單吉蘋 王雙力

(1哈爾濱市第一醫(yī)院 黑龍江 哈爾濱 150000;2武警黑龍江總隊醫(yī)院 黑龍江 哈爾濱 150076)

miniVIDAS在檢測生殖和泌尿系沙眼衣原體感染中的應用探討

單吉蘋1王雙力2

(1哈爾濱市第一醫(yī)院 黑龍江 哈爾濱 150000;2武警黑龍江總隊醫(yī)院 黑龍江 哈爾濱 150076)

目的：應用miniVIDAS對生殖和泌尿系中尿液和分泌物樣本進行沙眼衣原體檢測，從而論證其敏感性和特異性。方法：收集疑似或確診泌尿生殖道感染患者尿液及分泌物標本共490份。應用miniVIDAS對尿液和分泌物樣本進行沙眼衣原體檢測，結果與實時熒光定量聚合酶鏈反應(realtime PCR)進行比較，從而評價其在尿液和分泌物標本檢測中的敏感性和特異性。結果：1、拭子樣本檢測結果:應用miniVIDAS共檢出20份陽性樣本，經與real-time PCR的結果比對，其結果高度一致;對280份陰性結果與real-time PCR的結果比對，其結果也完全一致。從而說明miniVIDAS在檢測拭子樣本的敏感度、特異度等方面其結果均達到100%。2、尿液樣本檢測結果:應用miniVIDAS共檢出30份陽性樣本，與real-time PCR結果比對后，10份為真陽性，20份為假陽性。160份陰性樣本經比后全部一致。經過一致性分析，miniVIDAS檢測尿液樣本的敏感度為100%，特異度為87.8%。結論：應用miniVIDAS對生殖和泌尿系中尿液和分泌物樣本進行沙眼衣原體檢測與real-time PCR的結果未達到高度一致?？赡苁怯捎谀蛞褐泻信c沙眼衣原體抗原非常相似的其他微生物，從而與固相載體的抗體進行非特異性結合，而令尿液檢測衣原體的特異度偏低，說明miniVIDAS對尿液樣本沙眼衣原體感染的檢測并不適合做為篩選實驗。

miniVIDAS;沙眼衣原體;尿液;分泌物

本實驗方法是通過將法國生物梅里埃miniVIDAS的酶聯(lián)熒光免疫法所得結果與實時熒光定量聚合酶鏈反應(real-time PCR)進行比較，從而評價其在尿液和分泌物標本檢測中的敏感性和特異性。

一、材料與方法

1.標本來源：2014年6月至12月由哈爾濱市第一醫(yī)院檢驗科收集的疑似或確診泌尿生殖道感染患者尿液及分泌物標本共490份。其中男性拭子樣本150份，女性拭子樣本150份。男性首段尿樣本110份，女性首段尿樣本80份。

1.1 標本采集方法：

1.1.1 尿液樣本采集∶采集前先用生理鹽水清潔尿道口，采集前至少2h不要排尿，用高壓無菌試管收集10-00ml的首段尿液;取離心沉淀物.

1.1.2 拭子樣本采集：首先在采樣前先用生理鹽水清洗男性尿道口和女性宮頸外分泌物，用專用棉拭子(或宮頸刷)于尿道口或宮頸口取尿道分泌物或宮頸口分泌物，密閉送檢;

2.儀器與試劑：

2.1 儀器：法國生物梅里埃公司miniVIDAS全自動熒光酶免疫分析儀、Roche LightCycler2.0檢測分析儀、高速低溫離心機，生物安全柜，恒溫水浴箱，

2.2 試劑：miniVIDAS配套試劑盒和達安基因沙眼衣原體核酸檢測試劑盒。

3.使用Roche LightCycler2.0檢測分析儀檢測衣原體：

取PCR反應管，分別加入待測標本及陰陽性臨界值質控品 2μl，6500rpm離心，之后將各反應管按順序放入圓形卡盤，按照儀器操作程序進行PCR擴增;調整熒光數值(Fluorescene)為F1/F2，調整噪聲容限，使陰性質控品Ct值為40，臨界陽性質控品Ct為32～34，強陽性質控品 Ct為18～20，最后記錄儀器自動分析計算出的Ct值。

4.使用miniVIDAS檢測衣原體：

實驗開始前先將固相載體和試劑條置于室溫環(huán)境下15min，然后在裝有樣本的試管中加入2mlVIDAS樣本處理液，室溫30min后將試管震蕩混勻，然后置于95℃水30min。冷卻混勻后在試劑條樣本孔內加入350微升，上機檢測。同時設S1為標準、C1為陽性對照、C2為陰性對照。結果判定：當TV＜60為陰性;60＜TV＜80為臨界;TV＞80為陽性。

二、結果

1.拭子樣本檢測結果：應用miniVIDAS對本實驗中300份拭子樣本所進行的檢測中，共檢出20份陽性樣本，其中男性5份和女性15份，經與real-time PCR的結果比對，其結果完全一致;對280份陰性結果進行比對，其結果也完全一致，從而說明miniVIDAS在檢測拭子樣本的敏感度、特異度等方面其結果均達到100%。

2、尿液樣本檢測結果：應用miniVIDAS對本實驗中尿液樣本所進行的沙眼衣原體檢測中，共檢出30份陽性樣本，其中男性10份和女性20份，經與real-time PCR的結果比對，男性中3份為真陽性，7份為假陽性;女性中7份為真陽性，13份為假陽性。陰性樣本160份與real-time PCR結果全部一致。經過一致性分析，miniVIDAS檢測尿液樣本的敏感度為100%，特異度為87.8%。從而說明兩者的結果未達到高度一致。

三、討論

本實驗中，尿液樣本完全由患者自行留取，很大程度上并不能保證取得的是首段尿，男性拭子標本是自行留取，而女性宮頸拭子樣本也是由不同的醫(yī)生取得，因此取樣也不能確保相對一致性，本次研究總計只取得了50份陽性樣本，衣原體的陽性率偏低，故此可能會影響miniVIDAS敏感度的準確性。應用miniVIDAS檢測尿液樣本的敏感度為100%，特異度為87.8%，可能是由于尿液中含有與沙眼衣原體抗原非常相似的其他微生物，從而與固相載體的抗體進行非特異性結合，而令尿液檢測衣原體的特異度偏低，說明miniVIDAS對尿液樣本沙眼衣原體感染的檢測并不適合做為篩選實驗。

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