黃鵬　黃其春

摘要：目的 研究中藥制劑復(fù)方巖杖膠囊的作用機(jī)制。方法 建立Sl80荷瘤小鼠模型，以環(huán)磷酰胺（CTX）作陽(yáng)性對(duì)照，觀察復(fù)方巖杖膠囊對(duì)荷瘤小鼠的外周血白細(xì)胞變化、抑瘤率、脾臟及胸腺指數(shù)的變化。結(jié)果 復(fù)方巖杖膠囊對(duì)S180荷瘤小鼠經(jīng)CTX化療所致血液中白細(xì)胞降低有拮抗作用（P<0.05），對(duì)小鼠肉瘤S180無(wú)直接抑制作用，對(duì)化療所引起脾臟及胸腺指數(shù)下降未見(jiàn)明顯的改善作用。結(jié)論 復(fù)方巖杖膠囊能提高外周血白細(xì)胞數(shù)量，減輕腫瘤化療引起的骨髓抑制作用。

關(guān)鍵詞：復(fù)方巖杖膠囊；環(huán)磷酰胺；白細(xì)胞

巖黃連（Corydalis saxicola Bunting）是罌粟科紫堇屬植物，主要分布在我國(guó)西南部山區(qū)，具有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力、抗肝炎等作用[1-2]?；⒄龋≒olygonum cuspidatum Sieh. et Zucc.）為蓼科蓼屬多年生草本植物，也具有抗腫瘤、提高免疫力等作用[3-4]。廣西民間以兩藥材為主藥的驗(yàn)方，用于肝炎、肝癌的治療，有一定功效。因驗(yàn)方湯劑極苦，制成復(fù)方巖杖膠囊制劑，以達(dá)到矯味目的；為了解其抗腫瘤效果及作用機(jī)制，進(jìn)行本文研究，報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和瘤株 SPF級(jí)雄性昆明小鼠（KM小鼠），體重18～22 g，廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證：SCXK桂2009-0002。S180小鼠腹水瘤細(xì)胞，中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)提供。

1.1.2藥品與試劑 復(fù)方巖杖膠囊浸膏，課題組自制。注射用環(huán)磷酰胺（批號(hào)：04131201，山西普德藥業(yè)股份有限公司）；注射用生理鹽水（批號(hào)：C114040703，四川科倫藥業(yè)股份有限公司）；RPMI-1640培養(yǎng)基（批號(hào)：Q/SYSME001，北京賽默飛世爾生化制品有限公司）；胎牛血清（批號(hào)：120105，上海依科賽生物制品有限公司）；血細(xì)胞分析儀配套試劑（批號(hào)：63140115A01，桂林優(yōu)利特醫(yī)療電子有限公司）。

1.1.3主要儀器 URIT-3010型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（桂林優(yōu)利特醫(yī)療電子有限公司）；CKX31SF型倒置式生物顯微鏡（日本奧林巴斯公司）；AL204型電子分析天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；HF240型CO2培養(yǎng)箱（香港Heal Force公司）。

1.2方法

1.2.1藥液配制 取注射用環(huán)磷酰胺0.2 g，加入注射用生理鹽水振蕩溶解，取適量稀釋成終濃度為1.2 mg/ml溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

復(fù)方巖杖膠囊混懸液：稱取復(fù)方巖杖膠囊內(nèi)容物（干浸膏）3份，分別置于3個(gè)研缽內(nèi)，加入少量雙蒸水研磨至細(xì)糊狀，吸管吸取移至帶刻度的3支離心管內(nèi)，加入雙蒸水至刻度，混勻，制得高、中、低3個(gè)濃度樣品溶液，分別是0.2，0.1，0.05 g/ml。每次使用時(shí)搖勻便可給小鼠灌胃，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2.2動(dòng)物造模 接種S180小鼠腹水瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)2～3代，將該瘤細(xì)胞液離心，棄上清液，加入適量生理鹽水，調(diào)整細(xì)胞濃度至1×107個(gè)/ml，取0.5 ml細(xì)胞懸液注射于小鼠腹腔內(nèi)，6～7 d可形成乳白色腹水。

實(shí)體瘤模型建立：昆明小鼠腹腔接種S180小鼠腹水瘤細(xì)胞6 d后，頸椎脫臼處死；75%酒精消毒小鼠腹部皮膚，從已消毒部位剪開(kāi)腹部；一次性無(wú)菌吸管吸取小鼠腹腔內(nèi)乳白色腹水，置無(wú)菌的刻度離心管內(nèi)，按腹水和生理鹽水體積為1∶4加入生理鹽水，用吸管反復(fù)輕柔吹打、混勻；取樣計(jì)算細(xì)胞數(shù)，再稀釋細(xì)胞濃度至3×107個(gè)/ml（吸取后的過(guò)程在冰盒上操作）。皮下接種前均輕輕搖勻，保證每只小鼠接種瘤細(xì)胞數(shù)基本一致。取腹水、稀釋與皮下接種過(guò)程均嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作原則，時(shí)間控制在1 h內(nèi)[5]。

1.2.3動(dòng)物分組與給藥 昆明小鼠隨機(jī)分為7組，每組12只；稱重并記錄后，除空白組外，每只小鼠右側(cè)腋窩皮下接種瘤細(xì)胞混懸液0.2 ml；接種24 h后，定時(shí)給藥，連續(xù)10 d。即：①空白組；②模型組；③CTX組：30 mg/kg；④單純復(fù)方巖杖膠囊組（樣品組）：3 g/kg；⑤CTX加復(fù)方巖杖膠囊低劑量組（CTX+低樣組）：30 mg/kg +1.5 g/kg；⑥CTX加復(fù)方巖杖膠囊中劑量組（CTX+中樣組）：30 mg/kg+3 g/kg；⑦CTX加復(fù)方巖杖膠囊高劑量組（CTX+高樣組）：30 mg/kg+6 g/kg。環(huán)磷酰胺給藥方式為腹腔注射，每只小鼠給藥容積和用藥量分別為：0.6 ml/20 g和30 mg/kg，1次/2 d。復(fù)方巖杖膠囊的給藥方式為灌胃，每只小鼠給藥容積為：0.6 ml/20 g，高、中、低3個(gè)劑量組中小鼠用藥量分別為6 g/kg、3 g/kg、1.5 g/kg，1次/d?？瞻捉M和模型組給予等容積蒸餾水。

1.2.4檢測(cè)指標(biāo) ①每天稱每組小鼠進(jìn)食食物質(zhì)量；②停藥次日稱重并摘除眼球取血，檢測(cè)白細(xì)胞數(shù)量；③解剖剝離瘤塊，稱瘤質(zhì)量，按下面公式計(jì)算抑瘤率：腫瘤抑制率（%）=（模型組平均瘤重？實(shí)驗(yàn)組平均瘤重）/模型組平均瘤重×100%；④取胸腺、脾臟，稱質(zhì)量，按下面公式計(jì)算脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)：脾臟指數(shù)=小鼠脾臟重量（mg）/小鼠體重（g）；胸腺指數(shù)=小鼠胸腺重量（mg）/小鼠體重（g）。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)結(jié)果以（x±s）表示，采用單因素方差分析法。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1復(fù)方巖杖膠囊對(duì)S180荷瘤小鼠CTX使用后免疫指標(biāo)的影響 CTX組的Sl80荷瘤小鼠在使用CTX后，其白細(xì)胞數(shù)量、脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)明顯下降，與模型組相比，有顯著性差異（P<0.05，P<0.01）；樣品組小鼠的白細(xì)胞數(shù)量比模型組高，有顯著性差異（P<0.05）；CTX+低組的白細(xì)胞數(shù)量比單用CTX數(shù)量有顯著升高（P<0.05）；單用CTX與CTX加復(fù)方巖杖膠囊各組比較，脾臟及胸腺指數(shù)未見(jiàn)顯著性差異，見(jiàn)表1。

2.2復(fù)方巖杖膠囊對(duì)Sl80荷瘤小鼠CTX使用后瘤重的影響 樣品組的抑瘤率15.8%；與模型組相比，其余各組均能顯著降低瘤重（P<0.01）。此結(jié)果表明，本品在小鼠體內(nèi)未顯示抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用，見(jiàn)表2。

3討論

巖黃連是民間習(xí)用藥材，廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)已有收錄，主要用于肝癌、肝炎治療[7]。早期研究報(bào)告，巖黃連總生物堿對(duì)小鼠肉瘤Sl80、艾氏腹水癌及肝癌腹水癌、大鼠肉瘤256均有一定的抑制作用，其中對(duì)小鼠肉瘤細(xì)胞Sl80的作用最為敏感，對(duì)瘤細(xì)胞呼吸亦有一定的抑制作用[1-8]。巖黃連總生物堿可顯著提高小鼠細(xì)胞的溶血空斑值、能增強(qiáng)小鼠的遲發(fā)型超敏反應(yīng)、能在體外增強(qiáng)同種異型小鼠脾細(xì)胞的混合培養(yǎng)反應(yīng)和增強(qiáng)有絲分裂原刺激脾細(xì)胞的增殖反應(yīng)，另外巖黃連總生物堿能增強(qiáng)T細(xì)胞產(chǎn)生IL-2和IFN-y的水平[9]。另有報(bào)告，巖黃連總堿對(duì)Tca8113細(xì)胞增殖具有明顯抑制作用[10]。因此可推測(cè)，巖黃連抗肝炎可能與其巖黃連總堿的免疫調(diào)節(jié)有關(guān)，也是對(duì)腫瘤有治療作用的基礎(chǔ)。

虎杖是常用中藥材，其主要有效成分有白藜蘆醇和大黃素，兩者均有一定的抗腫瘤和護(hù)肝作用。白藜蘆醇對(duì)小鼠肝癌、胃癌細(xì)胞株的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用[4，11-12]；大黃素對(duì)小鼠肉瘤S180、小鼠肝瘤、小鼠乳腺癌 、小鼠艾氏腹水癌、小鼠淋巴肉瘤、小鼠黑色素瘤及大白鼠瓦克癌等七個(gè)瘤株的治抑制率都在30%以上[3]?；⒄葷饪s片能夠抑制環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的小鼠白細(xì)胞降低，對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性肝損傷有一定的保護(hù)作用[13-14]。

在本文中，以巖黃連、虎杖為主藥的復(fù)方巖杖膠囊，對(duì)S180荷瘤小鼠經(jīng)CTX化療后血中白細(xì)胞降低具有拮抗作用；對(duì)S180荷瘤小鼠的抑瘤率只有15.8%；對(duì)化療所引起脾臟指數(shù)及胸腺指數(shù)下降未見(jiàn)明顯的改善作用。亦即兩種主藥各自均有抗腫瘤、提高免疫作用，民間驗(yàn)方有效，但本文觀察到復(fù)方巖杖膠囊只有部分作用。原因可能是制劑中主藥有效成分含量偏少、動(dòng)物腫瘤模型選擇不合適和觀察指標(biāo)不全等。為明確復(fù)方巖杖膠囊是否具有臨床使用價(jià)值，以及作用機(jī)制，還需更進(jìn)一步研究。

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編輯/張燕