王萍

(太原市第八人民醫(yī)院，山西太原 030012)

·臨床醫(yī)學(xué)·

微柱凝膠法在O型血孕婦產(chǎn)前IgG抗體效價檢測中的應(yīng)用

王萍

(太原市第八人民醫(yī)院，山西太原 030012)

目的:總結(jié)微柱凝膠法在O型血孕婦產(chǎn)前IgG抗體效價檢測中的臨床應(yīng)用。方法:從太原市第八人民醫(yī)院接診的O型血孕婦中選取139例作為本次調(diào)查研究對象，使用微柱凝膠法檢測IgG抗體效價;后對該批患者使用傳統(tǒng)抗人球蛋白法檢測，對比不同檢測方法的檢測結(jié)果。結(jié)果:139例O型血孕婦采用微柱凝膠法檢測IgG抗體效價，異?？?cè)藬?shù)為54例，占該組總?cè)藬?shù)的38.84%，均經(jīng)病理證實(shí)，診斷準(zhǔn)確率100%;而采用傳統(tǒng)抗人球蛋白法檢測IgG抗體效價，異常總?cè)藬?shù)為40例，占該組總?cè)藬?shù)的28.77%。O型血孕婦抗體效果不斷升高的同時，發(fā)生新生兒溶血的幾率更大。結(jié)論:微柱凝膠技術(shù)用于O型血孕婦產(chǎn)前IgG抗體效價檢測，操作方便簡單，可為新生兒溶血疾病的提早預(yù)防提供更多理論依據(jù)。

微柱凝膠法;O型血;孕婦;IgG抗體效價檢測

新生兒溶血屬于臨床常見疾病，主因?yàn)槟笅胙筒缓?，即母親體內(nèi)與新生兒紅細(xì)胞抗原不合的IgG性質(zhì)的血型抗體進(jìn)入到新生兒體內(nèi)最終出現(xiàn)的同種被動免疫性疾?。?］，會造成胎兒早期流產(chǎn)，新生兒水腫、貧血、肝脾腫大等，威脅到嬰兒生命。近幾年，隨著臨床醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，微柱凝膠法在血型血清的檢測中得到了廣泛應(yīng)用［2］，其能較準(zhǔn)確的檢測出新生兒溶血疾病，更利于早知道、早預(yù)防、早治療。本文隨機(jī)選取了139例O型血孕婦使用微柱凝膠法進(jìn)行產(chǎn)前IgG抗體效價檢測，最終結(jié)果匯報(bào)如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選擇2014年2月～2015年9月太原市第八人民醫(yī)院接診的O型血孕婦139例作為本次產(chǎn)前IgG抗體效價檢測對象，年齡21～40歲，平均(31.5±1.7)歲，孕周為17～37周，平均(30.1±1.3)周，夫妻血型為O-A組合50例、O-B組合48例、ABO組合41例;所有孕婦均無輸血史，無其他嚴(yán)重并發(fā)癥，無精神異常，均符合本次臨床研究調(diào)查相關(guān)要求。

1.2 使用材料

微柱凝膠試劑為長春博迅生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的不完全抗體檢測卡?？谷梭w球蛋白試劑由上海血液生物醫(yī)藥公司提供。0.2 mol/L巰基乙醇(2-Me)由長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供，微柱凝膠卡專用孵育器則由長春博德生物技術(shù)有限公司提供。

1.3 方法

傳統(tǒng)抗人球蛋白法檢測:按照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第3版完成整個操作。

微柱凝膠法檢測:先取200 μL待檢血清與等量2-Me混合，再取6支10 mm×75 mm試管，分別編號為①-⑥，向第①管中添加適量PBS緩沖液150 μL，余下的5支試管則分別加入600 μL PBS緩沖液，并將已孵育好的血清與2-Me混合液從37℃水浴箱內(nèi)取出，后取40 μL加入到第②管中，要從第②管內(nèi)取600 μL加至第③管內(nèi)，依次按照1∶64、1∶128、1∶256、1∶512、1∶1 024的比例稀釋，后將已稀釋號的濃度不同的樣品置于在Diana處理系統(tǒng)內(nèi)，并向其中不斷加入A/B標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞，后打開電腦將微注凝膠Coombs卡編號，使其掃描記錄到計(jì)算機(jī)處理系統(tǒng)中。機(jī)器自動加樣，加樣結(jié)束后，37℃孵育15 min左右，并按照4 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心約10 min，電腦自動判讀并打印結(jié)果。

1.4 判定標(biāo)準(zhǔn)

經(jīng)典抗人球蛋白法根據(jù)《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》中的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果判定。而微柱凝膠抗人球蛋白法則根據(jù)公司提供的說明書完成結(jié)果判讀。結(jié)果以顯微鏡觀察到“1+”凝集的最高稀釋度為抗體效價，并以1∶64效價作臨床參考界值，IgG抗A(B)效價≥64判定為陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本次檢測結(jié)果采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料以百分率表示，采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 139例采用不同檢測方法檢測結(jié)果比較

139例O型血孕婦采用微柱凝膠法檢測IgG抗體效價后結(jié)果表明，O-A組合的50例標(biāo)本中IgG抗A異常結(jié)果為26例，占該組合總?cè)藬?shù)的52%;O-B組合的48例標(biāo)本中IgG抗B異常結(jié)果為15例，占該組合總?cè)藬?shù)的31.25%;ABO組合的41例標(biāo)本中IgG抗ABO異常結(jié)果為13例，占該組合總?cè)藬?shù)的31.7%，異?？?cè)藬?shù)為54例，占該組總?cè)藬?shù)的38.84%，后均經(jīng)病理證實(shí)，診斷準(zhǔn)確率100%。而采用傳統(tǒng)抗人球蛋白法檢測IgG抗體效價后結(jié)果表明，O-A組合的50例標(biāo)本中IgG抗 A異常結(jié)果為 19例，占該組合總?cè)藬?shù)的30.38%，O-B組合的48例標(biāo)本中IgG抗B異常結(jié)果為11例，占該組合總?cè)藬?shù)的22.91%，ABO組合的41例標(biāo)本中IgG抗ABO異常結(jié)果為10例，占該組合總?cè)藬?shù)的24.39%;異常總?cè)藬?shù)為40例，占該組總?cè)藬?shù)的28.77%，診斷準(zhǔn)確率為74.07%?？梢姡瑯拥?39例患者采用不同檢方法檢測IgG抗體效價異常結(jié)果比較有差異(χ2=16.0，P＜0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 139例O型血患者抗體效價與新生兒溶血發(fā)生率關(guān)系分析

139例采用微柱凝膠法檢測的O型血孕婦中，抗A抗體效價在≤1∶32、1∶61、1∶128、1∶256、1∶512、1∶1 024時，新生兒溶血發(fā)生率依次為 1(2%)、3 (11.53%)、4(15.38%)、5(19.23%)、6(23.07%)、7(26.92%);抗B抗體效價在≤1∶32、1∶61、1∶128、1∶256、1∶512、1∶1 024時，新生兒溶血發(fā)生率依次為1 (2.08%)、1(2.08%)、2(4.16%)、2(4.16%)、3(6.25%)、6(12.5%);抗ABO抗體效價在≤1∶32、1∶61、1∶128、1∶256、1∶512、1∶1 024時，新生兒溶血發(fā)生率依次為0(0%)、1(2.43%)、2(4.87%)、2(4.87%)、3 (7.31%)、5(12.19%)。從該結(jié)果可看出，在O型血孕婦抗體效果不斷升高的同時，發(fā)生新生兒溶血的幾率更大。由此可見，抗體效價檢測在新生兒溶血的防治中意義重大。

3 討論

隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，新生兒溶血病的診出率逐日升高，主要因O型血孕婦血清內(nèi)不僅有IgG血型抗體，還包括免疫性血型抗體，相對分子質(zhì)量小，絕大部分孕婦含胎兒血量較少，僅為0.1～0.2 mL，雖然母體產(chǎn)生免疫性抗體，但極少引起新生兒溶血，因?yàn)槟阁w抗體被胎兒血漿與組織內(nèi)的血型物質(zhì)相結(jié)合，避免了抗體對紅細(xì)胞作用［3］。另外，胎兒細(xì)胞表層結(jié)合抗體數(shù)量相當(dāng)少，基本不會引起明顯溶血癥狀，僅表現(xiàn)出血型不合。但如果胎盤絨毛膜破損，一定量的胎兒紅細(xì)胞將直接進(jìn)入母體，會對母體造成極大刺激，母體會產(chǎn)生更多量的IgG血型抗體，透過胎盤進(jìn)入胎兒循環(huán)，出現(xiàn)同種免疫反應(yīng)，最終導(dǎo)致新生兒紅細(xì)胞破壞所致的溶血［4］。孕婦產(chǎn)前做好IgG抗體效價檢測能夠盡早防治新生兒溶血，降低新生兒死亡率。臨床O型血孕婦產(chǎn)前IgG抗體效價檢測的方法較多，但不同檢測方法最終的結(jié)果不同。

微柱凝集技術(shù)屬于新興的血型血清檢測技術(shù)，主要是通過特定化學(xué)物質(zhì)(如葡萄糖等)制作成微型凝膠柱，并利用凝膠分子篩本身作用來增強(qiáng)試驗(yàn)特異度與敏感度，純度與濃度均較高，較容易捕獲抗原。此外，微柱凝膠試驗(yàn)密度梯度液層能夠洗滌紅細(xì)胞，避免雜蛋白帶來干擾，最終暴露出靶抗原，微小玻璃層能讓凝集紅細(xì)胞更容易判斷，檢測準(zhǔn)確率更高［5］。該技術(shù)最早是由Lappierre博士發(fā)明［6］，通過臨床應(yīng)用不斷改進(jìn)與完善，現(xiàn)已是成熟的檢測技術(shù)。而不少關(guān)于微柱凝膠技術(shù)用于孕婦產(chǎn)前ABO血型IgG抗體效價檢驗(yàn)的文獻(xiàn)資料［7］結(jié)果均表明，微柱凝膠技術(shù)有相當(dāng)強(qiáng)的敏感性，更易于判讀，更能保存，標(biāo)準(zhǔn)化程度更高。但在檢驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，因受方法學(xué)等原因，在操作中血漿與紅細(xì)胞二者的添加順序，是使用生理鹽水還是使用BPS液來完成血清稀釋等試驗(yàn)方法學(xué)存在的差別等多種原因，反應(yīng)中，血漿內(nèi)有抗體成分，加入反應(yīng)體系后更易分散于介質(zhì)內(nèi)，更易與后添加的紅細(xì)胞快速結(jié)合，能夠增強(qiáng)抗體檢出率。本研究中也是先取患者血清，在添加2-Me，并以血清稀釋度1∶64作臨界值，若母親血清內(nèi)IgG型抗-A(抗-B)抗體效價≥1∶64，則認(rèn)為該嬰兒有患上新生兒溶血的可能，若抗體小家≥1∶128，則表明嬰兒患上溶血病的幾率相當(dāng)高，若母親血清內(nèi)IgG型抗-A(抗-B)抗體效價≥1∶128，則表明極可能已患上了溶血病，以此類推，抗體效價比率越高，新生兒情況越不樂觀，在此種預(yù)設(shè)下，采用微柱凝聚技術(shù)完成的O型血孕婦IgG抗體效價檢測結(jié)果更準(zhǔn)確，這也是本研究的重點(diǎn)所在。而本次研究將微柱凝集技術(shù)與傳統(tǒng)抗人球蛋白法技術(shù)先后應(yīng)用到相同的O型血孕婦IgG抗體效價檢測中，結(jié)果表明:139例O型血孕婦采用微柱凝膠法檢測IgG抗體效價，異常總?cè)藬?shù)為54例，占該組總?cè)藬?shù)的38.84%，后均經(jīng)病理證實(shí)，診斷準(zhǔn)確率100%;而采用傳統(tǒng)抗人球蛋白法檢測IgG抗體效價，異?？?cè)藬?shù)為40例，占該組總?cè)藬?shù)的28.77%。充分說明微柱凝膠法優(yōu)于傳統(tǒng)法，且已完全克服了傳統(tǒng)試管法使用中不得不多次洗滌細(xì)胞所致的繁瑣、費(fèi)時等不足。研究中也發(fā)現(xiàn)O型血孕婦抗體效價不斷升高的同時，發(fā)生新生兒溶血的幾率更大。從這些數(shù)據(jù)值不難看出，微柱凝膠技術(shù)敏感性更高，結(jié)果更準(zhǔn)確，且操作簡單、方便，能夠準(zhǔn)確評估出胎兒妊娠期免疫性溶血病發(fā)生幾率。不過在研究也發(fā)現(xiàn)，新生兒溶血發(fā)生也并非僅與母體血清內(nèi)IgG抗A(B)效價相關(guān)，還會受到IgG亞類、胎兒紅細(xì)胞抗原強(qiáng)弱以及胎盤IgG抗體等多因素的影響，若IgG抗體類別屬于IgG2或IgG4，基本不會發(fā)生新生兒溶血，但如已結(jié)合IgG1或IgG3，則極容易發(fā)生新生兒溶血。因此，臨床醫(yī)生需高度重視夫婦血型不合的孕婦產(chǎn)前IgG抗A(B)效價檢測工作，一旦發(fā)現(xiàn)IgG抗體效價偏高人群，需給予全程動態(tài)檢測，并及時采取可行防治措施，將損害程度降至最低，最終實(shí)現(xiàn)“優(yōu)生優(yōu)育”目標(biāo)。

［1］ 張建平，蘇良香.微柱凝膠法檢測O型血孕婦血清IgG抗A(B)效價的應(yīng)用評價［J］.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，22(19):2694-2696.

［2］ 張 瑩，王曉嵐，彭群新，等.微柱凝膠法與Coombs試驗(yàn)檢測孕婦血清IgG抗A(B)效價的比較［J］.臨床檢驗(yàn)雜志，2010，18 (6):481.

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［4］ 李凌波，王冬倩，陳云聲，等.國產(chǎn)微柱凝膠免疫檢測試劑片檢測孕婦IgG血型抗體效價的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國免疫學(xué)雜志，2008，24(12):1138.

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本文編輯:王 霞

The Application of Micro Column Gel Method on the Detection of IgG Antibody Titer in Type O Blood

WANG Ping
(The Eighth People＇s Hospital of Taiyuan City，Taiyuan 030012，Shanxi，China)

Objective:To summarize the clinical application of micro column gel method in the detection of IgG antibody titer in type O blood.Method:139 cases of pregnant women with type O blood from the obstetrics and gynecology hospital admissions were randomly selected as the research object，who were applied by micro column gel method in detection of IgG antibody titer.Then the same group of patients using traditional anti human globulin was detected，compared with the final detection results.Results:139 patients with type O blood were detected by using micro column gel method.The total number with unusual symptom was 54，which was the total number of 38.84%.The diagnostic accuracy was 100%;the total number with unusual symptom of IgG antibody among the patients detected by traditional anti human globulin was 40，which was the total number of 28.77%.The effect of pregnant women with type O blood was increasing，while the occurrence of neonatal hemolysis is more higher.Conclusion:The micro column gel technique is convenient for the detection of IgG antibody titer in the type O blood pregnant women.It can provide more theoretical basis for early prevention of hemolytic disease of the newborn.

micro column gel method;type O blood;pregnant women;IgG antibody titer detection

R446.6

A

1671-0126(2015)06-0001-03

王 萍，女，主管檢驗(yàn)師，從事臨床檢驗(yàn)工作