劉濤　韓淑英

【摘 要】目的：正交試驗(yàn)法優(yōu)化木犀草素、黃芩素、槲皮素單體復(fù)方的配伍，并觀察優(yōu)選方對(duì)慢性咽炎的療效。方法：以木犀草素、黃芩素、槲皮素為三因素，每個(gè)因素?cái)M定三個(gè)劑量水平，通過三因素三水平的正交試驗(yàn)表L9（34）安排實(shí)驗(yàn)，以二甲苯致小鼠耳腫脹為指標(biāo)，優(yōu)選配伍劑量。用優(yōu)選的復(fù)方觀察其抗炎作用及對(duì)家兔慢性咽炎的療效。結(jié)果：三因素組合的9個(gè)治療組對(duì)小鼠耳腫脹度均低于空白組，優(yōu)選的三素最佳配伍是木犀草素高劑量，黃芩素中劑量和槲皮素中劑量組合（4：3：1）。抗炎驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：優(yōu)選的復(fù)方對(duì)小鼠耳腫脹和大鼠棉球肉芽腫均有明顯抑制作用，能明顯改善家兔慢性咽炎的癥狀，減輕咽部黏膜病理損傷，中、高劑量組效果更佳，其療效在某些方面優(yōu)于黃氏響聲丸。結(jié)論：木犀草素、黃芩素、槲皮素按4：3：1比例組成單體復(fù)方對(duì)慢性咽炎療效好。

【關(guān)鍵詞】木犀草素；黃芩素；槲皮素；單體復(fù)方；慢性咽炎

1 材料

SD大鼠，SPF級(jí)，體重185～205g，♀♂各半；SPF級(jí)昆明小鼠，18～22g，♀♂各半；大耳白兔，體重2.0～2.5kg，♀♂各半，（北京金牧陽實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖有限責(zé)任公司）木犀草素、黃芩素和槲皮素（中國藥品生物制品鑒定所）；黃氏響聲丸（無錫濟(jì)民可信三禾藥業(yè)股份有限公司）；精密電子天平（梅特勒—托利多儀器有限公司）；臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）。

2 方法

2.1 正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選三素單體復(fù)方配伍劑量

2.1.1 因素水平確定

通過三因素（木犀草素、黃芩素和槲皮素）三水平（三個(gè)劑量）的正交試驗(yàn)表L9（34）安排試驗(yàn)，三個(gè)水平劑量的確定是按臨床人常用量換算[1]的較小劑量為第二水平（中劑量）。以二甲苯致小鼠耳腫脹度為炎癥考核指標(biāo)，優(yōu)選配伍劑量。

2.1.2 二甲苯致小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)

小鼠隨機(jī)分組：1-9組為正交設(shè)計(jì)組，10組為空白組，根據(jù)人與小鼠的標(biāo)準(zhǔn)公斤體重劑量折算方法[2]。小鼠左右耳打下圓耳片，稱重，差值為腫脹度。

2.2 優(yōu)選的三素單體復(fù)方抗炎作用驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

2.2.1 小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)

小鼠隨機(jī)分成空白組、阿司匹林組、三素復(fù)方高、中、低劑量給藥組，方法同上。

2.2.2 大鼠棉球肉芽腫試驗(yàn)

大鼠皮下竇道向左右皮下放滅菌棉球，隨機(jī)分成空白組、地塞米松組和三素復(fù)方低、中、高劑量組。肉芽腫凈重=棉球肉芽腫重-原棉球重，兩個(gè)重量取均值，計(jì)算藥物對(duì)棉球肉芽腫的抑制率。

2.3 優(yōu)選的三素單體復(fù)方對(duì)慢性咽炎的治療作用

2.3.1 慢性咽炎模型制備與分組

48只大耳白兔隨機(jī)取8只為正常組，其余用氨水+松節(jié)油復(fù)合因素方法制備慢性咽炎模型，隨機(jī)分為模型組、黃氏響聲丸組、三素單體復(fù)方高、中、低劑量組。

2.3.2 觀察指標(biāo)

記錄家兔行為、攝食、體重變化及大小便等一般情況，觀察動(dòng)物咽部情況；停藥后測定血常規(guī)；咽部粘膜及其下組織HE染色鏡檢。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)以SPSS15.0統(tǒng)計(jì)行單因素方差分析，P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3 結(jié)果

3.1 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

最佳配伍是木犀草素高劑量，黃芩素中劑量和槲皮素中劑量組合，既L3B2Q2，三者劑量比例為4：3：1。木犀草素40 mg、黃芩素30 mg、槲皮素10 mg 組合為給藥中劑量，中劑量×0.5為低劑量，中劑量×2為高劑量。以二甲苯致小鼠耳腫脹和大鼠棉球肉芽腫干預(yù)實(shí)驗(yàn)。

3.2 優(yōu)選三素單體復(fù)方抗炎作用的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

三素復(fù)方對(duì)小鼠耳腫脹有明顯抑制作用，隨著劑量的增加，其抑制率也有所升高。中、高劑量組與阿司匹林組相近（P<0.01）。三素復(fù)方對(duì)大鼠棉球肉芽腫有明顯的抑制作用，高劑量及地塞米松能明顯抑制肉芽腫生成（P<0.01），但各治療組間肉芽腫重量無差異。

3.3 優(yōu)選的三素單體復(fù)方的療效

3.3.1 大耳白兔一般狀態(tài)

造模3天家兔出現(xiàn)搔抓口部，飲水頻而少，口腔分泌物增多，精神疲乏，納食和自發(fā)活動(dòng)減少；咽部充血、暗紅色腫脹；注射松節(jié)油后加重，15天狀態(tài)最差。治療3天癥狀改善，l0天基本正常。各組家兔體重均呈增長態(tài)勢，治療組體重增長速度快于模型組，三素復(fù)方高劑量組最明顯。治療后家兔進(jìn)食增加，三素中、高劑量和黃氏響聲丸作用更明顯。

3.3.2 三素復(fù)方對(duì)慢性咽炎兔血常規(guī)的影響

表1可見，模型組兔血液中白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和粒細(xì)胞數(shù)均明顯高于正常組，各藥物治療組血液中白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和粒細(xì)胞數(shù)均有不同程度的降低，其中三素復(fù)方中、高劑量和黃氏響聲丸組較明顯。紅細(xì)胞各組之間統(tǒng)計(jì)無差異。

3.3.3 給藥后各組兔咽部組織病理形態(tài)學(xué)觀察

模型組家兔咽部黏膜及粘膜下見大量彌漫性炎細(xì)胞浸潤，上皮增厚，釘突延長；粘膜下可見纖維組織增生及固有膜增寬，充血，伴有粘液腺增生。治療組家兔咽部組織病變不同程度減輕，以三素中、高劑量和黃氏響聲丸組病理逆轉(zhuǎn)效果好。

4 討論

慢性咽炎為咽部粘膜、粘膜下及淋巴組織的彌漫性炎癥，伴有黏膜下結(jié)締組織及淋巴組織增生、粘液腺肥大、分泌亢進(jìn)。中藥復(fù)方是中醫(yī)臨床用藥的基本形式，也是制約中醫(yī)藥現(xiàn)代化、國際化的瓶頸。將來源于不同天然植物的有效成分組成復(fù)方即“單體有效成分復(fù)方”用于治療疾病，不僅提高技術(shù)含量，而且符合中醫(yī)藥特色，使中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)具可控性，達(dá)到中藥現(xiàn)代化和國際化的需要。本實(shí)驗(yàn)選擇了中藥單體成分木犀草素、黃芩素、槲皮素（三素）為實(shí)驗(yàn)藥物，從抗炎角度探討三素配伍組合對(duì)慢性咽炎的治療作用，結(jié)果表明：與對(duì)照組比較，三者組合均能抑制小鼠耳腫脹，以木犀草素高劑量，黃芩素中劑量和槲皮素中劑量組合抑制作用最明顯，小鼠耳腫脹度最輕。三者最佳配伍比例是木犀草素：黃芩素：槲皮素為4：3：1。將優(yōu)選的三素復(fù)方進(jìn)行抗炎藥效實(shí)驗(yàn)，結(jié)果：三素復(fù)方對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹和大鼠棉球肉芽腫有明顯抑制作用，中、高劑量與阿司匹林（地塞米松）一致。進(jìn)一步用三素單體復(fù)方觀察對(duì)家兔慢性咽炎模型的治療效果顯示：模型組兔體重減輕、進(jìn)食量減少、咽部黏膜紅腫及病理損傷明顯。三素復(fù)方能顯著改善上述癥狀，減輕病理損傷，中、高劑量和黃氏響聲丸無差別。證明三素單體復(fù)方對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物急、慢性炎癥具有良好的抑制作用，能明顯改善氨水和松節(jié)油所致慢性咽炎模型動(dòng)物的癥狀，減輕咽喉部黏膜損傷，療效在某些方面優(yōu)于黃氏響聲丸，為進(jìn)一步的研究奠定了基礎(chǔ)。

【參考文獻(xiàn)】

[1]王繼雙，等.木犀草素的藥理作用研究進(jìn)展[J].生命科學(xué)，2013，25（6）：560-565.

[2]金丕煥.醫(yī)用數(shù)理統(tǒng)計(jì)方法[M].上海醫(yī)科大學(xué)出版社，1993：450.

[責(zé)任編輯：薛俊歌]