的非髓鞘神經(jīng)相關(guān)蛋白水平(包括14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白)。結(jié)果觀察組患者腦脊液中的14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白水平均較對(duì)照組高，兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；觀察組患者血清中的14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白水平分別與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論復(fù)發(fā)緩解型多發(fā)性硬化患者腦脊液中14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白非髓鞘神經(jīng)相關(guān)蛋白均有明顯升高現(xiàn)象，可以作為該病的檢查指標(biāo)，而血清中非髓鞘神經(jīng)相關(guān)蛋白則無(wú)明顯變化。

多發(fā)性硬化；腦脊液；血清；非髓鞘神經(jīng)相關(guān)蛋白

多發(fā)性硬化(Multiple sclerosis，MS)屬于自身免疫性疾病，其主要特點(diǎn)為中樞神經(jīng)系統(tǒng)(Central nervus system，CNS)炎性脫髓鞘[1]。近年來(lái)有相關(guān)研究顯示，MS患者不僅存在脫髓鞘損傷，還會(huì)出現(xiàn)非髓鞘神經(jīng)損傷，其中包括膠質(zhì)細(xì)胞、軸索及神經(jīng)元的損傷[2]。能夠反應(yīng)膠質(zhì)細(xì)胞、軸索及神經(jīng)元的損傷的非髓鞘神經(jīng)相關(guān)蛋白主要有神經(jīng)元內(nèi)的14-3-3蛋白、軸索內(nèi)的tau蛋白及膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的S100蛋白[3]。為了探討復(fù)發(fā)緩解型多發(fā)性硬化(Relapsing-remitting multiple sclerosis，RRMS)患者腦脊液及血清中非髓鞘神經(jīng)相關(guān)蛋白的臨床意義，本文選擇近年來(lái)我院收治的RRMS患者和同期健康體檢者作為研究對(duì)象進(jìn)行對(duì)照研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年1月至2014年12月我院收治的70例RRMS患者作為觀察組，同期來(lái)我院體檢的70例健康體檢者作為對(duì)照組，全部RRMS患者均經(jīng)2005年McDonald診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]進(jìn)行確診，全部研究對(duì)象簽署知情同意書。其中對(duì)照組男性47例，女性23例，年齡16～59歲，平均(37.13±11.68)歲。觀察組男性45例，女性25例，年齡15～60歲，平均(36.91±12.04)歲；病程4個(gè)月至10年，平均(3.62±2.11)年，全部研究對(duì)象排除感染性疾病及其他自身免疫性疾病，進(jìn)行第一次檢查前3個(gè)月內(nèi)均未使用免疫抑制劑及糖皮質(zhì)激素。兩組受試者的性別、年齡等一般資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究上報(bào)醫(yī)院倫理委員會(huì)，研究同意后實(shí)施。

1.2 觀察指標(biāo) 兩組受試者腦脊液及血清中的14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 收集樣本 全部研究對(duì)象均抽取5ml靜脈血，進(jìn)行離心獲取血清樣本，且均行腰椎穿刺術(shù)，收集腦脊液樣本，各2ml，全部樣品于-80℃冰箱保存。

1.3.2 腦脊液及血清中非髓鞘神經(jīng)相關(guān)蛋白檢測(cè) 采用ELISA法分別檢測(cè)腦脊液及血清中14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白，嚴(yán)格按照試劑盒(由武漢華美生物工程公司生產(chǎn))說(shuō)明書進(jìn)行操作，且再反應(yīng)結(jié)束15min之內(nèi)采用酶聯(lián)儀測(cè)量各孔光密度(OD)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者腦脊液的非髓鞘神經(jīng)相關(guān)蛋白水平比較 觀察組患者腦脊液中14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白水平均較對(duì)照組高，兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組患者腦脊液的非髓鞘神經(jīng)相關(guān)蛋白水平比較(±s,pg/ml)

表1 兩組患者腦脊液的非髓鞘神經(jīng)相關(guān)蛋白水平比較(±s,pg/ml)

組別14-3-3蛋白S100蛋白tau蛋白觀察組(n=70)對(duì)照組(n=70)t值P值113246.5±8634.9 96671.4±8632.8 4.368＜0.05 743.6±33.9 651.7±39.5 5.747＜0.05 114.6±11.7 74.6±12.1 8.255＜0.05

2.2 兩組患者血清中的非髓鞘神經(jīng)相關(guān)蛋白水平比較 觀察組患者血液中14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白水平與對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表2。

表2 兩組患者血清中的非髓鞘神經(jīng)相關(guān)蛋白水平比較(±s，pg/ml)

表2 兩組患者血清中的非髓鞘神經(jīng)相關(guān)蛋白水平比較(±s，pg/ml)

組別觀察組(n=70)對(duì)照組(n=70) 24114.5±4297.6 22964.1±3954.8 622.4±97.2 581.6±86.7 61.3±10.3 54.6±9.4t值P值14-3-3蛋白1.953＞0.05 S100蛋白1.647＞0.05 tau蛋白1.553＞0.05

3 討 論

多發(fā)性硬化是一種主要以中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性脫髓鞘為特點(diǎn)的疾病，屬于自身免疫性疾病。MS患者不僅存在脫髓鞘損傷，同時(shí)存在非髓鞘神經(jīng)損傷，其中包括膠質(zhì)細(xì)胞、軸索、神經(jīng)元等的損傷。反應(yīng)膠質(zhì)細(xì)胞、軸索及神經(jīng)元的損傷的非髓鞘神經(jīng)相關(guān)蛋白主要包括神經(jīng)元內(nèi)的14-3-3、軸索內(nèi)的tau及膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的S100等[5-6]。研究提示，非髓鞘神經(jīng)損害出現(xiàn)于多發(fā)性硬化的早期階段，且為是多發(fā)性硬化功能障礙進(jìn)展的關(guān)鍵因素[7]。

有關(guān)神經(jīng)退行性疾病研究[8]顯示，14-3-3蛋白可作為神經(jīng)元急性損傷的標(biāo)志物，該蛋白主要存在于在神經(jīng)元內(nèi)細(xì)胞核及細(xì)胞漿內(nèi)，主要功能為調(diào)節(jié)蛋白跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞分裂、細(xì)胞凋亡等[9]。本研究結(jié)果顯示，觀察組患者腦脊液中14-3-3蛋白水平較對(duì)照組高，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

S100蛋白屬于一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，其主要存在于少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞與星形細(xì)胞內(nèi)[10]。腦組織出現(xiàn)損傷時(shí)，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞能夠自分泌及旁分泌S100蛋白，作用于神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，進(jìn)一步促進(jìn)神經(jīng)的修復(fù)。然而膠質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)壞死現(xiàn)象后，S100蛋白則會(huì)釋放到腦脊液中提高其在腦脊液中的水平[11]。本研究結(jié)果顯示，觀察組患者腦脊液中S100蛋白水平較對(duì)照組高，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

tau蛋白主要位于神經(jīng)細(xì)胞的軸突內(nèi)，屬于一種微管相關(guān)蛋白，其主要參與細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞有絲分裂等多種生命活動(dòng)，維持軸突的形態(tài)及微管的穩(wěn)定，并促進(jìn)神經(jīng)元的生長(zhǎng)發(fā)育[12]。本研究結(jié)果顯示，觀察組患者腦脊液中tau蛋白水平較對(duì)照組高，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

本研究顯示，觀察組患者腦脊液中14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白水平均較對(duì)照組高，但血液中以上非髓鞘神經(jīng)相關(guān)蛋白均無(wú)明顯差異。此結(jié)果表明，與血液相比，腦脊液中非髓鞘神經(jīng)相關(guān)蛋白更能顯示中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損害狀況，與相關(guān)研究[13]結(jié)果一致。

綜上所述，RRMS患者腦脊液中14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白非髓鞘神經(jīng)相關(guān)蛋白均有明顯升高現(xiàn)象，可以作為該病的檢查指標(biāo)，而血液中非髓鞘神經(jīng)相關(guān)蛋白則無(wú)明顯變化。

[1]陳 穎,王志海,陳湛愔.多發(fā)性硬化患者的生活質(zhì)量及其影響因素研究[J].海南醫(yī)學(xué),2011,22(6)：139-141.

[2]賀興友,鄒 嘉.多發(fā)性硬化29例診療分析[J].吉林醫(yī)學(xué),2012, 33(8)：1631-1632.

[3]張先龍,唐玉蘭,肖凱文.大劑量甲潑尼龍治療多發(fā)性硬化87例[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2011,30(8)：1044-1045.

[4]李曉玲,張 博,張?chǎng)╈o,等.阿托伐他汀鈣聯(lián)合糖皮質(zhì)激素對(duì)多發(fā)性硬化療效的動(dòng)態(tài)觀察[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志,2014,30(9)：1236-1239,1244.

[5]張永利,張 杰.大劑量甲基強(qiáng)的松龍沖擊治療多發(fā)性硬化18例臨床分析[J].中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志,2011,14(22)：78-79.

[6]張 菲,王海僑,董會(huì)卿,等.七葉皂苷鈉替代皮質(zhì)類固醇激素治療輕癥多發(fā)性硬化臨床觀察[J].河北醫(yī)藥,2011,33(1)：47-49.

[7]董艷玲,李呂力,李瑤宣,等.糖皮質(zhì)激素治療多發(fā)性硬化不同方案的臨床應(yīng)用[J].臨床神經(jīng)病學(xué)雜志,2012,25(2)：144-146.

[8]楊 帆,顏光濤,李 濤.多發(fā)性硬化相關(guān)T細(xì)胞免疫機(jī)制的研究進(jìn)展[J].免疫學(xué)雜志,2013,29(5)：452-456.

[9]韋遠(yuǎn)田.血漿置換聯(lián)合糖皮質(zhì)激素治療多發(fā)性硬化療效觀察[J].中外醫(yī)學(xué)研究,2011,9(19)：28.

[10]周 超,張昆南,屈新輝,等.急性期多發(fā)性硬化患者行血漿置換治療的臨床觀察[J].江西醫(yī)藥,2014,49(12)：1363-1365.

[11]趙向南.神經(jīng)降壓素檢測(cè)對(duì)急性顱腦損傷患者的臨床意義[J].河北醫(yī)學(xué),2014,20(2)：292-294.

[12]張興鵬,盧 宏.糖皮質(zhì)激素對(duì)多發(fā)性硬化患者血清MMP-9、TIMP-1水平的調(diào)控作用[J].中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志,2012,29(5)：419-422.

[13]凌 波,陶敏,唐玉蘭,等.糖皮質(zhì)激素對(duì)多發(fā)性硬化血清非髓鞘神經(jīng)相關(guān)蛋白的影響[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2012,28(2)：212-214.

Detection and clinical significance of non-myelinated nerve associated proteins in cerebrospinal fluid and serum of patients with relapsing-remitting multiple sclerosis.

HE Jia1,HE Jin-yu1,SONG Xiao-zheng1,ZHANG Li-ya1,HUANG Rui2.1.Department of Neurology,Chengdu 363 Hospital,Chengdu 610041,Sichuan,CHINA;2. Department of Neurology,Sichuan Provincial People's Hospital,Chengdu 610041,Sichuan,CHINA

ObjectiveTo investigate the detection and clinical significance of non-myelinated nerve associated proteins in cerebrospinal fluid(CSF)and serum of patients with relapsing-remitting multiple sclerosis(RRMS).MethodsSeventy patients with RRMS in our hospital from January 2010 to December 2014 were enrolled as the observation group,and 70 healthy people in our hospital for health examination at the same period were considered as the control group.The levels of non-myelinated nerve associated proteins(including 14-3-3 protein,S100 protein and tau protein)were analyzed and compared between the two groups.ResultsThe levels of 14-3-3 protein,S100 protein and tau protein in cerebrospinal fluid in the observation group were significantly higher than those in the control group(P＜0.05),but the levels of the proteins in serum showed no statistically significant difference between the two groups(P＞0.05).ConclusionThe levels of non-myelinated nerve associated proteins in cerebrospinal fluid are significantly increased in patients with relapsing-remitting multiple sclerosis,which can be used as indicators of the disease.However,the levels showed no significant change in serum of the patients.

Multiple sclerosis;Cerebrospinal fluid;Serum;Non-myelinated nerve associated proteins

R744.5+1

A

1003—6350（2015）21—3165—03

2015-05-05)

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.21.1151

四川省衛(wèi)生廳自然基金(編號(hào)：110104)

何 佳。E-mail：jiajiabaobei2005@163.com